Summary
Зубной фолликул содержит эпителиальную популяцию и мезенхимальные клетки. Эпителиальная популяция была выбрана из гетерогенной популяции клеток зубных фолликулов, обеспечивая отличную культуральную среду. Эпителиальные клетки выжили и образовали колонии в свободной от сыворотки среде.
Abstract
Зубной фолликул (DF) был собран во время удаления пораженного третьего моляра челюстно-лицевым хирургом. Изоляция эпителиальных клеток проводилась в день сбора урожая DF. DF промывали три раза DPBS, а затем рассасывали тканевыми ножницами до тех пор, пока ткань не приобрела пульповидную или мягкую консистенцию. Одноклеточные популяции гранулировали центрифугированием и промывали кератиноцитарной сывороточной средой. Гетерогенные клеточные популяции были распределены в культуральной чашке. Для отбора эпителиальных клеток использовалась безымянная среда кератиноцитов. Культуральную среду меняли ежедневно до тех пор, пока не наблюдалось плавающего мусора или мертвых клеток. Эпителиальные клетки появились в течение 7-10 дней после распределения клеточной популяции. Эпителиальные клетки выживали в среде, свободной от сыворотки, в то время как α-модификация минимальной существенной среды, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, позволяла пролиферировать клетки мезенхимального типа. DF является тканевым источником для выделения зубных эпителиальных клеток.
Целью данного исследования было установление метода выделения эпителиальных клеток из ДФ человека. Пародонтальная связка (PDL) использовалась для выделения эпителиальных клеток зубов человека. Получение эпителиальных клеток из человеческого PDL не всегда успешно из-за небольшого объема ткани, что приводит к низкому количеству эпителиальных клеток. DF имеет больший объем, чем PDL, и содержит больше ячеек. DF может быть тканевым источником для первичной культуры зубных эпителиальных клеток человека. Этот протокол проще и эффективнее, чем метод изоляции с использованием PDL. Приобретение эпителиальных клеток зубов человека может способствовать дальнейшим исследованиям эпителиально-мезенхимальных взаимодействий зубов.
Introduction
Формирование зуба начинается с инвагинации эпителия полости рта1. В зависимости от стадии развития зуба, эпителий полости рта имеет разные названия, включая эпителий внутренней и наружной эмали, шейную петлю и эпителиальную корневую оболочку Гертвига (HERS). Эпителиальные компартменты сообщаются с окружающими мезенхимальными клетками. Эпителиально-мезенхимальные взаимодействия регулируют образование зубов и регенерацию тканей. Приобретение зубных эпителиальных клеток, таких как кератиноциты полости рта и эпителиальные клетки корневой оболочки Гертвига (HERSC), имеет решающее значение для изучения эпителиально-мезенхимальных взаимодействий зубов2.
Зубные эпителиальные клетки, полученные от грызунов, выделяются из эпителиальной структуры, такой как HERS. Ли и его коллеги выделили и увековечили HERSC, полученные из моляров крыс, после сбора апикальной части развивающихся зубных микробов у 8-дневных крыс3. HERS отделяли от апикальной ткани при увеличении. Учитывая стадию развития зубов и возраст, сбор HERS у людей почти невозможен из-за этических проблем: развивающийся зубной микроб должен быть удален у маленького ребенка, чтобы собрать человеческую HERS. Незрелые зубные микробы удаляются редко. Эпителиальные клетки зубов человека могут быть выделены из десны и пародонтальной связки (PDL). Клетки, полученные из эпителиальной структуры, участвуют в образовании зубов вместе с мезенхимальными компонентами и могут быть более подходящими для изучения эпителиально-мезенхимальных взаимодействий зубов, чем оральные кератиноциты. Остатки эпителиальных клеток Малассеза (ERM) являются эпителиальными остатками, полученными из HERS, и находятся в небольшом количестве в PDL4. Исследования сообщают об изоляции человеческих HERSC от PDL5. Однако сбор человеческих HERSC из ткани PDL не всегда успешен из-за нехватки эпителиальной популяции в этом месте5,6.
Хотя HERSC, полученные из грызунов, поддерживаются в сывороточных средах3,7, эпителиальные клетки человека, полученные из DF, культивируются без сывороточными средами, аналогичными другим эпителиальным клеткам человека, таким как нормальные эпидермальные кератиноциты человека и нормальные кератиноциты полости рта человека8,9. Это подразумевает физиологические или функциональные различия между зубными эпителиальными клетками грызунов и эпителиальными клетками зубов человека. Понимание механизма, касающегося эпителиально-мезенхимальных взаимодействий зубов, может способствовать развитию клинических применений, включая повторное прикрепление пародонта во время реплантации, регенерацию пародонта при заболеваниях пародонта, регенерацию пульпозно-дентинового комплекса и генерацию биозубов. Учитывая особенности трансляционных исследований, эпителиальные клетки зубов человека могут быть более подходящими, чем зубные эпителиальные клетки грызунов для изучения эпителиально-мезенхимальных взаимодействий.
DF человека представляет собой рыхлую соединительную ткань и часто находится в ретинированном зубе. DF содержит мезенхимальные предшественники10. Однако, насколько нам известно, ни в одном исследовании не сообщалось об изоляции эпителиальных клеток из зубных фолликулов до 2021 года. О и Йи сообщили об изоляции эпителиальных клеток от человеческого DF в 20218 году. Эпителиальный фенотип подтвержден западным блоттингом и морфологическим анализом. Анализ происхождения эпителиальных клеток, полученных из DF, продемонстрировал аналогичные результаты с другими исследованиями. Эпителиальные клетки, полученные из DF, не были ни эндотелиальными, ни кроветворными5,11, и Oh и Yi предложили назвать эти клетки DF-HERSC. DF имеет больший объем, чем PDL, и из DF можно выделить больше эпителиальных клеток. Это усиливает появление эпителиальных колоний и приводит к высокому уровню успеха в сборе эпителиальных клеток из DF. Это исследование предлагает использовать DF в качестве источника ткани для выделения зубных эпителиальных клеток.
В настоящем исследовании одиночные клетки были выделены из DF в соответствии с ранее описанными процедурами10,12. DF содержит гетерогенные клеточные популяции, и несколько типов клеток могут присутствовать на ранней стадии процедуры. Моршек и его коллеги выделили мезенхимальные стволовые клетки, полученные из DF10. Мы предположили, что DF содержит эпителиальные клетки и что только эпителиальные клетки могут выжить в условиях, свободных от сыворотки. Это исследование отличается от исследования Morsczek et al. с точки зрения отбора эпителиальной популяции и ингибирования мезенхимальных клеток. Отбор проводился с использованием кератиноцитарных сывороточных сред (SFM), которая позволяет пролиферацию эпителиальных клеток и ингибирует пролиферацию мезенхимальных клеток. Это исследование было основано на докладе Oh и Yi8. Цель этого исследования состояла в том, чтобы описать детали метода, используемого в этом отчете для выделения эпителиальных клеток из DF человека.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Это исследование было одобрено Советом по институциональному обзору университетской больницы Кён Хи в Кандонге (одобрение IRB no. ХНМЦ 2017-06-009).
1. Соберите DF
ПРИМЕЧАНИЕ: Пациенты давали информированное согласие перед операцией на удаление зрелого или незрелого пораженного третьего моляра. Исключались пациенты со следующим заболеванием: сахарный диабет, гипертония, туберкулез, гепатит, синдром приобретенного иммунодефицита. Беременные женщины также были исключены.
- Урожай DF во время хирургического извлечения пораженных третьих коренных зубов (рисунок 1А).
ПРИМЕЧАНИЕ: Операция была выполнена челюстно-лицевым хирургом полости рта. Для сбора тканей требуется сотрудничество со стоматологом. - Храните DF в фосфатно-буферном физиологическом растворе Dulbecco (DPBS) с 3% пенициллин-стрептомицином при 4 °C перед использованием. Выполните процедуры изоляции в день сбора урожая DF (рисунок 1B).
2. Изолируйте одноклеточные популяции от DF
- Готовят стоковые растворы коллагеназы I типа и протеазы в DPBS таким образом, чтобы конечные концентрации коллагеназы типа I и протеазы составляли 1 мг/мл и 2,4 мг/мл соответственно.
- Подготовьте три промывочные трубки по 50 мл с 20 мл DPBS на трубку. Пометьте тубы как 1, 2 и 3.
- Мойте DF в промывочных трубках последовательно. Удерживайте DF пинцетом и поместите DF в трубку 1. Достаньте DF из трубки 1 и поместите его в трубку 2. Достаньте DF из трубки 2 и поместите его в трубку 3. Аккуратно встряхните DF 10-15 раз в каждом пробирке. После трехкратного мытья поместите DF в 60-миллиметровую культуральную посуду (рисунок 2A).
- Измельчите DF тканевыми ножницами (рисунок 2B). Переложите только небольшую часть в культуральную посуду, чтобы свести к минимуму потерю тканей. Повторяйте резку до тех пор, пока DF не приобретет мякотный или мягкий вид (рисунок 2C).
- Смешайте 1 мл коллагеназы типа I и 1 мл раствора протеазы в конической пробирке объемом 15 мл для получения конечных концентраций 1 мг/мл и 2,4 мг/мл соответственно.
- Переведите измельченный DF в коническую трубку объемом 15 мл с шага 2.5. Осторожно встряхните и высиживайте пробирку в течение 1 ч при 37 °C.
- Добавьте в тюбик 5 мл 0,05% трипсина-ЭДТА, встряхните и инкубируйте трубку в течение 15 мин при 37 °C.
- Готовят кератиноцитарную среду, содержащую кератиноцит sFM 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS). Добавьте 3 мл кератиноцитарной среды в новую коническую трубку объемом 50 мл. Поместите ситечко 40 мкм поверх этой трубки и используйте серологическую пипетку объемом 10 мл, чтобы аспирировать супернатант со стадии 2.6 и пропустить его через ситечко.
ПРИМЕЧАНИЕ: Сведите к минимуму включение остатков переваренных тканей при приеме супернатанта. Удалите остатки тканей с помощью ситечка 40 мкм, чтобы свести к минимуму разрушение. Остатки тканей могут проходить через 70 мкм сетчатые фильтры и препятствовать образованию колоний. FBS в кератиноцитарной среде инактивирует ферменты. - Повторите шаги 2.7 и 2.8.
- Переложите собранную суспензию в коническую трубку объемом 15 мл.
- Центрифугировать коническую трубку объемом 15 мл при 288 × г в течение 3 мин при 4 °С. Удалите супернатант.
ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы избежать случайного удаления гранулированных клеток, которые в основном невидимы. - Добавьте 3 мл кератиноцитов SFM и дважды промойте клетки пипеткой 1 мл с центрифугированием, как на этапе 2.11.
- Поместите одноклеточную популяцию в 60-миллиметровую культуральную чашку с использованием SFM кератиноцитов. Выдерживают культурную посуду с конечным объемом 5 мл в увлажненной атмосфере с содержанием 5% CO2 при 37 °C. Меняйте культуральную среду ежедневно до тех пор, пока не будет обнаружено тканей или клеточного мусора.
ПРИМЕЧАНИЕ: Удалите плавающий мусор в питательной среде путем изменения среды. Отсроченное удаление тканевого мусора или отмерших клеток оказывает неблагоприятное воздействие на первичную культуру. - Исследуйте пластину с шага 2.13, чтобы проверить рост эпителиальных клеток (рисунок 3A).
ПРИМЕЧАНИЕ: Эпителиальные клетки растут в течение 7-10 дней после покрытия одноклеточных популяций. - Расширяют эпителиальные колонии и субкультуру клеток.
- Аспирировать среду и промыть дно культуральной пластинки один раз 3 мл SFM кератиноцитов.
- Добавляют 2 мл клеточной диссоциационной протеазы и инкубируют в увлажненной атмосфере 5% CO2 при 37 °C в течение 3 мин.
ПРИМЕЧАНИЕ: Повторите шаг 2.15.2, если отсоединение клеток неэффективно. - Добавьте 2 мл кератиноцитарной среды к культуральной пластине и перенесите содержимое в коническую трубку объемом 15 мл.
ПРИМЕЧАНИЕ: Добавление большего количества кератиноцитарной среды не требуется, если шаг 2.15.2 повторяется. - Центрифугировать коническую трубку объемом 15 мл при 288 × г в течение 3 мин при 4 °С.
- Удалить надосадочный материал и дважды промыть клеточную гранулу 3 мл SFM кератиноцитов.
- Обложите клетки в 100 мм культуральную чашку с использованием кератиноцитов SFM (конечный объем 10 мл на чашку 100 мм).
- Подготовьте и храните запасы клеток в резервуаре для жидкого азота.
- Собирать клетки, как описано на этапах 2.15.1-2.15.5.
- Распределите клетки на криовиалы в 1 мл морозильной среды (80% кератиноцитов SFM, 10% диметилсульфоксида, 10% FBS).
- Поместите флаконы в морозильную емкость и храните при температуре -80 °C в течение 24 ч.
- Перенесите флаконы из морозильной камеры в резервуар для жидкого азота.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Сбор урожая DF
Операция проводилась челюстно-лицевым хирургом полости рта. Материалы человеческого происхождения, включая фрагмент зуба, десневую ткань и DF, были собраны хирургом (рисунок 1A). DF может быть прикреплен к фрагменту зуба. Челюстно-лицевой хирург сможет идентифицировать DF. Для сбора тканей требуется сотрудничество и общение с хирургом. DF представляет собой мембрановидную ткань неправильной формы. Десневая ткань имеет ороговевшую поверхность и может быть отличима от ДФ. Ткань пульпы находится в пульповой камере и редко отделяется от зубов во время операции. DF хранили в DPBS с 3% пенициллин-стрептомицином при 4 °C перед использованием (рисунок 1B).
Механическая обработка DF
Обломки тканей и кровь были удалены путем промывки DF DPBS. Три конические трубки готовили моющим раствором. После мытья DF переносили на 60-миллиметровую или 100-миллиметровую культуральную посуду (рисунок 2A). ДФ следует измельчать ножницами до тех пор, пока ткань не приобретет мякоть или кашеобразный вид (рисунок 2B, C).
Появление эпителиальной популяции
После покрытия гетерогенных клеточных популяций многие клетки и мелкий мусор плавали в питательной среде. Количество плавающих клеток постепенно уменьшалось с последовательными изменениями среды. Отсроченное изменение среды может вызвать мутную культурную среду. На начальном этапе различные типы клеток появляются на дне чашки культуры, но исчезают при поддержании в кератиноцитах SFM. Клетки с эпителиальной морфологией появляются в течение 7-10 дней после покрытия одноклеточных популяций (рисунок 3А). Количество булыжно-образных клеток колеблется от 1 до 10 в момент появления эпителиальных клеток, которые со временем расширяются в колонии (рисунок 3В).
Процедуру измельчения повторяли для увеличения области контакта DF с 0,05% трипсина-ЭДТА для содействия диссоциации клеток. Из пульпы DF было собрано больше одиночных клеток, чем неповрежденных DF. Липкость пульпы DF указывала на вероятность успешного выделения эпителиальных клеток. Суточные изменения среды предотвратили превращение SFM кератиноцитов в мутные, что важно для выживания эпителиальных клеток.
Рисунок 1: Материалы человеческого происхождения. (A) Материалы человеческого происхождения были собраны челюстно-лицевым хирургом полости рта. Желтая стрелка указывает на DF. Черные стрелки указывают на фрагмент зуба и прикрепленные к зубу мягкие ткани. (B) DF хранили в PBS, дополненном 3% пенициллин-стрептомицином при 4 °C. Процедуры изоляции проводились в течение 24 ч после сбора. Сокращения: DF = зубной фолликул; PBS = фосфатно-буферный физиологический раствор. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Лечение зубных фолликулов. (A) DF был перенесен на 60-миллиметровую культурную посуду после трехкратного мытья DPBS. (B) DF был измельчен тканевыми ножницами. (C) Измельченный DF имел мякотный или кашеобразный вид. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Появление эпителиальных клеток. (А) Клетки с эпителиальной морфологией появляются в течение 7-10 дней после покрытия одноклеточных популяций. (B) Ex vivo расширение эпителиальных клеток, полученных из DF, субкультурой. Шкала стержней = 100 мкм. Аббревиатура: DF = зубной фолликул. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Этот протокол включает в себя критические шаги. Сбор одноклеточных популяций необходим для успешной изоляции эпителиальных клеток из DF. Мы стремились изолировать эпителиальные клетки из DF, основываясь на нашей гипотезе о том, что в DF больше эпителиальных клеток. Процедура измельчения усиливает отслоение и высвобождение клеток из ДФ. Процедура измельчения была улучшена, и измельчение повторялось до тех пор, пока DF не казался пульпозитным, чтобы облегчить высвобождение отдельных клеток. Получение максимального количества одиночных клеток увеличивает вероятность появления эпителиальной популяции. Загрязнение часто происходит во время выделения эпителиальных клеток из DF. Использование сетчатых фильтров 40 мкм сводит к минимуму включение тканевого мусора в одноклеточные популяции, поскольку остатки тканей могут проходить через 70-мкм сетчатые фильтры и ингибировать колонизацию эпителиальных клеток.
Эпителиальные клетки, по-видимому, более уязвимы для определенных сред, чем мезенхимальные клетки, и ежедневное изменение питательной среды также обеспечило чистую среду для появления эпителиальной популяции. Потеря клеток из-за частой смены среды может быть ограничением этого протокола. Тем не менее, ежедневное изменение среды выполнялось после устранения неполадок для этого протокола, и, следовательно, эпителиальные клетки появлялись и расширялись. Задержка изменения среды может повлиять на культуры. Поскольку клеточная гранула после центрифугирования почти невидима, узкий кончик конической трубки объемом 15 мл увеличивает легкость удаления супернатанта без потери клеточной гранулы. Поэтому этот протокол предполагает перенос содержимого конической трубки объемом 50 мл в коническую трубку объемом 15 мл.
DF обеспечивает больший объем ткани и больше одиночных клеток, чем PDL. Следовательно, DF может использоваться вместо PDL в качестве тканевого источника для выделения эпителиальных клеток зубов человека. Отбор и ингибирование типов клеток в DF может осуществляться просто через селективную культуральную среду. SFM индуцирует рост эпителия, тогда как сывороточная среда выбирает мезенхимальные клетки. Эта методология обеспечивает легкий доступ к эпителиальным клеткам зубов человека. Моршек и его коллеги ранее выделили DF-производные мезенхимальные предшественники. Это исследование отличается от них отбором эпителиальных популяций и ингибированием мезенхимальных клеток.
Регуляторная роль зубных эпителиальных клеток при формировании зубов представляет большой интерес в стоматологических исследованиях. Изучение эпителиально-мезенхимальных взаимодействий во время развития зубов может дать ключ к решению клинических проблем13. Предпринята попытка регенерации тканей путем объединения эпителиальных и мезенхимальных компонентов14. Факторы, полученные из эпителиальных клеток зубов, такие как производное эмалевой матрицы, были оценены как терапевтические мишени, направленные на регенерацию пародонта, регенерацию пульпозно-дентинового комплекса и повторное прикрепление пародонта2,15. Комбинация факторов регенерации, включая стволовые клетки, листы эпителиально-мезенхимальных клеток, клеточные факторы и биоматериалы, может генерировать биозубы в случае потери или агенеза зубов16. Гены, ассоциированные с агенезом зубов, такие как гены PAX9, MSX1, AXIN2, EDA, EDAR и WNT10A, являются потенциальными ключевыми регуляторными генами для эпителиально-мезенхимальных взаимодействий17. Кроме того, данные, полученные методом секвенирования следующего поколения из исследований, связанных с агенезом зубов, могут аналогичным образом предложить предполагаемые новые гены-мишени, регулирующие молекулярный контроль во время зубных эпителиально-мезенхимальных взаимодействий.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.
Acknowledgments
Это исследование было поддержано грантами Национального исследовательского фонда Кореи (NRF), финансируемыми корейским правительством (NRF-2017R1C1B2008406 и NRF-2021R1F1A1064350). Д-р Хи-Ён Пэ любезно предоставил DF для первичной культуры.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur 2-Propanol | EMD millipore Co., MA, USA | 1096341011 | 1 L |
| 0.05% trypsin-EDTA | Gibco, Grand island, NY, USA | 25300054 | 100 mL |
| 40 μm cell strainer | Falcon, NC, USA | 352340 | |
| Cell culture dish (100 x 20 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 172958 | Discontinued |
| Cell culture dish (60 x 15 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 150326 | |
| Collagenase type 1 | Gibco, Grand island, NY, USA | 17100017 | 1 g |
| Combi-514R / Refrigerated large capacity centrifuge | Hanil science industrial Co., LTD., Daejeon, South Korea | CB-514R | |
| Conical tube | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 50015 50050 |
15 mL 50 mL |
| Cryogenic vial | Corning Inc., NY, US | 430488 | 2 mL |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich, Missouri, US | D2650-100ml | 100 mL |
| Dispase | Gibco, Grand island, NY, USA | 17105041 | 1 g |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Welgene Inc., Gyengsangbuk-do, South Korea | LB 001-02 | 500 mL |
| Fetal bovine serum | Gibco, Grand island, NY, USA | 16000044 | 500 mL |
| Heraeus BB 15 / CO2 incubator | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 51023121 | |
| Keratinocyte serum-free medium | Gibco, Grand island, NY, USA | 10724-011 | 500 mL |
| MVE CryoSystem 2000 | MVE Biological Solutions Co., GA, USA | CryoSystem 2000 | |
| Nalgene Mr. Frosty Freezing Container | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 5100-0001 | for 1.2-2 mL CryoVials |
| Olympus CKX41 / Inverted cell culture microscope | Olympus Life Science, Waltham, Massachusetts |
22-00723-01 | Discontinued |
| Penicillin-Streptomycin Strep | Gibco, Grand island, NY, USA | 15140122 | 100 mL (10,000 U/mL) |
| Pipet aid XP | Drummond scientific Co., PA, USA | HDR-4-000-201 | |
| Pipetman Classic P1000 | Gilson, Villiers le Bel, France | F123602 | 100-1000 µL |
| Refrigerant | Nihon freezer Co. Ltd., Tokyo, Japan | CLN 540U | ~-80 °C / Discontinued |
| Serological pipet | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 91010 | 10ml |
| TrypLE Express Enzyme (1x), phenol red | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 12605010 | cell dissociation protease |
References
- Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; How the embryo makes teeth. Nature Reviews Genetics. 5 (7), 499-508 (2004).
- Choung, H. W., et al. The effect of CPNE7 on periodontal regeneration. Connective Tissue Research. 60 (5), 419-430 (2019).
- Li, X., et al. Development of immortalized Hertwig's epithelial root sheath cell lines for cementum and dentin regeneration. Stem Cell Research and Therapy. 10 (1), 3 (2019).
- Huang, X. F., Bringas, P., Slavkin, H. C., Chai, Y. Fate of HERS during tooth root development. Developmental Biology. 334 (1), 22-30 (2009).
- Farea, M., et al. Isolation and enhancement of a homogenous in vitro human Hertwig's epithelial root sheath cell population. International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11157-11170 (2013).
- Jung, H. S., et al. Directing the differentiation of human dental follicle cells into cementoblasts and/or osteoblasts by a combination of HERS and pulp cells. Journal of Molecular Histology. 42 (3), 227-235 (2011).
- Fang, J., Tang, L., Liu, X. H., Wen, L. Y., Jin, Y. Changes of the unique odontogenic properties of rat apical bud cells under the developing apical complex microenvironment. International Journal of Oral Science. 1 (1), 26-33 (2009).
- Oh, J. E., Yi, J. K. Isolation and characterization of dental follicle-derived Hertwig's epithelial root sheath cells. Clinical Oral Investigations. 25 (4), 1787-1796 (2021).
- Oh, J. E., Kim, R. H., Shin, K. H., Park, N. H., Kang, M. K. Delta Np63 alpha protein triggers epithelial-mesenchymal transition and confers stem cell properties in normal human keratinocytes. Journal of Biological Chemistry. 286 (44), 38757-38767 (2011).
- Morsczeck, C., et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).
- Nam, H., et al. Expression profile of the stem cell markers in human Hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells. Molecular and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).
- Lee, J. H., et al. Dental follicle cells and cementoblasts induce apoptosis of ameloblast-lineage and Hertwig's epithelial root sheath/epithelial rests of Malassez cells through the Fas-Fas ligand pathway. European Journal of Oral Sciences. 120 (1), 29-37 (2012).
- Wan, A. C. A. Recapitulating cell-cell Interactions for organoid construction - are biomaterials dispensable. Trends in Biotechnology. 34 (9), 711-721 (2016).
- Guo, Y., et al. Are Hertwig's epithelial root sheath cells necessary for periodontal formation by dental follicle cells. Archives of Oral Biology. 94, 1-9 (2018).
- Sugaya, T., Tomita, M., Motoki, Y., Miyaji, H., Kawamami, M. Influence of enamel matrix derivative on healing of root surfaces after bonding treatment and intentional replantation of vertically fractured roots. Dental Traumatology. 32 (5), 397-401 (2016).
- Fong, H. K., Foster, B. L., Popowics, T. E., Somerman, M. J. The crowning achievement: getting to the root of the problem. Journal of Dental Education. 69 (5), 555-570 (2005).
- Bonczek, O., et al. Tooth agenesis: What do we know and is there a connection to cancer. Clinical Genetics. 99 (4), 493-502 (2021).
