Summary
यहां, हम इष्टतम आउटपुट के साथ ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में आंत अम्लीकरण की निगरानी के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। हम पहले ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में आंत अम्लीकरण की निगरानी के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हैं और फिर गैर-मॉडल ड्रोसोफिला प्रजातियों में इसके उपयोग का प्रदर्शन करते हैं।
Abstract
फल मक्खी midgut कई क्षेत्रों के होते हैं, जिनमें से प्रत्येक कोशिकाओं से बना है कि आंत के उचित कामकाज के लिए आवश्यक अद्वितीय शारीरिक कार्यों को पूरा करते हैं। ऐसा ही एक क्षेत्र, तांबा सेल क्षेत्र (सीसीआर), मध्य मिडगट के लिए स्थानीयकृत है और इसमें भाग में, तांबे की कोशिकाओं के रूप में जानी जाने वाली कोशिकाओं के एक समूह का हिस्सा होता है। कॉपर कोशिकाएं गैस्ट्रिक एसिड स्राव में शामिल होती हैं, एक विकासवादी रूप से संरक्षित प्रक्रिया जिसकी सटीक भूमिका को खराब तरीके से समझा जाता है। यह पेपर वयस्क ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर आंत के अम्लीकरण के लिए परख करने के लिए उपयोग किए जाने वाले वर्तमान प्रोटोकॉल में सुधार का वर्णन करता है और दर्शाता है कि इसका उपयोग मक्खियों की अन्य प्रजातियों पर किया जा सकता है। विशेष रूप से, यह पेपर दर्शाता है कि आंत अम्लीकरण मक्खी की पोषण स्थिति पर निर्भर है और इस नई खोज के आधार पर एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। कुल मिलाकर, यह प्रोटोकॉल आंत अम्लीकरण के तंत्र के अंतर्निहित सामान्य सिद्धांतों को उजागर करने के लिए ड्रोसोफिला तांबे की कोशिकाओं का अध्ययन करने की संभावित उपयोगिता को दर्शाता है।
Introduction
कीट आंत में, तांबा कोशिकाएं स्तनधारी पेट के एसिड-उत्पादक गैस्ट्रिक पार्श्विका कोशिकाओं (जिसे ऑक्सींटिक के रूप में भी जाना जाता है) के साथ सेलुलर और कार्यात्मक समानताएं साझा करती हैं। कोशिकाओं का यह समूह आंतों के लुमेन में एसिड छोड़ता है। एसिड स्राव और शरीर रचना विज्ञान का कार्य विकासवादी रूप से संरक्षित है। डिस्चार्ज किए गए एसिड के प्रमुख घटक हाइड्रोक्लोरिक एसिड और पोटेशियम क्लोराइड हैं। कोशिकाओं में एसिड गठन का रासायनिक तंत्र कार्बोनिक एनहाइड्रेज पर निर्भर करता है। यह एंजाइम CO2 और पानी से एक बाइकार्बोनेट आयन उत्पन्न करता है, जो एक हाइड्रॉक्सिल आयन को मुक्त करता है जिसे तब पोटेशियम के बदले में प्रोटॉन पंप के माध्यम से लुमेन में छोड़ दिया जाता है। क्लोराइड और पोटेशियम आयनों को चालकता चैनलों द्वारा लुमेन में ले जाया जाता है जिसके परिणामस्वरूप हाइड्रोक्लोरिक एसिड और पोटेशियम क्लोराइड का गठन होता है, जो गैस्ट्रिक रस का मुख्य घटक है1,2,3,4।
यद्यपि एसिड गठन के तंत्र को अच्छी तरह से समझा जाता है, लेकिन एसिड स्राव को विनियमित करने वाले शारीरिक तंत्र के बारे में बहुत कम जाना जाता है। इस विधि को विकसित करने का लक्ष्य सेलुलर मार्गों को बेहतर ढंग से चित्रित करने में मदद करना है जो एसिड गठन और स्राव का समन्वय करते हैं और आंतों के शरीर विज्ञान और होमियोस्टैसिस की मध्यस्थता में एसिड की भूमिका को निर्धारित करते हैं। इस तकनीक के विकास और उपयोग के पीछे तर्क ड्रोसोफिला और गैर-मॉडल जीवों में आंत अम्लीकरण की प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए एक सुसंगत और विश्वसनीय विधि प्रदान करना है। यद्यपि ड्रोसोफिला मिडगट अम्लीकरण का निर्धारण करने के लिए एक मानक प्रोटोकॉल वर्तमान में मौजूद है2,5,6, कॉपर सेल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते समय जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) मक्खियों में अम्लीकरण की सीमा में महत्वपूर्ण परिवर्तनशीलता देखी गई थी। इस मनाया परिवर्तनशीलता के लिए आधार को समझने और लगातार परिणाम प्राप्त करने के लिए, मानक प्रोटोकॉल के कई पहलुओं को नीचे वर्णित के रूप में अनुकूलित किया गया था।
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Protocol
नोट: मानक प्रयोगशाला लाइन ओरेगन आर एक डब्ल्यूटी नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। सभी मक्खियों को मानक कॉर्नमील-गुड़ माध्यम (गुड़, आगर, खमीर, कॉर्नमील, टेगोसेप्ट, प्रोपियोनिक एसिड और पानी युक्त) पर 12/12 घंटे प्रकाश / अंधेरे सर्कैडियन लय के साथ कमरे के तापमान पर पाला गया था।
1. परख के लिए तैयारी
- सीओ 2 संज्ञाहरण के तहत मादा मक्खियों (0-2 दिन पुरानी, गैर-कुंवारी) को इकट्ठा करें और उन्हें प्रयोगों से पहले कम से कम 3 दिनों के लिए मानक कॉर्नमील भोजन पर ठीक होने की अनुमति दें।
- कमरे के तापमान (~ 23 डिग्री सेल्सियस) पर ~ 24 ज के लिए मक्खियों को भूखा रखें, जिसमें एक प्रयोगशाला पोंछे ऊतक होता है जो विआयनीकृत पानी के ~ 2 मिलीलीटर के साथ भिगोया जाता है।
- ब्रोमोफेनॉल ब्लू (BPB) के साथ फ्लाई फूड को निम्नानुसार तैयार करें:
- माइक्रोवेव में मक्खी के भोजन को पिघलाएं और फिर इसे तब तक ठंडा होने दें जब तक कि यह गुनगुना न हो जाए।
- 1 एमएल गुनगुने खाने में 4% बीपीबी का 1 एमएल मिलाएं और अच्छी तरह से मिलाएं।
- एक पिपेट का उपयोग करके, एक पेट्री डिश के केंद्र में एक एकल बिंदु (~ 200 μL) में BPB युक्त मक्खी भोजन जोड़ें।
2. आंत अम्लीकरण निगरानी परख
- एक पेट्री डिश में भूखे मक्खियों को स्थानांतरित करें जिसमें फ्लाई फूड के एकल डॉट्स (200 μL) होते हैं, जो 2% ब्रोमोफेनॉल ब्लू (बीपीबी) के साथ पूरक होते हैं। मक्खियों को प्रकाश के संपर्क में रहते हुए कमरे के तापमान पर 4 घंटे के लिए चारा बनाने की अनुमति दें।
- 4 घंटे के बाद, मक्खियों को इकट्ठा करें और उन्हें बर्फ पर एनेस्थेटिक करें; शल्य चिकित्सा से उनकी हिम्मत को अलग करें।
- एक स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत संदंश के साथ 1x फॉस्फेट-बफ़र्ड सलाइन (पीबीएस) में सर्जरी करें ( सामग्री की तालिका देखें)। संदंश की एक जोड़ी के साथ वक्ष को पकड़कर आंत को अलग करें और पेट को दूसरी जोड़ी के साथ नीचे खींचें जब तक कि आंत का सीसीआर दिखाई न दे, यह सुनिश्चित करने के लिए ध्यान रखें कि आंत दोनों सिरों पर जुड़ी हुई है।
- आंत के सीसीआर के रंग की जांच करके आंत के अम्लीकरण का निर्धारण करें (चित्रा 1 सी; पीला अम्लीकृत इंगित करता है, और नीला अम्लीकृत नहीं इंगित करता है)।
- केवल उन मक्खियों की गिनती करें जो उनकी हिम्मत में मजबूत बीपीबी धुंधला दिखाते हैं।
- निम्न समीकरण का उपयोग करके प्रतिशत की गणना करें:
अम्लीकृत हिम्मत के साथ मक्खियों का प्रतिशत = अम्लीकृत मक्खियों की संख्या × 100 / (अम्लीकृत मक्खियों की संख्या + गैर-अम्लीकृत मक्खियों की संख्या)
नोट: 0 का प्रतिशत इंगित करता है कि कोई मक्खियों ने अपने आंत को अम्लीकृत नहीं किया, जबकि 100 का प्रतिशत इंगित करता है कि सभी मक्खियों ने अपनी आंत को अम्लीकृत किया।
3. बढ़ते और छवि अधिग्रहण
नोट:: यह चरण प्राप्त करने और आगे के विश्लेषण के लिए संबंधित शर्तों के लिए छवियों को संसाधित करने के लिए अतिरिक्त है क्योंकि नमूने लंबे समय तक संरक्षित नहीं किए जा सकते हैं। इन छवियों का उपयोग किसी भी आंत अम्लता परिमाणीकरण के लिए नहीं किया जा रहा है।
- विच्छेदन के बाद, पीबीएस में नमूनों को एक ग्लास स्लाइड पर माउंट करें।
- एक माइक्रोस्कोप के तहत छवियों को प्राप्त करने के लिए cellSens प्रविष्टि सॉफ्टवेयर का उपयोग कर ( सामग्री की तालिका देखें).
- माइक्रोस्कोप के नीचे तैयार स्लाइड रखें और आईपीस का उपयोग करके नमूने को समायोजित करें।
- कैमरे के लिए शटर खोलने के लिए आईपीस को बंद कर दें।
- कनेक्टकिए गए कंप्यूटर पर सॉफ़्टवेयर खोलें।
- सही उद्देश्य लेंस चुनें, लाइव बटन पर क्लिक करें, और एक्सपोजर समय समायोजन के साथ मानक सेटिंग का चयन करें।
- CCR क्षेत्र पर ध्यान केंद्रित करें और स्नैपशॉट लें।
- स्नैपशॉट छवि विंडो पर राइट-क्लिक करें और इसे एक .tif फ़ाइल के रूप में सहेजें।
- संरेखित करें और फिजी सॉफ़्टवेयर का उपयोग कर छवियों को आगे संसाधित करें।
- फिजी सॉफ़्टवेयर में .tif फ़ाइल आयात करें और असंबंधित पृष्ठभूमि साफ़ करें.
- सीसीआर और अन्य आंत क्षेत्रों को अनुकूलित करने के लिए तीव्रता और इसके विपरीत समायोजित करें।
- स्केल पट्टी जोड़ें और एक .tif फ़ाइल के रूप में सहेजें।
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Representative Results
हमने ओरेगन आर मादा मक्खियों को 20 घंटे से अधिक समय तक भूखा रखा और फिर उन्हें ~ 12 घंटे के लिए बीपीबी (2%) के साथ पूरक भोजन खिलाया, जैसा कि पहले वर्णित है7,8,9,10,11। ब्रोमोफेनॉल ब्लू (बीपीबी) एक पीएच-सेंसिंग डाई है। यह पीएच 3.0 पर पीले से पीएच 4.6 और उससे ऊपर नीले रंग में बदल जाता है। आंत विच्छेदन के बाद, जैसा कि पहले बताया गया था, कुछ मक्खियों को एसिड का उत्पादन करने के लिए पाया गया था जैसा कि आंत के सीसीआर में पीले रंग द्वारा इंगित किया गया था (चित्रा 1 बी)। आश्चर्यजनक रूप से, प्रकाशित परिणामों के विपरीत, कुछ मक्खियों की आंतें नीली थीं, यह सुझाव देते हुए कि वे अपनी हिम्मत को अम्लीकृत करने में विफल रहे थे। इन असंगत परिणामों ने संकेत दिया कि लगातार और व्याख्यायोग्य परिणामों के लिए अनुकूलित करने के लिए प्रोटोकॉल को संशोधित करने की आवश्यकता है।
BPB प्रोटोकॉल को अनुकूलित करने के लिए, दो नए संशोधनों को शामिल किया गया था। सबसे पहले, खिलाने की शुरुआत को बेहतर ढंग से नियंत्रित करने के लिए, मक्खियों को भूखा रखा गया था और फिर एक प्लेट के केंद्र में बीपीबी के साथ भोजन के धब्बों पर रखा गया था (चित्रा 1 ए)। दूसरा, हमने भोजन की शुरुआत के करीब समय बिंदुओं पर आंत अम्लीकरण के लिए एसेसिंग शुरू कर दी। मादा मक्खियों को >20 घंटे के लिए भूखा रखा गया था, एक छोटे से पेट्री-प्लेट क्षेत्र में बीपीबी के साथ फ्लाई फूड प्रदान किया गया था ( चित्रा 1 ए देखें), और 1 घंटे के अंतराल पर हिम्मत को विच्छेदन करते हुए 4 घंटे तक विभिन्न समय बिंदुओं के लिए खिलाने की अनुमति दी गई थी। अम्लीकृत हिम्मत (पीला रंग) और गैर-अम्लीकृत हिम्मत (नीला रंग) की संख्या निर्धारित की गई थी, और आंत अम्लीकरण दिखाने वाली मक्खियों के प्रतिशत की गणना प्रत्येक समय बिंदु (चित्रा 1 बी) के लिए की गई थी। 30 मिनट के भीतर, ~ 20% मक्खियों ने अपनी आंत को अम्लीकृत कर दिया था। एक घंटे के बाद, ~ 40% हिम्मत ने अम्लीकरण के सबूत दिखाए, जबकि खिलाने के 2 घंटे और 3 घंटे के बाद, अम्लीकृत हिम्मत का प्रतिशत क्रमशः ~ 60% और ~ 70% तक बढ़ गया (चित्रा 1 बी)। यह इंगित करता है कि समय के साथ आंत अम्लीकरण दिखाने वाली मक्खियों के प्रतिशत में वृद्धि हुई है। लगभग 90-95% हिम्मत को अम्लीकृत किया गया था जब मक्खियों को 4 घंटे (चित्रा 1 बी) के लिए खिलाया गया था। हमने बाद के प्रयोगों के लिए 4 ज फीडिंग के इस अनुकूलित प्रोटोकॉल का उपयोग किया।
खिलाने के प्रभाव के अलावा, तापमान के प्रभाव की जांच की गई थी जिस पर आंत अम्लीकरण पर मक्खियों को उठाया गया था। मक्खियों को 23 डिग्री सेल्सियस और 30 डिग्री सेल्सियस पर पाला गया था, और मादा मक्खियों को ~ 20 घंटे के लिए भूखा रखा गया था। मक्खियों को तब 4 घंटे के लिए बीपीबी के साथ पूरक फ्लाई फूड खिलाया गया था, और आंत अम्लीकरण का प्रतिशत ऊपर वर्णित के रूप में निर्धारित किया गया था। हमने इन दो तापमानों (चित्रा 1 सी) के लिए आंत अम्लीकरण में कोई अंतर नहीं देखा, यह सुझाव देते हुए कि तापमान, खिलाने के विपरीत, आंत अम्लीकरण को प्रभावित नहीं करता है।
गैर मॉडल जीवों के लिए आंत अम्लीकरण प्रोटोकॉल प्रदर्शन
ड्रोसोफिला प्रजातियों को लाखों वर्षों में फाइलोजेनेटिक रूप से अलग किया जाता है ( चित्रा 2 ए देखें)। इस विशाल अवधि में, उन्होंने विभिन्न आवासों और आहारों के लिए अनुकूलित किया है12, इस संभावना को बढ़ाते हुए कि कुछ प्रजातियां डी मेलानोगास्टर के समान तरीके से अपनी आंत को अम्लीकृत नहीं कर सकती हैं। हमने D. melanogaster (फल), D. sechecllia (morinda fruit), D. erecta (pandanus fruit), D. pseudoosubcura & D. virilis (plant sap), और D. mojavensis (cactus fruits) (Figure 2B) का उपयोग किया। यह प्रदर्शित करने के लिए कि इस प्रोटोकॉल का उपयोग अन्य ड्रोसोफिला प्रजातियों के लिए किया जा सकता है, इन प्रजातियों को 4 घंटे के लिए बीपीबी के साथ पूरक फ्लाई फूड्स खिलाया गया था, और आंत अम्लीकरण का प्रतिशत ऊपर वर्णित के रूप में निर्धारित किया गया था। परीक्षण की गई सभी प्रजातियों के लिए मजबूत आंत अम्लीकरण देखा गया था (चित्रा 2 बी)। इस परिणाम से पता चलता है कि आंत का अम्लीकरण विभिन्न ड्रोसोफिला प्रजातियों के बीच विकासवादी रूप से संरक्षित है और यह प्रोटोकॉल आसानी से अन्य जीवों के लिए लागू किया जा सकता है।
चित्रा 1: आंत अम्लीकरण की निगरानी. (ए) खिला क्षेत्र की योजनाबद्ध ड्राइंग। नीला बिंदु ब्रोमोफेनोल नीले (एक पीएच-इंगित करने वाली डाई) के साथ फ्लाई फूड का प्रतिनिधित्व करता है। अन्य धब्बे फल मक्खियों का प्रतिनिधित्व करते हैं। (बी) 4 घंटे से अधिक की विभिन्न अवधियों के लिए खिलाए गए आंत अम्लीकरण को दर्शाने वाली मक्खियों के प्रतिशत का ग्राफिकल प्रतिनिधित्व। एक अम्लीकृत आंत और एक गैर-अम्लीकृत आंत की प्रतिनिधि आंत छवियां। लाल तीर मिडगट के तांबा कोशिका क्षेत्र में अम्लीय रिलीज को इंगित करता है। एन = 4 प्रयोगों, 25-30 मादा प्रति प्रयोग मक्खियों. स्केल बार = 500 μm प्रत्येक. तारांकन नियंत्रण समूह (एक तरफा एनोवा, एक Bonferroni परीक्षण के बाद) * पी < 0.05 से महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं; ** पी < 0.01; पी < 0.0001. (C) मक्खियों को 23 °C या 30 °C पर 4 घंटे के लिए BPB के साथ फ्लाई फूड खिलाया गया था। आंत अम्लीकरण दिखाने वाली मक्खियों का प्रतिशत (%)। एन = 4 प्रयोगों, 25-30 मादा प्रति प्रयोग मक्खियों (गैर पैरामीट्रिक मान-व्हिटनी यू परीक्षण और विलकॉक्सन रैंक-योग परीक्षण के बाद unpaired टी-परीक्षण के बाद। संक्षिप्त नाम: एनएस = महत्वपूर्ण नहीं है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 2: आंत अम्लीकरण घटना का फाइलोजेनी( ए) ड्रोसोफिला प्रजातियों के फाइलोजेनेटिक संबंध उनके खिलाने की आदत और निवास स्थान के साथ। 1 मिमी बार 1 मिलियन वर्षों को इंगित करता है। (बी) मक्खियों का प्रतिशत (ड्रोसोफिला प्रजातियां) आंत अम्लीकरण दिखाते हुए, 4 घंटे के लिए बीपीबी के साथ फ्लाई फूड खिलाया जाता है एन = 4 प्रयोग, प्रति प्रयोग 25-30 मादा मक्खियों (एक तरफा एनोवा, एक बोनफेरोनी परीक्षण के बाद)। संक्षिप्त नाम: एनएस = महत्वपूर्ण नहीं है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
इस प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम अम्लीकरण फेनोटाइप के लिए सीसीआर की कल्पना करने के लिए आंत का उचित विच्छेदन है। तांबे की कोशिकाओं से जारी एसिड सीसीआर तक सीमित होता है जब आंत बरकरार होती है। हालांकि, विच्छेदन के दौरान, आंत के टूटने के कारण रिसाव सीसीआर से एसिड के प्रसार का कारण बन सकता है और परिणामस्वरूप एक आंत को गलती से अम्लीकरण के लिए नकारात्मक के रूप में स्कोर किया जा सकता है। इसके अलावा, विच्छेदन के बाद 5-10 मिनट के भीतर अम्लीकरण का संकेत देने वाला पीला रंग फीका हो जाता है, अलगाव के तुरंत बाद अम्लीकरण फेनोटाइप के लिए स्कोरिंग आंतों के महत्व को रेखांकित करता है। अंत में, वर्तमान प्रोटोकॉल 7,8,9,10,11 जो फ्लाई आंत में अम्लीकरण की स्थिति को परखते हैं, जानवरों की खिला स्थिति पर विचार किए बिना, बीपीबी के साथ फ्लाई फूड के पूरक पर भरोसा करते हैं। हालांकि, हमारे अध्ययनों के दौरान, हमने पाया कि आंत का अम्लीकरण संवैधानिक नहीं था, बल्कि पूर्व भुखमरी के बाद खिलाने पर निर्भर था। इस प्रकार, आंत पीएच के संकेतक के रूप में बीपीबी का उपयोग करके आंत की एसिड स्थिति के सटीक मूल्यांकन के लिए किसी भी अन्य चर पर विचार करने के साथ मक्खी की पोषण स्थिति पर विचार करने की आवश्यकता होती है।
आंत का अम्लीकरण निचले बहुकोशिकीय से उच्च जीवों तक संरक्षित होता है। हालांकि, अधिकांश जानवरों में इसके कार्य और आणविक और सेलुलर मार्गों की पूरी सीमा के बारे में बहुत कम जाना जाता है जो इसे विनियमित करते हैं। मनुष्यों में, आंत अम्लीकरण की कमी पोषक तत्वों के दुर्शोषण से जुड़ी होती है, जबकि आंत में अतिरिक्त एसिड के परिणामस्वरूप आंतों के अल्सर हो सकते हैं। इस प्रकार, आंत अम्लीकरण पर शोध से प्राप्त अंतर्दृष्टि एसिड स्राव के विनियमन में दोषों के कारण आंतों की बीमारियों के उपचार और इलाज में नई अंतर्दृष्टि प्रदान करने की संभावना है।
ड्रोसोफिला हाल ही में आंत अम्लीकरण 2,5,6 के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली मॉडल के रूप में उभरा है। आनुवांशिक अध्ययनों ने एसिड-स्रावित कोशिकाओं की स्थापना के लिए आवश्यक जीन और एसिड के उत्पादन में शामिल मशीनरी की पहचान की है। दवाओं के अध्ययन भी किए गए हैं। उदाहरण के लिए, आंत के अम्लीकरण को रोका जाता है जब मक्खियों को एसिटाज़ोलामाइड, एक कार्बोनिक एनहाइड्रेज़ (सीएएच) इनहिबिटर 7 खिलाया जाता है, जो केंद्रीय भूमिका के अनुरूप होता है जो सीएएच एसिड उत्पादन के लिए आवश्यक प्रोटॉन के उत्पादन में निभाता है। हम उम्मीद करते हैं कि यह प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं को तेजी से और लागत-प्रभावी ढंग से दवा अवरोधकों या आंत की अम्लता के उत्प्रेरकों की खोज करने में मदद करेगा। इसके अलावा, आनुवांशिक और जैव रासायनिक दृष्टिकोण के साथ संयोजन में इस विधि का अनुप्रयोग एसिड स्राव में शामिल सेलुलर मार्गों को उजागर करने में मदद करेगा और आंतों और जीव होमोस्टैसिस में आंत अम्लीकरण की भूमिका को इंगित करेगा।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई संघर्ष नहीं है।
Acknowledgments
लेखकों ने स्वीकार किया है कि लेखक की प्रयोगशाला में काम के लिए समर्थन एक एचएचएमआई संकाय विद्वान पुरस्कार और यूटी साउथवेस्टर्न मेडिकल सेंटर में बच्चों के अनुसंधान संस्थान से स्टार्टअप फंड द्वारा प्रदान किया जाता है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bromophenol blue | Sigma-Aldrich | B0126 | |
| cellSens software | Olympus | Image aqusition (https://www.olympus-lifescience.com/en/software/cellsens) | |
| D. simulans | Drosophila Species Stock Center at the University of California | Riverside California1 (https://www.drosophilaspecies.com/) | |
| D. erecta | Drosophila Species Stock Center at the University of California | Dere cy1(https://www.drosophilaspecies.com/) | |
| D. pseudoobscura | Drosophila Species Stock Center at the University of California | Eugene, Oregon(https://www.drosophilaspecies.com/) | |
| D. mojavensis | Drosophila Species Stock Center at the University of California | Chocolate Mountains, California (https://www.drosophilaspecies.com/) | |
| Forceps | Inox Biology | Catalog# 11252-20 | |
| Fuji | Fuji | Image processing (https://hpc.nih.gov/apps/Fiji.html) | |
| Glass slide | VWR | Catalog#16005-108 | |
| Kim wipes Tissue | Kimtech | ||
| Microscope and camera | Olympus SZ61 microscope equipped with an Olympus D-27 digital camera | Imaging | |
| Oregon R | Bloomington Drosophila Stock | (https://bdsc.indiana.edu/ # 2376) | |
| Petri dishes | Fisher Scientific | Catalog #FB0875713A | |
| Phosphate-buffered Saline (PBS) | HyClone | Catalog # SH30258.01 | |
| Stereomicroscope | Olympus SZ51 | Visual magnification |
References
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