Summary
我々は、ロス処置をシミュレートするために、下行大動脈への肺根移植のマウスモデルを確立する方法を実証する。このモデルは、全身位置における肺自家移植片リモデリングの中長期評価を可能にし、その適応を促進するための治療戦略を開発する基礎となる。
Abstract
大動脈弁疾患に対するロス手術は、その優れた長期的結果により、新たな関心を取り戻しました。それにもかかわらず、自立根置換術として採用された場合、肺自家移植片の拡張およびそれに続く大動脈逆流の可能性が記載されている。いくつかの動物モデルが提案されている。しかしながら、これらは通常、 エクス ビボモデルまたは比較的高価な大型動物モデルを用いた インビボ 実験に限定される。本研究では、全身位置における肺動脈移植片(PAG)移植のげっ歯類モデルの確立を目指した。合計39匹の成体ルイスラットが含まれていた。安楽死の直後に、ドナー動物から肺根を採取した(n=17)。同系レシピエント(n=17)および偽手術(n=5)ラットを鎮静させ、換気した。レシピエント群では、PAGを後腎腹部大動脈位置にエンドツーエンドの吻合で移植した。偽手術ラットは、大動脈の切除および再吻合のみを受けた。動物を2ヶ月間の連続超音波研究および死後組織学的分析で追跡した。ネイティブ位置のPAG直径の中央値は3.20mm(IQR=3.18-3.23)であった。追跡調査では、PAGの中央径は1週間で4.03mm(IQR=3.74-4.13)、1ヶ月で4.07mm(IQR=3.80-4.28)、2ヶ月で4.27mm(IQR=3.90-4.35)であった(p<0.01)。ピーク収縮期速度は、1週間で220.07mm/s(IQR=210.43-246.41)、1ヶ月で430.88mm/s(IQR=375.28-495.56)、2ヶ月で373.68mm/s(IQR=305.78-429.81)であり、実験終了時の偽手術群(p=0.5)と差はなかった。組織学的分析は、内皮血栓症の徴候を示さなかった。この研究は、げっ歯類モデルが肺根の高圧系への長期適応の評価を可能にする可能性があることを示した。全身に配置された同系PAG移植は、ロス手術の結果をさらに改善するための新規手術技術および薬物療法の開発および評価のためのシンプルで実現可能なプラットフォームを表す。
Introduction
先天性大動脈弁狭窄症は、病変が弁膜レベルに位置する左心室管の閉塞を特徴とする先天性心疾患のサブグループである。この奇形は、出生1000人あたり約0.04~0.38人に影響を及ぼします1。
修正に使用できるオプションは多数あり、それぞれに長所と短所があります。両室矯正2に適した患者の場合、このアプローチは弁修復(経皮的または外科的弁膜切除術)またはその置換を目的としている可能性があります3。後者は、大動脈弁が回収不能であると考えられる場合に好ましい。しかし、利用可能な選択肢は小児患者には限られています。実際、生体補綴弁は、早期石灰化のために若年集団の大動脈置換術のために示されていません4。一方、機械式バルブの変性はかなり遅いですが、これらは生涯にわたる抗凝固療法を必要とします5。さらに、これらの補綴物の主な限界は、患者がさらなる再介入を受ける素因となる成長可能性の欠如によって表される。
小児集団における興味深い治療選択肢は、肺自家移植片を「ロス手術」と名付けられた大動脈位置に移すことである。この場合、肺弁はホモグラフト(図1)6に置き換えられます。この手順は、肺自家移植片がその成長可能性を維持し、生涯にわたる抗凝固療法のリスクを伴わないため、おそらく子供にとって最良の外科的選択を表すことができる。さらに、Ross処置は、機械的または生物学的弁を避けるために若年成人においても大きな価値があり、最良の外科的解決策になる可能性を秘めている。
肺自家移植による大動脈弁置換術後の結果は優れており、生存率は98%を超え、長期転帰も良好です7。文献研究は、それぞれ4歳および12歳で肺ホモグラフトを置き換えることから93%および90%の自由を報告している8。
この手順の主な制限は、特に自立根置換体として使用される場合、自家移植片が長期的に拡張する傾向である。これは、再介入を必要とする可能性のある弁膜無能を引き起こす可能性があります。実際、これまでに実施された最長の追跡調査では、自家移植片置換術の再手術からの自由度は、10年で88%、20年で75%と報告されています9。
実験的な環境でロス手術を再現する可能性は、全身圧に対する肺自家移植片適応の根底にあるメカニズムを調査するための基本的な前提条件を表す。過去にいくつかのモデルが提案されている。しかしながら、これらは通常、比較的高価な大型動物を用いた エクスビボ 実験または インビボ 動物モデルに限定される。本研究では、自立根としての全身位置での肺動脈移植片(PAG)移植のげっ歯類モデルの確立を目指した。
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Protocol
すべての手順は、パドヴァ大学動物ケア委員会(OPBA、プロトコル番号番号55/2017)によって承認され、欧州連合指令2010/63/UEおよび実験動物の世話と使用に関するイタリア法26/2014に準拠して、イタリア保健省(認可番号700/2018-PR)によって承認されています。
1. 動物の世話と実験モデル
- すべてのルイスラットが単一の会社から入手されていることを確認してください(材料表)。ネズミを、食料と水に自由にアクセスできる従来の施設で維持する。
- ラットの体重が、レシピエント群で320〜400g、ドナー群で200〜250gの範囲であることを確認します。
2. 術前プロトコル
メモ: すべての操作は、クリーンな条件下で実行する必要があります。同系移植を行うために、雄および雌の成体ルイスラットをレシピエントおよびドナーとしても使用する。
- 手術の15分前にトラマドール(5mg / kg)の腹腔内注射を行う。
- 手術直前に筋肉内ゲンタマイシン(5mg / kg)の単回投与を投与する。
- 麻酔誘導のために、動物が置かれているポリ(メチルメタクリレート)チャンバーに1L /分の酸素中の4%セボフルランを供給します。麻酔のメンテナンスのために、手順全体を通して1 L /分の酸素中に2.0-2.5%のセボフルランを使用してください。
- 剃刀で胸骨から生殖器領域の1cm上まで2cm幅の正中線に沿って動物を剃ります。その後、ヨウ素溶液で皮膚を殺菌する。
- 動物が濡れるのを防ぎ、手術中の熱分散を防ぐために、動物を透明なプラスチックフィルムで覆ってください。
- 有害な刺激に対する応答の欠如を評価することによって、手順を実行する前に麻酔のレベルを評価する。
3. ドナーの操作
- 動物と心臓の準備:
- 麻酔をかけられた動物をコルクトレイの上に置き、尾側を外科医に向けます。約5〜6cmの神経骨 - 恥骨切開を行い、2つの筋皮膚フラップを横方向に後退させる。
- 500IUのヘパリンを含む1mLの生理食塩水を4°Cで腹部大静脈を通して投与する。
- 1分後、横隔膜を左から右に切断し、前胸部切開術を行い、心臓を露出させる。
- 4°Cで生理食塩水を滴下して鼓動する心臓を冷却する。
- 大動脈弓の完全なビューを得るために、心臓周囲切除術と胸腺摘出術を行います。大動脈を囲む残りの脂肪組織を除去します.
- アーチで切断, 指名動脈の起源のすぐ上;後者も断ち切ってください。
- 胸部下大静脈(IVC)を切断し、22Gカニューレを挿入して、4°Cで20〜25mLの生理食塩水を心臓に注入し、光圧をかけた。心臓の鼓動が止まり、大動脈からの流れがはっきりしたら灌流を中止する。
- PAG外植:
注:PAGの正確な収穫と繊細な取り扱いは、レシピエントへの最適な移植を達成するために必須です。楽器で直接触れず、代わりに綿棒を使用してください。- 超音波研究を実行して、元の位置のPA直径を評価します。
- 容器の後壁の下にマイクロプライヤーを挿入し、PAGの長さを最大にするために、その分岐部にできるだけ近いマイクロハサミを使用して後者を切断する。
- リング先端のマイクロ鉗子でPAを静かに保持し、マイクロスプリングハサミで右心室から分離します。いくつかの右心室筋を含むPAGを収穫する。
- PAGの準備:
- 手術台の上の冷たい生理食塩水で湿らせたガーゼの上にPAGを置き、手術顕微鏡下で容器を検査する。
- 豊富な周囲の組織を切断し、心室筋を1mmだけ残します。容器の長さを5mmに設定します。
4. 肺動脈移植片(PAG)移植
- レシピエント動物の調製:
- 麻酔をかけられた動物をコルクトレイの上に置き、尾側を外科医に向けます。
- 中央縦切開を行い、腹部を開いたままにするために2つのミニリトラクターを使用します。
- 2本の綿棒で腸を抽出し、39°Cの生理食塩水で浸したガーゼで覆い、腎外腹部大動脈(AA)の露出による後腹膜領域の視覚化を可能にする。
注:手術中は、げっ歯類に共通する重篤な状態である低体温症を防ぐために、39°Cの生理食塩水を含む注射器を使用して腸を時々湿らせることが重要です。 - 2つの綿棒を使用して、2つの腎動脈と腸骨分岐の間の後頭頂腹膜を剥ぎ取り、下顎AAの周りの脂肪組織を除去する。AAの上に脂肪のごく一部だけを残して、容器での取り扱いを容易にします。
- AA を IVC から分離します。この手順を実行するには、まず、後大動脈壁の後ろに湾曲した鉗子を通し、それを使用してAAとIVCの間の通路を開きます。次に、2-0シルク縫合糸を使用してAAの周りにループを作成し、容器を持ち上げ、AAをIVCから分離します。6/0シルク縫合糸で下顎AAから生じる腰椎動脈をリゲートし、それを分割する。
- 動物を反時計回りに90°回転させ、頭をオペレータの左側に配置します。AAは現在、微視的なフィールドで水平に横たわっています。
- 2つのヤサルギルクリップを使用して、インフラレナルAAをクランプし、互いに1.5cmの距離に置きます。2 つのクリップの中間点に AA をトランセクトします。
- 容器の両端を生理食塩水中のヘパリン(1 UI/mL)で灌漑し、血栓を除去します。容器から外来の破片を取り除きます。
- PAG移植:
- PAGを2つの端の間に配置して、心室端を動物の頭蓋部に向けて配置する。
- 10-0ポリプロピレン縫合糸を使用して、PGをAAに接続する2つの画期的なシングルステッチを実行します。血管円周の反対側に縫合糸を配置して、PAGの両端に手順を実行します。
- 遠位端から始めて、PAGとAAの間でエンドツーエンドの吻合を行う。遠位ランドマーク縫合糸の両端の1つを後吻合に使用し、レシピエントから移植片へのアウトイン/インアウトシーケンスを使用して、約6ステッチのランニング縫合糸を実行します。
- 縫合糸が近位ランドマークに到達したら、縫合糸および近位ランドマーク縫合糸の両端の1つを用いて正方形の結び目によって完了する二重ハーフヒッチを行う。牽引力を提供するために縫合糸にゴム製の蚊の鉗子を適用します。
- 前壁に同じ吻合を行う。PAGの近位端で手順全体を実行します。近位吻合を行うときは、縫合糸ラインに小葉を含めないように特に注意してください。
- 吻合を確認するために、最初に遠位クリップを放してPAGを逆行性血液(低圧流)で満たします。単一の縫合糸で血液漏れを修復します。遠位吻合が評価されたら、近位側で同じ手順を実行します。
- 受信者に対する操作の最終段階:
- PAGの開存性を評価し、PAGの両側の縫合糸ライン上にゼラチンスポンジの2つのストリップを塗布する(必要な場合)。止血を助けるために2つの綿棒で数秒間穏やかな圧力をかけます。
- 腸を腹腔内に再配置し、4/0ポリプロピレン製の縫合糸で壁を閉じます。
5. 偽操作手順
- レシピエントラットについて先に例示したのと同一の動物の調製を行う。
- 腎と腸骨動脈の起源の中間にある腎下部AAを切断する。
- 前述のように、エンドツーエンドの吻合を用いてAAの両端を再近似する。2つのクリップを取り外し、正確な止血手順を実行します。
- レシピエント動物と同様に、腸を再配置し、腹壁を層状に閉じます。
6. 術後のケアとフォローアップ
- 温かい生理食塩水(5mL)を動物の背中の皮下組織に投与して水分補給を行う。ラットを加熱ランプの下に置き、麻酔が停止してから通常最大5分かかる覚醒まで視覚的に監視する。動物を22〜24°Cの室温のケージに入れ、食物と水に即時かつ無制限にアクセスできます。
- 術後鎮痛のために筋肉内トラマドール(5mg / kg)を手術後最初の48時間、1日2回投与する。その後、レシピエントの健康状態と体重を毎日、定期的に監視します。
- フォローアップ:フォローアップ中に、PAG機能を評価するために、1週間、1ヶ月、および2ヶ月でセリアート超音波試験を実施する。これらの研究中に、血管直径、ピーク収縮期速度(PSV)、および拡張末期速度を測定する。これらのパラメータをPAG内および近位および遠位AAのレベルで測定する。
- CO2を数分間適用して2 ヶ月のフォローアップの後に動物を安楽死させ、その後PAGを外植し、組織病理学的分析を受ける。
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Representative Results
合計39匹の成体ルイスラットがこの研究に含まれた:17匹の動物をPAGドナーとして、17匹をレシピエントとして、5匹を偽手術(対照群)として使用した(表1)。雄ラットは22匹(56%)、雌ラットは17匹(44%)であった。後者はドナーグループでのみ使用されました。
手術中に致命的な事象は発生せず、100%生存した。追跡期間中、移植群の2匹の動物は、それぞれ12日および51日で致命的な転帰を有した。研究終了時の生存率は91%であった(表1)。
ラットの体重の中央値は、レシピエント群で387g(四分位範囲、IQR、358-394g)、ドナー群で328g(IQR=304-337g)であった。術後1週間で、中央値体重は363g(IQR=350-376g)で、術前体重と比較して6%減少した。動物は追跡調査の最初の1ヶ月以内に体重を回復し(中央値387g、IQR 369-392g)、最終体重は2ヶ月で397g(IQR=391-402g)であった(図2)。
追跡期間の中央値は、移植群で62.5日(IQR=60-68日)、偽手術群で62日(IQR=61-67日)であった(p=0.68)。
そのネイティブ位置における術前のPA中央値直径は3.20mm(IQR=3.18-3.23mm)であった。PAGの中央径は、1週間で4.03mm(IQR=3.74~4.13mm)、1ヶ月で4.07mm(IQR=3.80~4.28mm)、2ヶ月で4.27mm(IQR=3.90~4.35mm)であった(図3A)。これは、ネイティブ位置の直径と比較してそれぞれ25.9%、27.2%および33.5%の増加であった。直径の増加は、ネイティブ位置の値と1週間の値(p = 0.003)を比較すると有意に異なっていましたが、以下の研究では有意な増加は見られませんでした。偽手術群の大動脈径は、1週間で1.41mm(IQR=1.35-1.62mm)、2ヶ月で1.41mm(IQR=1.29-1.70mm)であった。PAGレベルでのPSVの中央値は、1週間で220.07 mm/s(IQR=210.43-246.41 mm/s)、1ヶ月で430.88 mm/s(IQR=375.28-495.56 mm/s)、2ヶ月で373.68 mm/s(IQR=305.78-429.81 mm/s)であった。偽手術群と比較すると、PSVの顕著な差は1週間で認められ(中央値419.12 mm/s、IQR=408.42-561.32 mm/s、p<0.001)、研究終了時に差は認められなかった(392.92 mm/s、IQR=305.89-514.27 mm/s; p=0.5)(図3B)。
研究の終わりに、組織学的分析は内皮血栓症の徴候を示さず、壁石灰化はほとんどの場合有意ではなかった(図4)。
図1:ロス作戦の代表的な画像。 写真はロス作戦の段階を示している。(a)大動脈弁および根外植体;(b)大動脈位置における肺動脈自家移植片転位;(c)肺動脈自家移植片をホモグラフトで置換する。A:大動脈弁および根;H:ホモグラフト;P:肺弁および根。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:移植群における体重の経時変化。 グラフは、移植群におけるラットの体重の時間経過を示す。値は、中央値と四分位範囲として表されます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:肺動脈移植片への直径およびピーク収縮期速度の変動。 グラフは、血清超音波評価中の肺動脈移植片内の直径(A)およびピーク収縮期速度(B)の変動を示す。値は、中央値と四分位範囲として表されます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:PAGの顕微鏡評価。 画像は外植後のPAG(A)を示す。(B)放射線写真評価;(c)ヘマトキシリンおよびエオシン染色剤、元の倍率12.5倍。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| 変数 | 移植する | ドナー | シャム操作 | トータル |
| イベント数 | 17 | 17 | 5 | 39 |
| 手術時の致命的な出来事 | 0 | // | 0 | 0 |
| フォローアップ中の致死的事象(%) | 2 | // | 0 | 2 (91) |
| 手術時の体重* | 387 (358-394) | 327,5 (303-337) | 389 (321-404) |
表1:研究の特徴と結果。*値は中央値と四分位範囲として表されます。
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Discussion
自家肺根による大動脈弁置換術(Ross手術)は、自家移植片の好ましいプロファイルおよび潜在的な成長のために、先天性大動脈弁狭窄修復のための魅力的な選択肢を表す10。この手順の主な制限は、大動脈新弁の潜在的な拡張であり、これは長期的な逆流の発症の素因となる。全身圧に曝された後の肺動脈上の修飾を特徴付ける可能性は、肺自家移植不全の原因を理解するための基礎を表し得る。このため、げっ歯類モデルにおける全身位置への同系PAG移植の実験モデルを開発しました。
報告された外科的技術は、安全で効果的で再現性があります。使用された動物の小型サイズは、外科的および術後の管理を簡素化する。これにより、限られた材料と動物費用で有用なモデルを得ることができました。ルイスラットが選ばれたのは、近交系株として、これらのラットは同種であり、対立遺伝子の99%以上が固定されているためである。したがって、それらは動物間の肺弁の移植の研究のための適切なモデルである。文献データがヒトとラットの1日目の1:11の比率を示しているため、研究の2ヶ月のエンドポイントを設定することにしました11。したがって、追跡期間は約5年に相当すると考えられ、中長期的にPAG適応を評価することができます。
我々の最初の結果は、PAG直径の急速な増加と、移植後最初の1週間以内にそのレベルで測定されたPVSの減少を示した。続いて、直径増加の部分的なプラトーが観察された。短期的に見られるPSVの減少は、PAG径の増加と関係があり、PAG自体への血流の減速を引き起こす可能性があると推測できる。
より短いフォローアップエンドポイントの後に全身位置でPAG修飾を抑止することを目的としたさらなる研究は、この適応の経時的な進化を明らかにするのに役立つであろう。PAGの不適応を調節するためのさまざまな戦略を用いたこのモデルの将来の開発の可能性は、おそらくその拡張を防ぎ、したがってロス介入後の転帰を改善する可能性がある。これらの戦略は、圧力制御(すなわち、ACE阻害剤またはアンジオテンシンII受容体遮断薬を使用する)抗酸化療法、または外部強化によるPAG拡張への機械的封じ込め(最近一部の著者によって提案されたように)などの薬理学的治療であり得る12。
手順のいくつかの重要な手順は、特に注意を払って実行する必要があります。まず、肺動脈を採取する際には、右心室筋を適量含むことが基本である。実際のところ、あまりにも多くの筋肉組織が保存されると、吻合の漏れのリスクが高まりますが、筋肉の量が不足すると弁の小葉が損傷する素因になる可能性があります。PAとAAの間で近位エンドツーエンド吻合を行う場合、それらの可動域に影響を与えないようにするために、バルブのリーフレットを含めないように特に注意が必要である。最後に、適切な止血は、術後の経過を損なう可能性のある過度の失血を避けるために不可欠です。
フォローアップ中は、最大6%の軽量化が許容できると考えられています。しかし、動物はフォローアップの最初の1ヶ月以内に最初の体重を取り戻し、その後体重を増やし続けるべきです。初期体重に達しなかったことが上昇傾向の証拠と関連している場合も、動物の幸福の指標と見なすことができます。一方、6%を超える体重減少、および減少傾向のある1ヶ月で初期体重に達しなかった場合、動物の潜在的な劣悪な状態に関する懸念が生じるはずです。
このモデルに近づく研究者のための主要な技術的提案は、エンドツーエンドの吻合を行うための連続縫合の使用である。マイクロサージャリーの教科書では、この種の吻合には別々のステッチを使用することが推奨されていますが、肺根をよりよく締め付けるため、連続縫合を好みます。これに加えて、このようにして、肺根の採取に小型動物を使用しているにもかかわらず、依然として存在するレシピエント大動脈との潜在的なミスマッチを減らす方が簡単であることが観察されました。
肺根圧過負荷の研究のための他の動物モデルは、現在の文献に既に記載されている。これらは通常、PAバンディング13を含む。上流圧力の効果的な上昇にもかかわらず、これらのモデルはロス手順を完全に再現するわけではない。実際、最初の制限は、PA直径と比較して包帯がどれほどきついかに依存する圧力過負荷の高い変動性である。これらの理由から、肺過負荷は必ずしも実際の全身圧を反映しているとは限らない。肺根をその天然位置に保存することは、PAバンディングモデルの第2の限界を表す。ロス処置では、PAは全身圧へのさらなる適応に影響を与える可能性のあるすべての血管および神経接続を失う。
科学界はまた、全身位置におけるPAの異所性転位に関するいくつかの動物モデルをすでに記述している。しかし、これらすべてのモデルには、子羊や羊などの大型動物の使用が含まれます14,15。これらの動物は、いくつかの側面の下で、実際のロス処置を行う可能性を提供することによって、外科的処置を間違いなく単純化することができる。しかし、心肺バイパスの必要性、および外科的および術後の管理に関与するより多くの人々の必要性は、コストを莫大な増加させ、したがって、このモデルの大規模使用を制限する。さらに、ラットなどの小動物モデルは、多数の因果関係を行うことができるため、変動性が低減され、異なる時間エンドポイントと複数のグループを比較する可能性が可能になります。
ロス操作のように全身圧力に対するPA根の修飾を評価する可能性を提供するが、このモデルにはいくつかの制限がある。主な制限は、冠状動脈剥離および再移植を伴う実際のロス手術を行うことができないことである。しかし、私たちの目的のためには、研究は肺壁に焦点を当てていたため、これはわずかな制限に過ぎませんでした。腹部下大動脈の圧力は上行大動脈の圧力と異なるため、弁小葉運動に関するロス手術との比較が制限される。しかし、ここでも私たちの主な焦点は、PAG障害の プリムムの動き としてのPAルートでした。加えて、げっ歯類の使用は、大型動物と比較して異なる全身圧力スケールに関連するいくつかの制限を有し得る。しかし、この差は、ネイティブの根が受ける圧力に比例します。
結論として、現在の研究は、げっ歯類モデルにおける全身的に配置された同系PAG移植が、ロス手術の結果をさらに改善するための新規外科的技術および薬物療法の開発および評価のための単純で実現可能なプラットフォームを表すことを示した。
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Disclosures
著者らは開示するものは何もありません。
Acknowledgments
この研究は、部門間研究(BIRD)2019の統合予算によって資金提供されました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Sodium Chloride | Monico SpA | AIC 030805105 | Two bottles of 100 mL. The cold one (4°C) for flushing the harvesting organ; the warm one (39°C) for moistening, and rehydration of the recipient |
| 7.5% Povidone-Iodine | B Braun | AIC 032151211 | |
| Barraquer | Aesculap | FD 232R | Straight micro needle holder for the vascular anastomoses |
| Castroviejo needle holder | Not available | J 4065 | To close the animal |
| Clip applying forceps | Rudolf Medical | RU 3994-05 | For clip application |
| Cotton swabs | Johnson & Johnson Medical SpA | N/A | Supermarket product. Sterilized |
| Curved micro jeweller forceps | Rudolf Medical | RU 4240-06 | Used to pass sutures underneath the vases. |
| Depilatory cream | RB healthcare | N/A | Supermarket product |
| Electrocautery machine | LED SpA | Surton 200 | |
| Fine scissors | Rudolf Medical | RU 2422-11 | For opening the abdomen (recipient) |
| Fine-tip curved Vannas micro scissors | Aesculap | OC 497R | Only for preparing the pulmonary root, cut the lumbar vases and the 10/0 Prolene |
| Fluovac Isoflurane/Halotane Scavanger unit | Harvard Apparatus Ltd | K 017041 | Complete of anesthesia machine, anesthesia tubing, induction chamber and scavenger unit with absorbable filter |
| Gentamycin | MSD Italia Srl | AIC 020891014 | Antibiotic. Single dose, 5 mg/kg intramuscular, administered during surgery |
| Heparin | Pharmatex Italia Srl | AIC 034692044 | 500 IU into the recipient abdominal vena cava |
| I.V. Catheter | Smiths Medical Ltd | 4036 | 20G |
| Insulin Syringe, 1 mL | Fisher Scientific | 14-841-33 | To inject heparin in the harvesting animal and to flush the sectioned aorta in the recipient |
| Jeweler bipolar forceps | GIMA SpA | 30665 | 0.25 mm tip. For electrocautery of very small vases |
| Lewis rats (LEW/HanHsd) | Envigo RMS SRL, San Pietro al Natisone, Udine, Italy | 86104M | Male or female, weighing 200-250 g (pulmonary root harvesting animals) and 320-400 g (recipients) |
| Micro-Mosquito | Rudolf Medical | RU 3121-10 | In number of four, with tips covered with silicon tubing. To keep in traction the Prolene suture during anastomosis |
| Operating microscope | Leica Microsystems | M 400-E | Used with 6x, 10x and 16x in-procedure interchangeable magnifications |
| Perma-Hand silk 2-0 | Johnson & Johnson Medical SpA | C026D | To lift the aorta |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Dechra | NDC 17033-211-38 | |
| Prolene 10-0 | Johnson & Johnson Medical SpA | W2790 | Very fine non-absorbable suture, with a BV75-3 round bodied needle, for the vascular anastomoses |
| Retractors | Not any | N/A | Two home-made retractors |
| Ring tip micro forceps | Rudolf Medical | RU 4079-14 | For delicate manipulation |
| Sevoflurane | AbbVie Srl | AIC 031841036 | Mixed with oxygen, for inhalatory anesthesia |
| Spring type micro scissors | Rudolf Medical | RU 2380-14 | Straight; 14 cm long |
| Standard aneurysm clips | Rudolf Medical | RU 3980-12 | Two clips (7.5 mm; 180 g; 1.77 N) to close the aorta |
| Sterile gauze of non-woven fabric material | Luigi Salvadori SpA | 26161V | 7.5x7.5 cm, four layers |
| Straight Doyen scissors | Rudolf Medical | RU/1428-16 | For use to the donor |
| Straight micro jeweller forceps | Rudolf Medical | RU 4240-04 | 10.5 cm long. Used throughout the anastomosis |
| Syringes | Artsana SpA | N/A | 20 mL (for the harvesting animal) and 5 mL (for the recipient). For saline flushing and dipping |
| TiCron 4-0 | Covidien | CV-331 | For closing muscles and skin |
| Tissue forceps V. Mueller | McKesson | CH 6950-009 | Used for skin and muscles |
| Tramadol | SALF SpA | AIC 044718029 | Analgesic. Single dose, 5 mg/kg intramuscular |
| Virgin silk 8-0 | Johnson & Johnson Medical SpA | W818 | For arterial branch ligation |
References
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