Summary
Protokol, hipokampustaki nöronları ve sıçanın medial prefrontal korteksi boyamak için sinir sisteminin herhangi bir bölümüne uyarlanabilen hızlı Golgi yönteminin bir modifikasyonunu açıklar.
Abstract
Golgi emprenyesi, küçük adaptasyonlarla Golgi boyama kitini kullanarak, sıçan hipokampüsü ve medial prefrontal korteksteki dendritik dikenleri emprenye etmek için kullanılır. Bu teknik, önceki Golgi emprenye yöntemlerine göre belirgin bir gelişmedir, çünkü önceden karıştırılmış kimyasalların kullanımı daha güvenlidir, nöronlar sürekli olarak iyi emprenye edilir, çok daha az arka plan enkazı vardır ve belirli bir bölge için, deneyler arasında omurga yoğunluğunda son derece küçük sapmalar vardır. Dahası, beyinler belirli bir noktadan sonra biriktirilebilir ve bir sonraki işleme kadar dondurulmuş halde tutulabilir. Bu yöntemi kullanarak, ilgilenilen herhangi bir beyin bölgesi incelenebilir. Lekelendikten ve örtü kaydıktan sonra, dendritik omurga yoğunluğu, bir dendrit uzunluğu için diken sayısının sayılmasıyla belirlenir ve 10 μm dendrit başına omurga yoğunluğu olarak ifade edilir.
Introduction
Nöronları etiketlemek için potasyum dikromat ve gümüş nitrat kullanma yöntemi ilk olarak Camillo Golgi 1,2 tarafından tanımlanmış ve daha sonra Santiago Ramon y Cajal tarafından nöronal ve glial alt tipleri farklılaştıran muazzam bir çalışma gövdesi üretmek için kullanılmıştır. İllüstrasyonlarıyla yakın zamanda yayınlanmış bir kitap şimdi mevcuttur3. Ramon y Cajal'ın 100 yıldan daha uzun bir süre önce yayınlanan çalışmalarını takiben, çok az Golgi emprenye kullanıldı. Golgi emprenyesi, nöronların ışık mikroskobu ile üç boyutlu olarak görselleştirilmesini sağlayan zahmetli bir süreçtir. Yöntemi daha kolay ve boyama işlemini daha tutarlı hale getirmek için yıllar içinde Golgi yönteminde çok sayıda değişiklikyapılmıştır 4. 1984 yılında Gabbott ve Somogyi5, daha hızlı işlemeye izin veren tek bölümlü Golgi emprenye prosedürünü tanımladı. Bu Golgi emprenye yöntemi,% 4 paraformaldehit ve% 1.5 pikrik asit ile perfüzyon, fiksasyon sonrası,% 3 potasyum dikromat banyosuna vibratom kesiti gerektirir. Bölümler cam slaytlara monte edilir, kapakların dört köşesi yapıştırılır, böylece gümüş nitrata daldırıldığında difüzyon kademeli olur. Kapaklar daha sonra atılır, bölümler kurutulur ve sonunda kapak montaj ortamı ile kalıcı olarak kaydırılır. Bu teknik, hipokampustaki nöronları ve glia 6,7,8'i etiketlemek için başarıyla kullanıldı. Burada açıklanan hızlı Golgi yöntemi bir gelişmedir, çünkü hem potasyum dikromat hem de gümüş nitrata çok daha az maruz kalınır ve paraformaldehit ve pikrik asit kullanılmaz. Ek olarak, Gabbott ve Somogyi5 yönteminin modifikasyonları kullanılarak emprenye edilen hücreler analiz edilebilse de, çoğu zaman bölümler dehidrasyon adımı sırasında slaytlardan aşırı veya az maruz kaldı veya düştü ve genel olarak, analiz için yeterli hücreye sahip olmak için birkaç deneyin bir araya getirilmesi gerekiyordu.
Mevcut protokol, hipokampustaki dendritleri ve dendritik dikenleri etiketlemek için Golgi boyama kitinin (bkz. malzeme tablosu) ve sıçanın medial prefrontal korteksinin (mPFC) kullanımını açıklamaktadır. Bu yöntemin öncekilere göre avantajları, hızlı olması, araştırmacı için zararlı kimyasallara daha az maruz kalması ve nöronların tutarlı bir şekilde boyanmasıdır. Aşağıda açıklanan protokol, 9,10,11,12,13,14,15 sayılı çalışmada sıçanın hipokampüsündeki ve mPFC'sindeki dendritik omurga yoğunluğunu değerlendirmek için küçük modifikasyonlarla kullanılmıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm deneysel prosedürler Sacred Heart Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır ve NIH Hayvanların Bakımı ve Kullanımı Kılavuzuna uygundur.
1. Beyin dokusunun izolasyonu ve infiltrasyonu
- Golgi boyama kitinin A ve B ön karışım çözeltilerini kullanmadan 24 saat önce koyu renkli şişelerde ve/veya karanlıkta saklayın. 24 saat sonra çözeltiyi değiştirmek için yeterli olan yaklaşık 80 mL çözelti A ve B karışımı yapın. Hava geçirmez şişelerde saklayın.
NOT: Salin veya paraformaldehit ile perfüzyon gerekli değildir. - Sıçanları karbondioksit ötenazisini takiben giyotin ile kurban edin ve saniyeler içinde beyinleri çıkarın. Gerekirse beyinleri tuzlu suda durulayın, ancak gerekli değildir.
- Beyni, korteksi hipotalamusun görünür olması için aşağı yerleştirin, çünkü kesikler gözeneksiz bir yüzeyde ön ve arka kısımda yapılır. Şekil 1'de gösterildiği gibi bir anterior (prefrontal korteks içerir) ve posterior (hipokampus içerir) bloğuna bölünür.
- Blokları A ve B'nin önceden karıştırılmış çözeltilerine yerleştirin ve çözeltiye iyice daldırıldıklarından emin olun. A ve B çözeltilerinin hacminin blokları batırmak için yeterli olduğundan emin olun. Blokları kahverengi şişelerde veya folyo kaplı şeffaf şişelerde (ışığı dışarıda tutmak için) oda sıcaklığında karanlıkta saklayın.
- Çözeltiyi 24 saat sonra değiştirin ve oda sıcaklığında 13 gün daha karanlıkta tutun.
NOT: Fare beyinleriyle birlikte kullanılırsa, bloke etmeye gerek yoktur ve tüm beyin çözeltiye yerleştirilebilir. Büyüklükleri farklı olan beyin bölgelerinin boyanması durumunda, A ve B çözeltilerindeki sürenin deneme yanılma ile belirlenmesi gerekebilir. - İki hafta sonra doku, A ve B çözeltileri ile iyice infiltre edilir, blokları kriyoprotektan çözeltiye (Golgi boyama kitindeki C çözeltisi) aktarın ve 4 ° C'de 48-72 saat bekletin.
NOT: Kriyoproteksiyondan sonra, bloklar bir sonraki işleme kadar dondurulabilir. Ayrıca, kitten gelen tüm çözeltilerin toplandığını ve tehlikeli atık olarak bertaraf edildiğini unutmayın. - Beyni dondurun, korteksi aşağı indirin, kuru buz üzerinde bir cam slayt üzerinde. Dondurulduktan sonra kriyostatı kesin veya bir kriyostat kullanarak kesitleyene kadar -80 ° C'de saklayın.
NOT: Sıvı azotta dondurmayın, çünkü bu dokuda çatlaklara neden olur.
2. Beyin dokularının bölümlenmesi
- Önceden soğutulmuş bir kriyostat mandren üzerine az miktarda doku ortamı yerleştirin. Bloğun bir tarafını hafifçe elde çözerek (eldivenli) ve doku ortamına yerleştirerek kriyostatat kıkırdamaları üzerine bloklar monte edin.
NOT: Dokunun gömülmesi gerekli değildir. Hipokampüsü içeren bloğun kesilmesi, prefrontal korteksli bloktan biraz daha kolaydır, çünkü ikincisi korpus kallozumun önündedir ve iki yarısı ayrıdır. - Bir kriyostat üzerinde -22 °C'de 100 μm kesitler kesin ve alt yatak kızaklarına monte edin. 150 μm kalınlığa kadar olan bölümler kullanılabilir. Slayt başına 3-4 koronal bölüm monte etmeye çalışın, çünkü bu, işlenmesi gereken slaytların sayısını azaltır. Bölümleri slayta girene kadar donmuş halde tutmak için aşağıdaki tekniklerden birini kullanın.
NOT: Bu bölümler her zamanki gibi sabitlenmemiştir ve bu nedenle hızlı bir şekilde erime eğilimindedirler. Bölümlerin slaytta erimesine izin verin. Slayta yerleştirilmeden önce erimeye başlarlarsa, slaytta düz olmalarını sağlamak mümkün değildir. Bunu yapmak için birkaç teknik vardır.- Bıçağın ve bloğun üzerine dondurucu bir sprey kullanın. Odadaki sıcaklığa ve neme bağlı olarak, bu her bölüm için gerekli olabilir. Kesim sırasında bölümü düz tutmak için antiroll plaka veya fırça kullanın.
NOT: Yeterli dondurucu sprey bulunduğundan emin olun. 20 blok kesilirken birkaç kutu kullanılabilir. - Mümkünse, oda sıcaklığında bir slayt kullanarak dikin ve hızlı bir şekilde bölüme yerleştirin. Uygulamayla, aynı anda birkaç bölüm monte edilebilir. Bu işe yaramazsa, slaytları kriyostatta tutun, böylece çok soğuk olurlar ve bölümü soğuk forseps veya soğuk bir boya fırçası ile aktarın ve ardından montajı çözün.
- Bıçağın ve bloğun üzerine dondurucu bir sprey kullanın. Odadaki sıcaklığa ve neme bağlı olarak, bu her bölüm için gerekli olabilir. Kesim sırasında bölümü düz tutmak için antiroll plaka veya fırça kullanın.
- Bıçağı dilimler arasında kağıt mendillerle temizleyin. Bıçak daha fazla temizlik gerektiriyorsa,% 100 etanol (EtOH) kullanın ve bir sonraki dilimi kesmeden önce kurumasını bekleyin.
- Slayta monte edildikten sonra, slaytı düz bir şekilde karton slayt tepsilerine yerleştirin ve bölümlerin karanlıkta oda sıcaklığında (birkaç saat ila maksimum 48 saat) kurumasını bekleyin. Slayt tepsisini kapatmayın. Golgi emprenye işleminden önce bölümlerin tamamen kuru olduğundan emin olun. Karanlıkta, Golgi emprenye edene kadar düz bir şekilde slayt tepsilerinde saklayın.
NOT: Bölümlerin kurutulması herhangi bir hasara neden olmaz.
3. Beyin dokusunun boyanması ve dehidrasyonu
- Cam boyama tabaklarında boyama yapın. D ve E çözeltilerini boyamadan hemen önce karıştırın. Protokole göre, D çözeltisinin bir parçasını, E çözeltisinin bir kısmını ve iki parça damıtılmış suyu ekleyin. Cam vitray tabaklar için, bölümleri tamamen suya batırmak için 200 mL'lik bir çözelti yapın. Koplin kavanozları için bu daha az hacim gerektirir.
- Slaytları, çözümlerin bölümlere erişmesine izin verecek kadar uzağa yerleştirilmiş raflara yerleştirin.
- Bölümleri 10 dakika boyunca Golgi emprenye boyama çözeltisine yerleştirmeden önce 4 dakika (2x) damıtılmış suya yerleştirin. Boyama solüsyonunu her 70 bölümde bir değiştirin. Damıtılmış suyu sarardığında değiştirin.
NOT: Boyama adımının zamanlaması kritiktir. Çok kısa boyama yeterli boyamaya izin vermez ve çok uzun boyama nedenleri, analiz yaparken dendritlerin ayrılmasını zorlaştırır. Boyama çözeltisinden çıktıktan sonra zamanlama daha az kritiktir. - Bölümleri aşağıdaki gibi kurutun:% 70 EtOH (5 dakika),% 95 EtOH (5 dakika; 2x),% 100 EtOH (5 dakika; 2x), temizleme maddesi (5 dakika; 3x). Bölümlerin susuz kalmasını sağlamak için tüm çözeltileri, özellikle %100 EtOH ve temizleme maddesini sık sık değiştirin.
NOT: %50 EtOH adımından geçmek gerekli değildir. Hücre görselleştirmesi için karşı boyama gerekli değildir, çünkü Golgi emprenyesi yeterli kontrast sağlar. Diğer takas ajanlarının kullanımı, burada kullanılanlar kadar işe yaramadı (bkz. - Bol miktarda montaj ortamına sahip 60 mm uzunluğunda cam kapaklı kapaklar. Mümkün olduğunca az hava kabarcığı olduğundan emin olun. Gerekirse, kapak fişini dikkatlice çıkarın ve tekrarlayın (haftalar sonra bile yapılabilir). Bölüme zarar vermemek için bunu çok yavaş yapın (çok miktarda montaj ortamı nedeniyle yapılabilir).
NOT: Büyük miktarda montaj ortamı biraz dağınıktır, ancak yine de gereklidir, çünkü kalın 100 μm kesitleri örtmek için yeterli montaj ortamı kullanılmalıdır. - Bölümlere yalnızca bir kapak fişi yerleştirildiğinden emin olmak için, işlemden önce kapak fişlerini ayırın.
- Kapak kaydıktan sonra, kuru slaytlar gözeneksiz herhangi bir kağıda 3-5 gün boyunca düz bir şekilde kayar ve yapışmayı önlemek için özellikle ilk günden sonra hafifçe hareket ettirir. 3-5 gün sonra slaytları slayt tutuculara aktarın ve ideal olarak slaytları incelemeden önce en az 3 hafta kuru bırakın. Hava kabarcıkları oluşma olasılığını azaltmak için slaytları düz tutun.
4. Dendritik omurga yoğunluğunun belirlenmesi
- Hipokampusun hem mPFC hem de CA1 bölgesinin piramidal nöronlarındaki dendritik omurga yoğunluğunun analizi için, adım 4.1.1'de açıklandığı gibi en lateral sekonder bazal dendritleri ve en lateral üçüncül apikal dendritleri inceleyin (Şekil 2).
- Bir dendrit seçin, bir görüntü analiz programı kullanarak dendritin uzunluğunu ölçün, bir el sayacı kullanarak dendritlerdeki dikenleri sayın ve dikenlerin hem uzunluğunu hem de sayısını kaydedin.
- Beyin başına bölge başına altı hücreyi (mPFC, CA1) inceleyin ve analiz edin. Daha önce tarif edildiği gibi grup başına en az altı beyni sayısallaştırın 7,8. Analiz için aşağıdaki kriterleri karşılayan nöronları seçin: hücre gövdeleri ve dendritler iyi emprenye edilir; Dendritler bitişik hücrelerden ayırt edilebilir ve süreklidir.
- Işık mikroskobu ile elle sayarak dikenleri 1000x'te (yağ daldırma) sayın ve bir görüntü analiz programı kullanarak dendritik uzunluğu ölçün. Omurga sayısını dendritin uzunluğuna bölerek omurga yoğunluğunu hesaplayın ve verileri diken sayısı / 10 μm dendrit olarak ifade edin.
NOT: Omurga alt tiplerini ve dendritik mimariyi ayırt etmek için kullanılabilecek çok daha karmaşık yöntemler vardır, ancak 1000x'te bir ışık mikroskobu ile elle sayma, daha sonra daha fazla araştırmanın gerekli olup olmadığını belirleyebilecek hızlı bir sonuç verebilir. Benzer dendritleri tutarlı bir şekilde örneklemek için her türlü çaba gösterilmesine rağmen, sayımı etkileyebilecek kalınlıkta farklılıklar vardır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hızlı Golgi yöntemini kullanarak, hücreler sürekli olarak iyi emprenye edilir, böylece analiz edilecek çok sayıda hücre vardır. Bu, deneylerin analiz için yeterli veriye sahip olması için bir araya getirilmesi gereken önceki yöntemlere göre belirgin bir gelişmedir. Bu nedenle, aynı anda daha fazla örnek işlenebilir ve beyinler işlenene kadar dondurulmuş olarak saklanabilir. Hipokampusun CA1 bölgesindeki Golgi emprenye edilmiş hücrelerin örnekleri Şekil 3'te düşük ve yüksek güçte gösterilmiştir. Belirli bir bölgedeki dikenlerin sayımı, küçük standart hatalarla tutarlı sonuçlar verir. Bu da önemlidir çünkü deneyler arasında karşılaştırmalar yapılabilir. Şekil 4 , hem CA1 hem de mPFC'de çevresel zenginleştirme (EE) sonrası ergen erkek ve dişi sıçanlarda piramidal hücreler üzerinde bazal dendritik omurga yoğunluğunun arttırıldığı bir deneyi göstermektedir. Kısaca, erkek ve dişi sıçanlar doğum sonrası gün (PND) 21'de sütten kesildi ve kontrol veya zenginleştirilmiş gruplara atandı. EE grubu, PND 24-42'den zenginleştirilmiş konutlarda 2 saat / gün geçirirken, kontrol grubu bu süre zarfında sıradan kafeslere yerleştirildi. EE, her iki cinsiyetten ergenlerde, hem CA1 hem de mPFC'de bazal dendritik omurga yoğunluğunda bir artışa neden olmuştur. Tüm dendritik omurga değerlerindeki ortalamanın (SEM) küçük standart hatasına dikkat edin.
Resim 1: Sıçan beyninin ventral yüzeyi. Blokları ilk çözeltilere batırmadan önce ön ve arka bloklara nerede kesileceğini gösteren taze bir sıçan beyninin ventral yüzeyinin fotoğrafı. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Resim 2: Tipik Piramidal Hücre. Piramidal bir hücrenin şeması, dendritik omurga yoğunluğu için analiz edilen apikal ve bazal dendritleri gösterir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Resim 3: Golgi Emdirilmiş Nöron. Sıçan hipokampusunun CA1 bölgesinde Golgi emprenye edilmiş nöronların örnekleri. Solda: Birkaç emprenye edilmiş piramidal hücre. Ölçek çubuğu = 25 μm. Sağ üst: Bazal dendritler. Ölçek çubuğu = 12,5 μm. Sağ alt: İkincil bazal dendrit örneği. Oklar dikenleri gösterir. Ölçek çubuğu = 5 μm. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: Omurga Yoğunluğu. Çevresel zenginleştirmeyi (EE) takiben hipokampüsün (CA1) mPFC ve CA1 bölgesindeki bazal ve apikal dendritik omurga yoğunluğunu, erkek (M) ve dişi sıçanlarda (F) kontrol (CON) ile karşılaştıran bir veri seti. Histogramlar ortalama diken sayısını/10 μm dendrit + SEM göstermektedir. veriler istatistiksel analiz yazılımı kullanılarak analiz edilmiştir (bkz. Grup farklılıklarını test etmek için iki yönlü (cinsiyet X EE) ANOVA'lar kullanıldı ve post-hoc analiz için Fisher'ın LSD testleri kullanıldı. Önemli etkiler p<0.05'tir. t önemli bir farkı gösterir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mevcut protokol, birçok bölümün hızlı bir şekilde eşzamanlı olarak işlenmesini sağlayan bir Golgi emprenye yöntemini açıklamaktadır. Daha önce tarif edilen5 daha fazla emek yoğun yönteme göre bir gelişmedir ve analiz için sürekli olarak emprenye edilmiş nöronlar verir. Ek olarak, Golgi emprenyesinde kullanılan toksik kimyasallara daha az maruz kalınır. Sürecin en zorlu kısmı, bölümlerin slaytlarda düz olmasını sağlamaktır, bu da önemli bir uygulama gerektirir. Dondurucu sprey kullanımı ile her şeyi mümkün olduğunca soğuk tutmak esastır.
Slaytlar kuruduktan ve analiz yapılabildikten sonra, sayılan hücrelerin seçiminde tutarlı olmak çok önemlidir. Hipokampal piramidal hücreler CA1'den seçilir. Birkaç alt parçaya sahip olan mPFC için, infralimbik korteksten piramidal hücreler kullanılır. Açık olmayan nedenlerden dolayı, mPFC'deki hücreler, hipokampusun CA1 bölgesinden daha az lekelenir. Ek olarak, tüm bölümler lojistik nedenlerle birlikte işlenemediğinde deneyleri birleştirmek mümkündür. Tutarlılık için, aynı kişi belirli bir hücre kümesini saymalıdır.
Bu yöntemin sınırlamaları tüm Golgi emprenye yöntemlerine benzer. Sadece az sayıda hücrenin lekelenmesi bir avantajdır. Emdirilmiş az sayıda hücre, tüm hücrenin üç boyutlu olarak görselleştirilmesini sağlar. Golgi yönteminin dezavantajı, hangi hücre alt kümesinin etiketlendiğinin açık olmamasıdır. Bu nedenle, deneylerde, hem kontrol hem de deney grupları için emprenye edilen hücrelerin aynı olduğu varsayılmalıdır. Bu yöntem önceki yöntemlerden çok daha iyi boyama ile sonuçlansa da, her zaman analiz edilemeyen hücreler vardır, çünkü bunlar enkaz, hava kabarcığı veya kırık dendritlerle kaplıdır.
Sonuç olarak, burada açıklanan hızlı Golgi yöntemi, herhangi bir beyin bölgesi için kullanılabilecek nöronların tutarlı ve tekrarlanabilir etiketlenmesi için hızlı, güvenli bir yöntemdir. Prefrontal korteks17,18 ve hipokampus10,12,19'daki hücreleri etiketlemenin yanı sıra, amigdala 20, beyincik 21 ve korteks22'de de kullanılmıştır. Anatomiye aşina olduğunu ve hücreleri hızlı bir şekilde tanımlayabildiğini varsayarsak, omurga yoğunluğunun elle sayımı hızlı bir sonuç sağlayabilir, ancak daha sofistike analiz yöntemleri gerektiren dendritik alt tipler hakkında bilgi sağlamaz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.
Acknowledgments
Bu çalışma Sacred Heart Üniversitesi Lisans Araştırma GirişimiGrants tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cardboard slides trays | Fisher Scientific | 12-587-10 | |
| Coverslips 24 x 60mm | Fisher Scientific | 12-545-M | |
| FD Rapid GolgiStain kit | FD Neurotechnologies | PK 401 | Stable at RT in the dark for months; Golgi staining kit |
| Freezing Spray | Fisher Scientific | 23-022524 | |
| HISTO-CLEAR | Fisher Scientific | 50-899-90147 | clearing agent |
| NCSS Software | Kaysville, UT, USA | ||
| Permount | Fisher Scientific | SP-15-100 | mounting medium |
| Superfrost Plus Microscope slides | Fisher Scientific | 12-550-15 | |
| Tissue Tek CTYO OCT Compound | Fisher Scientific | 14-373-65 | Used to mount brains on cryostat chuck |
References
- Pannese, E. The Golgi Stain: invention, diffusion and impact on neurosciences. Journal of the History of the Neurosciences. 8 (2), 132-140 (1999).
- Bentivoglio, M., et al. The Original Histological Slides of Camillo Golgi and His Discoveries on Neuronal Structure. Frontiers in Neuroanatomy. 13, 3 (2019).
- Swanson, L. W., Newman, E., Araque, A., Dubinsky, J. M. The Beautiful Brain: The Drawings of Santiago Ramon y Cajal. , Abrams. 208 (2017).
- Dall'Oglio, A., Ferme, D., Brusco, J., Moreira, J. E., Rasia-Filho, A. A. The "single-section" Golgi method adapted for formalin-fixed human brain and light microscopy. Journal of Neuroscience Methods. 189 (1), 51-55 (2010).
- Gabbott, P. L., Somogyi, J. The 'single' section Golgi-impregnation procedure: methodological description. Journal of Neuroscience Methods. 11 (4), 221-230 (1984).
- Gould, E., Frankfurt, M., Westlind-Danielsson, A., McEwen, B. S. Developing forebrain astrocytes are sensitive to thyroid hormone. Glia. 3 (4), 283-292 (1990).
- Gould, E., Woolley, C. S., Frankfurt, M., McEwen, B. S. Gonadal steroids regulate dendritic spine density in hippocampal pyramidal cells in adulthood. Journal of Neuroscience. 10 (4), 1286-1291 (1990).
- Woolley, C. S., Gould, E., Frankfurt, M., McEwen, B. S. Naturally occurring fluctuation in dendritic spine density on adult hippocampal pyramidal neurons. Journal of Neuroscience. 10 (12), 4035-4039 (1990).
- Frankfurt, M., Salas-Ramirez, K., Friedman, E., Luine, V. Cocaine alters dendritic spine density in cortical and subcortical brain regions of the postpartum and virgin female rat. Synapse. 65 (9), 955-961 (2011).
- Frankfurt, M., Luine, V. The evolving role of dendritic spines and memory: Interaction(s) with estradiol. Hormones Behavior. 74, 28-36 (2015).
- Bowman, R. E., Luine, V., Khandaker, H., Villafane, J. J., Frankfurt, M. Adolescent bisphenol-A exposure decreases dendritic spine density: role of sex and age. Synapse. 68 (11), 498-507 (2014).
- Bowman, R. E., et al. Bisphenol-A exposure during adolescence leads to enduring alterations in cognition and dendritic spine density in adult male and female rats. Hormones Behavior. 69, 89-97 (2015).
- Eilam-Stock, T., Serrano, P., Frankfurt, M., Luine, V. Bisphenol-A impairs memory and reduces dendritic spine density in adult male rats. Behavioral Neuroscience. 126 (1), 175-185 (2012).
- Inagaki, T., Frankfurt, M., Luine, V. Estrogen-induced memory enhancements are blocked by acute bisphenol A in adult female rats: role of dendritic spines. Endocrinology. 153 (7), 3357-3367 (2012).
- Jacome, L. F., et al. Gonadal Hormones Rapidly Enhance Spatial Memory and Increase Hippocampal Spine Density in Male Rats. Endocrinology. 157 (4), 1357-1362 (2016).
- Frankfurt, M. Bisphenol-A: a plastic manufacturing compound disrupts critical brain structures and impairs memory. Research Features. , https://researchfeatures.com/wp-content/uploads/2021/05/Maya-Frankfurt.pdf (2021).
- Wallace, M., Luine, V., Arellanos, A., Frankfurt, M. Ovariectomized rats show decreased recognition memory and spine density in the hippocampus and prefrontal cortex. Brain Research. 1126 (1), 176-182 (2006).
- Wallace, M., Frankfurt, M., Arellanos, A., Inagaki, T., Luine, V. Impaired recognition memory and decreased prefrontal cortex spine density in aged female rats. Annals of the New York Academy of Science. 1097, 54-57 (2007).
- Bowman, R. E., Hagedorn, J., Madden, E., Frankfurt, M. Effects of adolescent Bisphenol-A exposure on memory and spine density in ovariectomized female rats: Adolescence vs adulthood. Hormones Behavior. 107, 26-34 (2019).
- Novaes, L. S., Dos Santos, N. B., Perfetto, J. G., Goosens, K. A. Environmental enrichment prevents acute restraint stress-induced anxiety-related behavior but not changes in basolateral amygdala spine density. Psychoneuroendocrinology. 98, 6-10 (2018).
- Trzesniewski, J., Altmann, S., Jäger, L., Kapfhammer, J. P. Reduced Purkinje cell size is compatible with near normal morphology and function of the cerebellar cortex in a mouse model of spinocerebellar ataxia. Experimental Neurology. 311, 205-212 (2019).
- Zemmar, A., et al. Oligodendrocyte- and Neuron-Specific Nogo-A Restrict Dendritic Branching and Spine Density in the Adult Mouse Motor Cortex. Cerebral Cortex. 28 (6), 2109-2117 (2018).
