Summary
Nociceptor neuroner og NK-celler interagerer aktivt i en inflammatorisk sammenhæng. En samkulturel tilgang gør det muligt at studere dette samspil.
Abstract
Somatosensoriske neuroner har udviklet sig til at detektere skadelige stimuli og aktivere defensive reflekser. Ved at dele kommunikationsmidler indstiller nociceptor neuroner også værtsforsvar ved at kontrollere immunsystemets aktivitet. Kommunikationen mellem disse systemer er for det meste adaptiv og hjælper med at beskytte homeostase, det kan også føre til eller fremme udbrud af kroniske sygdomme. Begge systemer udviklede sig sammen for at muliggøre en sådan lokal interaktion, som findes i primære og sekundære lymfoide væv og slimhinder. Nylige undersøgelser har vist, at nociceptorer direkte detekterer og reagerer på fremmede antigener, immuncelleafledte cytokiner og mikrober.
Nociceptor aktivering resulterer ikke kun i smerte overfølsomhed og kløe, men sænker nociceptor fyringstærsklen, hvilket fører til lokal frigivelse af neuropeptider. Peptiderne, der produceres af og frigives fra de perifere terminaler af nociceptorer, kan blokere kemotaxis og polarisering af lymfocytter og kontrollere lokalisering, varighed og type betændelse. Nylige beviser viser, at sensoriske neuroner interagerer med medfødte immunceller via cellecellekontakt, for eksempel engagerende gruppe 2D (NKG2D) receptorer på naturlige dræber (NK) celler.
I betragtning af at NK-celler udtrykker de beslægtede receptorer for forskellige nociceptorproducerede mediatorer, er det tænkeligt, at nociceptorer bruger neuropeptider til at kontrollere NK-cellernes aktivitet. Her udtænker vi en co-kulturmetode til at studere nociceptor neuron-NK-celleinteraktioner i en skål. Ved hjælp af denne tilgang fandt vi, at lumbal nociceptor neuroner reducerer NK-cellecytokinekspression. Samlet set kan en sådan reduktionistisk metode være nyttig til at studere, hvordan tumorinnerverende neuroner styrer NK-cellernes anticancerfunktion, og hvordan NK-celler styrer elimineringen af skadede neuroner.
Introduction
Cellelegemerne af sensoriske neuroner stammer fra dorsale rodganglier (DRG). DRG er placeret i det perifere nervesystem (PNS), mellem rygmarvens dorsale horn og de perifere nerveterminaler. DRG-neuronernes pseudo-unipolære natur tillader overførsel af information fra den perifere gren, som innerverer målvævet, til den centrale gren, som bærer den somatosensoriske information til rygmarven1. Ved hjælp af specialiserede ionkanalreceptorer fornemmer førsteordens neuroner trusler fra patogener, allergener og forurenende stoffer2, hvilket fører til tilstrømning af kationer (Na +, Ca2+) og generering af et handlingspotentiale 3,4,5.
Disse neuroner sender også antidromisk handlingspotentiale mod periferien, hvor den oprindelige fareføling var opstået, hvilket fører til lokal frigivelse af neuropeptider 1,4. Derfor tjener nociceptorneuronerne som en beskyttelsesmekanisme, der advarer værten om miljøfare 4,5,6,7.
For at kommunikere med andenordens neuroner frigiver nociceptorerne forskellige neurotransmittere (f.eks. glutamat) og neuropeptider (f.eks. Calcitonin-genrelateret peptid (CGRP), stof P (SP) og vasoaktivt tarmpeptid (VIP))6,7. Disse peptider virker på kapillærer og fremmer plasmaekstravasation, ødem og den lokale tilstrømning og modulering af immunceller 2,4,7.
Det somatosensoriske og immunsystem anvender et fælles kommunikationssystem sammensat af cytokiner og neuropeptider og deres respektive beslægtede receptorer4. Mens denne tovejskommunikation hjælper med at beskytte mod fare og bevare homeostase, kan den også bidrage til sygdomspatofysiologi4.
NK-celler klassificeres som medfødte lymfoide celler og er specialiserede til at eliminere viralt inficerede celler. NK-cellefunktionen styres af en balance mellem stimulerende og hæmmende receptorer, herunder den aktiverende receptor NKG2D8. Den endogene ligand af NKG2D, retinsyre tidligt inducerbar1 (RAE1), udtrykkes af celler, der gennemgår stress, såsom tumorigenese og infektion 8,9.
Nylige undersøgelser har vist, at perifer nerveskade driver sensoriske neuroner til at udtrykke maladaptive molekyler som stathmin 2 (STMN2) og RAE1. Via cellecellekontakt blev NKG2D-ekspressive NK-celler således aktiveret ved interaktion med RAE1-ekspressive neuroner. Til gengæld var NK-celler i stand til at eliminere skadede nociceptor neuroner og stump smerte overfølsomhed normalt forbundet med nerveskade10. Ud over NKG2D-RAE1-aksen udtrykker NK-celler de beslægtede receptorer for forskellige nociceptorproducerede mediatorer. Det er derfor muligt, at disse mediatorer modulerer NK-celleaktivitet. Dette papir præsenterer en co-kultur metode til at undersøge biologien af nociceptor neuron-NK celle interaktion. Denne tilgang vil hjælpe med at fremme forståelsen af, hvordan nociceptor neuroner modulerer medfødte immuncelleresponser på skade, infektion eller malignitet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De institutionelle dyrepleje- og brugsudvalg ved Université de Montréal (#22053, #22054) godkendte alle dyreforsøg. Se tabel 1 for en liste over opløsninger og deres sammensætning og materialetabellen for en liste over materialer, udstyr og reagenser, der anvendes i denne protokol.
1. NK-celleisolering, dyrkning og stimulering
- Generer nociceptor neuron intakt (kuldmate kontrol; TRPV1 wt::D TA fl/wt) og ablated (TRPV1 cre::D TA fl/wt) mus ved at krydse lox-stop-lox-difteri toksin mus (DTA fl/fl) med TRPV1 cre/wt mus.
- Ved hjælp af CO2 -indånding skal du aflive en naiv kuldkammeratkontrol (TRPV1 wt: :D TAfl / wt) mus.
- Milten opsamles i et 1,5 ml mikrocentrifugerør indeholdende 500 μL sterilt fosfatbufferet saltvand (PBS).
- Homogeniser milten ved hjælp af en pistil.
- Fortynd cellerne med 1 ml steril PBS.
- Filtrer blandingen gennem en 50 μm cellesi i et 15 ml konisk rør.
- Fyld volumen (10 ml) op med steril PBS.
- Saml 10 μL og tæl cellerne ved hjælp af et hæmocytometer.
- Centrifuger cellerne (500 × g, 5 min) og fjern supernatanten.
- Resuspenderer cellerne i en koncentration på 108 celler / ml i suppleret RPMI 1640 medium.
- Følg producentens anvisninger for magnetisk rensning af milt NK-celler ved hjælp af et NK-celleisoleringssæt til mus. Bekræft NK-cellerenhed ved hjælp af flowcytometri11.
- Saml 10 μL og tæl cellerne ved hjælp af et hæmocytometer.
- Centrifuger cellerne (500 × g, 5 min) og fjern supernatanten.
- Resuspender NK-cellerne i suppleret RPMI 1640-kulturmedium (indeholdende IL-2 og IL-15).
- Kultur 2 × 106 NK-celler/ml i en 96-brønds U-bundplade i 48 timer.
2. DRG neuron isolation og kultur
- Ved 24 timer før afslutningen af NK-cellestimuleringen (trin 1.15) belægges en 96-brøndsplade med 100 μL/brønd laminin (1 ng/ml) og inkuberes i 45 minutter (37 °C).
- Efter inkubation skal du fjerne opløsningen og lade brøndene lufttørre i et biosikkerhedsskab.
- Ved hjælp af CO2 -indånding skal du aflive nociceptor neuron intakt (kuldmate kontrol; TRPV1 wt::D TA fl/wt) eller ablated (TRPV1cre::D TAfl/wt) mus.
BEMÆRK: CO2 indånding foretrækkes frem for cervikal dislokation, da det undgår at forstyrre rygmarven, der er forbundet med DRG. - Fastgør musen på brættet i en udsat position, løft huden, og skær huden langs rygsøjlen. Se Perner et al. for en detaljeret video12.
- Skær lumbosakralleddet af og adskil korsbenet fra lændehvirvelsøjlen med en saks.
- Adskil rygsøjlen ved at skære muskler og ribben på begge sider af rygsøjlen i kranial retning, indtil bunden af kraniet er nået.
- Brug saks til at afskære rygsøjlen ved atlanto-occipitalleddet.
- Fjern muskel- og fedtvæv fra rygsøjlen.
- Fastgør og åbn rygsøjlen for at fjerne rygmarven og få adgang til DRG. Kig efter DRG i den intervertebrale foramina forbundet med rygmarven gennem dorsalroten, men adskilt fra meninges.
- Høst DRG'erne i et 15 ml konisk rør fyldt med 10 ml iskold suppleret DMEM.
- Centrifuger præparatet (200 × g, 5 min, stuetemperatur) og fjern supernatanten.
- Der tilsættes 250 μL PBS indeholdende Collagenase IV (1 mg/ml) og Dispase II (2,4 E/ml).
- DRG inkuberes med Collagenase IV/Dispase II (C/D)-opløsning (80 min., 37 °C, mild omrøring). Ved pooling af ganglier fra flere mus opretholdes et forhold på 125 μL C / D-opløsning pr. Ganglion.
- For at inaktivere enzymerne tilsættes 5 ml suppleret DMEM-medium.
- Centrifuge opløsningen (200 × g, 5 min) og fjern forsigtigt supernatanten ved hjælp af en pipette.
- For at undgå uønsket celletab skal du efterlade ~ 100 μL af supernatanten.
- Tilsæt 1 ml suppleret DMEM-medium.
- Ved hjælp af en pipettepistol og tre glas Pasteur-pipetter af faldende størrelser triturerer DRG forsigtigt (~ 10 op / ned pr. Pasteur-pipettestørrelse) til et enkeltcellepræparat.
- I et biosikkerhedsskab fortyndes bovin serumalbumin (BSA) i sterilt PBS til en endelig koncentration på 15%. Opbevares 1 ml aliquots ved -20 °C.
- Opret en BSA-gradient i et 15 ml konisk rør ved at tilføje 2 ml steril PBS og langsomt dispensere 1 ml 15% BSA-opløsning i bunden af røret. Undgå at forstyrre gradienten ved forsigtigt at fjerne pipetten.
- Ved hjælp af en P200-pipette pipetteres langsomt den triturerede gangliersuspension (som indeholder neuronerne) på siden af røret ind i gradienten.
- Centrifuge den neuronholdige BSA-gradient (200 × g, 12 min, stuetemperatur). Indstil centrifugens acceleration og deceleration til minimumshastigheden.
BEMÆRK: Efter centrifugering vil neuronerne være i bunden af røret, mens celleaffaldet vil blive fanget i BSA-gradienten. - Fjern forsigtigt hele supernatanten ved hjælp af en pipette.
- Resuspender cellerne i 500 μL neurobasal.
- Plade 104 neuroner pr. brønd (200 μL neurobasal/brønd) i en lamininbelagt, fladbundet 96-brøndsplade.
BEMÆRK: I gennemsnit vil en efterforsker være i stand til at fylde ~ 8 brønde pr. Mus. - Kultur neuronerne (37 ° C, natten over) for at tillade vedhæftning.
3. Samkultur og flowcytometri
- Fjern langsomt neurobasal fra neuronkulturen.
- Efter 48 timers stimulering med IL-2 og IL-15 (se trin 1.14-1.15) skal NK-cellerne resusponeres og 105 NK-celler/brønd tilsættes neuronkulturen (96-brønds fladbundplade).
BEMÆRK: I gennemsnit vil efterforskeren være i stand til at fylde ~ 6 brønde pr. Mus. - Samkultur cellerne i suppleret neurobasal MX (37 °C, 48 timer).
- Cellerne opsamles, vaskes med PBS (3x) og centrifuge (500 × g, 5 min, 4 °C).
- Kassér supernatanten og pletter cellerne med Viability Dye eFlour-780 (1:1.000, 15 min, 4 °C).
- Cellerne opsamles, vaskes med PBS (3x) og centrifuge (500 × g, 5 min, 4 °C).
- Bloker uspecifikke steder på cellerne med CD16/32 (1:100, 15 min, 4 °C).
- Cellerne opsamles, vaskes med PBS (3x) og centrifuge (500 × g, 5 min, 4 °C).
- Plet (15 min, 4 °C) cellerne med BV421 anti-NK-1.1 (1:100), fluoresceinisothiocyanat (FITC) anti-NKp46 (1:100) og phycoerythrin (PE) anti-GM-CSF (1:100).
- Cellerne opsamles, vaskes med PBS (3x) og centrifuge (500 × g, 5 min, 4 °C).
- Supernatanten kasseres, cellerne resuspenderes i FACS-buffer (500 μL) og immunophenotype NK-cellerne ved flowcytometri11. Se figur 1A for gating-strategien.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
NK-celler blev magnetisk oprenset fra kuldkammeratkontrol (TRPV1 wt: :D TAfl / wt) mus splenocytter ogstimuleret (48 timer) med IL-2 og IL-15. NK-cellerne blev derefter dyrket alene eller co-kultiveret med DRG-neuroner høstet fra nociceptor neuron intakt (kuldkammeratkontrol; TRPV1 wt::D TA fl/wt) eller ablated (TRPV1cre::D TAfl/wt) mus. Cellerne blev derefter udsat for TRPV1-agonisten capsaicin (1 μM) eller dens køretøj. Efter 24 timers samkultur blev NK-cellerne FACS-renset, og deres aktiveringsniveauer blev immunphenotypet ved anvendelse af flowcytometri (figur 1A).
Når de blev dyrket alene, udtrykte NK-celler basale niveauer af GM-CSF og NKp46. Når co-kultiveret med DRG neuroner høstet fra nociceptor intakte (TRPV1 wt: :D TAfl / wt) mus, capsaicin stimulering faldt NK celler ekspression af GM-CSF. Capsaicin havde ingen indflydelse på NK-celleaktivering, når det blev dyrket sammen med DRG-neuroner høstet fra nociceptor-ablated (TRPV1cre: :D TAfl / wt) mus (figur 1A, B). Det er værd at bemærke, at TRPV1cre medieret celleablation ved hjælp af difteritoksin A (DTA) vil eliminere alle TRPV1+ neuroner, både peptiderge og ikke-peptidergiske (MrgD+ celler)13,14.
Figur 1: TRPV1+ neuroner styrer NK-celleaktivering. NK-celler blev magnetisk oprenset fra kuldkammeratkontrol (TRPV1 wt: :D TAfl / wt) mus splenocytter ogstimuleret (48 timer) med IL-2 og IL-15. NK-cellerne blev derefter dyrket alene eller co-kultiveret med DRG-neuroner høstet fra nociceptor neuron intakt (kuldkammeratkontrol; TRPV1 wt::D TA fl/wt) eller ablated (TRPV1cre::D TAfl/wt) mus. Cellerne blev derefter udsat for TRPV1-agonisten capsaicin (1 μM) eller dens køretøj. Efter 24 timers samkultur blev NK-cellerne FACS-renset, og deres aktiveringsniveauer blev immunphenotypet ved anvendelse af flowcytometri (A). Når de blev dyrket alene, udtrykte NK-celler basale niveauer af GM-CSF og NKp46. GM-CSF-ekspression faldt, når NK-celler blev co-dyrket med DRG-neuroner høstet fra nociceptor intakte (TRPV1 wt: :D TAfl / wt) mus ogstimuleret med capsaicin (A, B). Niveauet af NKp46 var upåvirket (A,B). Capsaicin havde ingen indflydelse på NK-celleaktivering, når det blev dyrket sammen med DRG-neuroner høstet fra nociceptor-ablated (TRPV1cre: :D TAfl / wt) mus (A, B). Repræsentativt FACS-plot er vist (A). Data præsenteres som middel ± S.E.M (B). Eksperimentet blev gentaget tre gange, og lignende konklusioner blev opnået. Antal testede dyr er vist. n = 5 biologiske replikater/gruppe (B). P-værdier er vist i figuren og bestemt ved envejs ANOVA post-hoc Bonferroni (B). Forkortelser: TRPV1 = forbigående receptorpotentiale kationkanal underfamilie V medlem 1; NK = naturlig morder; DTA = difteritoksin A; DRG = dorsal rod ganglion; FACS = fluorescensaktiveret cellesortering; GM-CSF = granulocyt-makrofag kolonistimulerende faktor; Veh = køretøj; Hætte = capsaicin. Klik her for at se en større version af denne figur.
| Opløsning | Sammensætning | ||
| Kollagenase/Dispase (C/D) | Steril PBS suppleret med collagenase (1 mg/ml) og Dispase II (2,4 E/ml) | ||
| DMEM | Steril DMEM suppleret med FBS (10%), penicillin (100 I.U.) og streptomycin (100 μg/ml) | ||
| Suppleret RPMI 1640 | Steril RMPI 1640 suppleret med penicillin (100 IE), streptomycin (100 μg/ml), føtalt bovint serum (10%), L-glutamin (300 ng/ml), muserekombinant IL-2 (200 U/ml) og muserekombinant IL-15 (10 ng/ml) | ||
| Neurobasal | Steril neurobasal suppleret med penicillin (100 IE), streptomycin (100 μg/ml), L-glutamin (200 μM), B-27 (2%), NGF (50 ng/ml) og GDNF (2 ng/ml) | ||
| Neurobasal MX | Steril neurobasal suppleret med penicillin (100 IE), streptomycin (100 μg/ml), L-glutamin (200 μM), B-27 (2%), NGF (50 ng/ml), GDNF (2 ng/ml), muserekombinant IL-2 (200 U/ml) og muserekombinant IL-15 (10 ng/ml) | ||
| FACS sorteringsbuffer | Steril PBS suppleret med FBS (2%) og EDTA (1 mM) | ||
Tabel 1: Liste over løsninger og medier, der anvendes i denne protokol. Forkortelser: NGF = nervevækstfaktor; GDNF = gliacelleafledt neurotrofisk faktor; FBS = føtalt bovin serum; PBS = fosfatbufferet saltvand.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Davies et al.11 fandt ud af, at skadede neuroner opregulerer RAE1. Via cellecellekontakt var NKG2D-ekspressive NK-celler derefter i stand til at identificere og eliminere RAE1+ neuroner, hvilket igen begrænser kroniske smerter11. I betragtning af at NK-celler også udtrykker forskellige neuropeptidreceptorer, og at disse neuropeptider er kendt for deres immunmodulerende evner, synes det stadig vigtigere at studere interaktionen mellem NK-celler og nociceptorneuroner in vitro. Her udtænkte vi en simpel co-kulturprotokol, der gør det muligt for efterforskere at studere, hvordan neuroner styrer NK-cellefunktionen, og gensidigt, hvordan NK-celler kunne modulere funktionen af DRG-neuroner. Flowcytometri blev brugt til immunophenotype, hvordan neuroner modulerer NK-celleaktivering. Alternativt kan efterforskere bruge qPCR eller RNA-sekventering til at måle transkriptionsændringer i FACS-oprensede celler eller analysere udskillelsen af udskillede faktorer, såsom cytokiner eller neuropeptider, ved hjælp af ELISA'er. Rådata deponeres og er frit tilgængelige på www.talbotlab.com.
Her fandt vi, at TRPV1 + nociceptor neuroner, sekundært til virkningen af capsaicin, blokerer NK-celleaktivering (GM-CSF-ekspression). Mens capsaicin anvendt ved en høj koncentration kan forringe NK-cellefunktioner14, udelukkede vi denne mulighed eksperimentelt, da NK-celleaktivitet ikke blev påvirket af capsaicin (1 μM) eksponering i fravær af peptidergiske neuroner (TRPV1cre: :D TAfl / wt). Da capsaicin fører til calciumtilstrømning og deres efterfølgende frigivelse i neuropeptider, tyder disse data på, at NK-celleaktivering derfor sandsynligvis er sekundær i forhold til virkningen af opløselige faktorer, der frigives af neuroner. Derfor var en sådan co-kultur tilgang nyttig til at studere, hvordan frigivelsen af neuropeptider kan modulere NK-cellefunktionen. Ud over opløselige faktorer vil de lokale cellecelleinteraktioner mellem de to celletyper sandsynligvis også modulere deres funktioner, noget der bør testes eksperimentelt (f.eks. Sammenligning af virkningen af konditioneret medium med co-kultur).
Samlet set antyder et sådant samspil, at NK-cellefunktionen inden for vævsmikromiljøet sandsynligvis er indstillet af nociceptorneuronterminaler. Disse data understreger vigtigheden af at vurdere inflammatoriske reaktioner holistisk ved samtidig at studere neuronernes og medfødte immuncellers rolle (dvs. NK-celler). For eksempel spiller NK-celle-neuron-krydstale sandsynligvis en vigtig biologisk rolle i sammenhænge, der spænder fra nerveskade, vævsskade, bakteriel eller viral infektion til maligniteter. Fremtidigt arbejde, herunder brugen af denne samkulturmetode, er nødvendigt for at vurdere virkningen af neuron-NK-cellesamspil i sundhed og sygdom.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter at oplyse.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af The New Frontiers in Research Fund (NFRFE201901326), Canadian Institutes of Health Research (162211, 461274, 461275), Canadian Foundation for Innovation (37439), Canada Research Chair-programmet (950-231859), Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (RGPIN-2019-06824) og Fonds de Recherche du Québec Nature et technologies (253380).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-mouse CD16/32 | Jackson Laboratory | Cat no: 017769 | |
| B-27 | Jackson Laboratory | Cat no: 009669 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) culture grade | World Precision Instruments | Cat no: 504167 | |
| BV421 anti-mouse NK-1.1 | Fisher Scientific | Cat no: 12430112 | |
| Cell strainer (50 μm) | Fisher Scientific | Cat no: A3160702 | |
| Collagenase IV | Fisher Scientific | Cat no: 15140148 | |
| Diphteria toxinfl/fl | Fisher Scientific | Cat no: SH3057402 | |
| Dispase II | Fisher Scientific | Cat no: 13-678-20B | |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Fisher Scientific | Cat no: 07-200-95 | |
| EasySep Mouse NK Cell Isolation Kit | Sigma | Cat no: CLS2595 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Sigma | Cat no: C0130 | |
| FACSAria III | Sigma | Cat no: 04942078001 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | Cat no: 806552 | |
| FITC anti-mouse NKp46 | Sigma | Cat no: L2020 | |
| Flat bottom 96-well plate | Sigma | Cat no: 03690 | |
| Glass Pasteur pipette | Sigma | Cat no: 470236-274 | |
| Glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) | VWR | Cat no: 02-0131 | |
| Laminin | Cedarlane | Cat no: 03-50/31 | |
| L-Glutamine | Gibco | Cat no: A14867-01 | |
| Mouse recombinant IL-15 | Gibco | Cat no: 22400-089 | |
| Mouse recombinant IL-2 | Gibco | Cat no: 21103-049 | |
| Nerve Growth Factor (NGF) | Life Technologies | Cat no: 13257-019 | |
| Neurobasal media | PeproTech | Cat no: 450-51-10 | |
| PE anti-mouse GM-CSF | PeproTech | Cat no: 212-12 | |
| Penicillin and Streptomycin | PeproTech | Cat no: 210-15 | |
| Pestles | Stem Cell Technology | Cat no: 19855 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Biolegend | Cat no: 108732 | Clone PK136 |
| RPMI 1640 media | Biolegend | Cat no: 137606 | Clone 29A1.4 |
| TRPV1Cre | Biolegend | Cat no: 505406 | Clone MP1-22E9 |
| Tweezers and dissection tools. | Biolegend | Cat no: 65-0865-14 | |
| U-Shaped-bottom 96-well plate | Biolegend | Cat no: 101319 | |
| Viability Dye eFlour-780 | Becton Dickinson |
References
- Berta, T., Qadri, Y., Tan, P. H., Ji, R. R. Targeting dorsal root ganglia and primary sensory neurons for the treatment of chronic pain. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (7), 695-703 (2017).
- Baral, P., et al. Nociceptor sensory neurons suppress neutrophil and gammadelta T cell responses in bacterial lung infections and lethal pneumonia. Nature Medicine. 24, 417-426 (2018).
- Binshtok, A. M., et al.
- Chesne, J., Cardoso, V., Veiga-Fernandes, H.
- Samad, T. A., et al. Interleukin-1beta-mediated induction of Cox-2 in the CNS contributes to inflammatory pain hypersensitivity. Nature. 410 (6827), 471-475 (2001).
- Godinho-Silva, C., et al. Light-entrained and brain-tuned circadian circuits regulate ILC3s and gut homeostasis. Nature. 574, 254-258 (2019).
- Talbot, J., et al. Feeding-dependent VIP neuron-ILC3 circuit regulates the intestinal barrier. Nature. 579, 575-580 (2020).
- Raulet, D. H., Gasser, S., Gowen, B. G., Deng, W., Jung, H. Regulation of ligands for the NKG2D activating receptor. Annual Review of Immunology. 31, 413-441 (2013).
- Vivier, E., et al. Innate or adaptive immunity? The example of natural killer cells. Science. 331, 44-49 (2011).
- Davies, A. J., et al. Natural Killer Cells Degenerate Intact Sensory Afferents following Nerve Injury. Cell. 176, 716-728 (2019).
- Perner, C., Sokol, C. L. Protocol for dissection and culture of murine dorsal root ganglia neurons to study neuropeptide release. STAR Protocols. 2, 100333 (2021).
- Goswami, S. C., et al. Molecular signatures of mouse TRPV1-lineage neurons revealed by RNA-Seq transcriptome analysis. Journal of Pain. 15, 1338-1359 (2014).
- Mishra, S. K., Tisel, S. M., Orestes, P., Bhangoo, S. K., Hoon, M. A. TRPV1-lineage neurons are required for thermal sensation. EMBO J. 30, 582-593 (2011).
- Kim, H. S., et al. Attenuation of natural killer cell functions by capsaicin through a direct and TRPV1-independent mechanism. Carcinogenesis. 35, 1652-1660 (2014).
