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Biology

स्क्वैश में इंटरस्पेसिफिक हाइब्रिडाइजेशन के लिए भ्रूण बचाव प्रोटोकॉल

Published: September 12, 2022 doi: 10.3791/64071
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1UF/IFAS Tropical Research and Education Center

Summary

लेख में कुकुरबिटा पेपो और कुकुरबिटा मोस्काटा के अंतर-विशिष्ट संकरण से प्राप्त अपरिपक्व भ्रूण के पुनर्जनन के लिए एक भ्रूण बचाव प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है। प्रोटोकॉल को आसानी से दोहराया जा सकता है और स्क्वैश प्रजनन कार्यक्रमों के लिए एक महत्वपूर्ण संसाधन होगा।

Abstract

कुकुरबिटा फसलों (स्क्वैश) में अंतर-विशिष्ट संकरण आनुवंशिक भिन्नता को चौड़ा करने और उपयोगी एलील्स के अंतर्ग्रहण के लिए वांछनीय है। इन विस्तृत क्रॉस से उत्पन्न अपरिपक्व भ्रूण को उचित भ्रूण बचाव तकनीकों का उपयोग करके पुनर्जीवित किया जाना चाहिए। यद्यपि यह तकनीक कई फसलों के लिए अच्छी तरह से स्थापित है, स्क्वैश के लिए उपयुक्त पद्धति का विस्तृत विवरण जो इसके नियमित अनुप्रयोग की अनुमति देगा, की कमी है। यहां, हम सी पेपो और सी मोस्काटा के अंतर-विशिष्ट संकरण के लिए उपयोगी भ्रूण बचाव प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। भ्रूण बचाव के लिए व्यवहार्य संयोजनों की पहचान करने के लिए, 24 इंटरस्पेसिफिक क्रॉस किए गए थे। फल सेट बाईस क्रॉस से प्राप्त किया गया था, जो 92% सफलता दर का संकेत देता है। हालांकि, प्राप्त किए गए अधिकांश फल पार्थेनोकार्पिक थे, जिसमें भ्रूण (खाली बीज) से रहित बीज थे। केवल एक क्रॉस संयोजन में अपरिपक्व भ्रूण होते हैं जिन्हें बेसल प्लांट ग्रोथ मीडिया का उपयोग करके पुनर्जीवित किया जा सकता है। इंटरस्पेसिफिक एफ 1 फल से कुल10 भ्रूण बचाए गए थे, और भ्रूण बचाव की सफलता दर 80% थी। यहां विकसित भ्रूण बचाव प्रोटोकॉल स्क्वैश प्रजनन कार्यक्रमों में अंतर-विशिष्ट संकरण के लिए उपयोगी होगा।

Introduction

कुकुरबिटा (2 एन = 40) कुकुरबिटेसी परिवार में एक अत्यधिक विविध जीनस है जिसमें 27 अलग-अलग प्रजातियां शामिल हैं, जिनमें सेपांच पालतू हैं। इनमें से, कुकुरबिटा मोस्काटा, सी पेपो और सी मैक्सिमा दुनिया भर में सबसे आर्थिक रूप से महत्वपूर्ण हैं। अमेरिका में, सी मोस्काटा और सी पेपो कृषि उत्पादन में दो सबसे महत्वपूर्ण प्रजातियां हैं। सी. पेपो में चार उप-प्रजातियां (ओविफेरा, पेपो, भ्रातृ और गुमाला) शामिल हैं, जिनमें क्रूकनेक, स्ट्रेटनेक, एकोर्न, स्कैलप, कोकोजेल, वनस्पति मज्जा, तोरी और कद्दू 2,3,4,5 के ग्रीष्मकालीन और शीतकालीन स्क्वैश कल्टीवेटर समूह शामिल हैं। मोस्काटा में मुख्य रूप से शीतकालीन स्क्वैश बाजार प्रकार शामिल हैं जिनमें बटरनट, डिकिंसन और पनीर समूह1 शामिल हैं। दो प्रजातियां रूपात्मक और फेनोटाइपिक रूप से विविध हैं, जिसमें सी पेपो को इसकी उपज, कान, झाड़ी के विकास की आदत और फल के आकार, फल के आकार, मांस के रंग और छिलके पैटर्न सहित विविध फल लक्षणों के लिए माना जाता है। मोस्काटा गर्मी और आर्द्रता के साथ-साथ रोग और कीट प्रतिरोध 6,7 के अनुकूलन के लिए बेशकीमती है। मोस्काटा और सी पेपो के बीच अंतर-विशिष्ट संकरण न केवल दो प्रजातियों के बीच वांछनीय विशेषताओं के अंतर्ग्रहण के लिए एक महत्वपूर्ण रणनीति है, बल्कि प्रजननकार्यक्रमों 7,8 में आनुवंशिक आधार के विस्तार की भी अनुमति देता है।

मोस्काटा और सी पेपो के बीच शुरुआती क्रॉस उनकी संगतता और / या टैक्सोनोमिक बाधाओं 9,10,11 को निर्धारित करने के लिए किए गए थे, जबकि बाद के अध्ययनों ने ज्यादातर वांछनीय लक्षण12,13,14 को स्थानांतरित करने पर ध्यान केंद्रित किया। दो प्रजातियों के बीच अंतर-विशिष्ट संकरण ने नए लक्षणों के हस्तांतरण को लक्षित किया है जैसे कि झाड़ी या अर्ध-झाड़ी विकास की आदत और रोग प्रतिरोध, अजैविक तनाव के लिए अनुकूलनशीलता, और सी मोस्काटा 14,15,16 से बढ़ी हुई शक्ति के साथ सी. पेपो से बेहतर उपज। उदाहरण के लिए, सी. पेपो (पी 5) और सी. मोस्काटा (एमओ 3) के बीच विशिष्ट क्रॉसके परिणामस्वरूप फलों की अधिक उपजहुई है, जबकि सी. मोस्काटा परिग्रहण (नाइजीरियाई स्थानीय और मेनिना) का व्यापक रूप से खेती की गई सी. पेपो कल्टीवर्स 17,18 में पोटीवायरस के प्रतिरोध के प्राथमिक स्रोत के रूप में उपयोग किया गया है।

पिछले अध्ययनों से पता चला है कि सी मोस्काटा और सी पेपो के बीच संकरण संभव है लेकिन मुश्किल 8,15 है। अंतर-विशिष्ट क्रॉस के परिणामस्वरूप कोई फल सेट (गर्भपात), व्यवहार्य बीज (खाली बीज) से रहित पार्थेनोकार्पिक फल, बीज रहित फल जहां अपरिपक्व भ्रूण विकसित होने में विफल रहते हैं (स्टेनोस्पर्मोकार्पी), या कुछ अपरिपक्व भ्रूण वाले फल जिन्हें भ्रूण बचाव के माध्यम से परिपक्व पौधों में बचाया जा सकता है। उदाहरण के लिए, सी. पेपो (टेबल क्वीन, मातृ) को सी. मोस्काटा (बड़ा पनीर, पैतृक) के साथ पार करके कोई व्यवहार्य बीज प्राप्त नहीं किए गए थे, हालांकि, पारस्परिक क्रॉस ने 134 परागणों से 57 व्यवहार्य बीज प्राप्तकिए। हायसे ने सी. मोस्काटा और सी. पेपो क्रॉस से व्यवहार्य बीज केवल तभी प्राप्त किएजब रात भर 10 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत पराग का उपयोग करके सुबह 04:00 बजे क्रॉस बनाए गए। बैगगेट ने सी. पेपो (डेलिकाटा) के साथ आठ अलग-अलग सी. मोस्काटा किस्मों को पार किया और बताया कि 103 कुल परागणों में से 83 फल प्राप्त किए गए जो सामान्य दिखाई दिए, लेकिन उनमें से किसी में भी व्यवहार्य बीजनहीं थे। सी. पेपो (एस179) और सी. मोस्काटा (एनके) के बीच एक क्रॉस में, झांग एट अल ने 2,994 बीजों के साथ 15 फल प्राप्त किए, लेकिन उनमें से केवल 12 बीज व्यवहार्य थे, जबकि शेष ने केवल अल्पविकसित विकास प्रदर्शित किया। इन अध्ययनों से पता चलता है कि भले ही सी मोस्काटा और सी पेपो के बीच अंतर-विशिष्ट क्रॉसिंग अत्यधिक फायदेमंद है, क्रॉस से व्यवहार्य बीज वाले फल प्राप्त करना16 की मांग है।

भ्रूण बचाव को प्रारंभिक गर्भपात या खराब विकसित भ्रूण से उत्पन्न होने वाली समस्याओं को दूर करने के लिए एक उपयुक्त विधि के रूप में सुझाया गया है और अपरिपक्व भ्रूण16,20 के उत्थान के लिए सबसे पहले और सबसे सफल इन विट्रो कल्चर तकनीकों में से एक है। भ्रूण बचाव में अल्प-विकसित/अपरिपक्व भ्रूणों की इन विट्रो संस्कृति शामिल होती है, जिसके बाद रोपाई और अंततः परिपक्व पौधों की वसूली की सुविधा के लिए बाँझ पोषक माध्यम में स्थानांतरणहोता है। यद्यपि भ्रूण बचाव आमतौर पर स्क्वैश प्रजनन में उपयोग किया जाता है, उपयुक्त पद्धति का विस्तृत विवरण जो इसके नियमित अनुप्रयोग की अनुमति देगा, की कमी है। कुकुरबिटा प्रजातियों में अंतर-संकरण बाधाओं को दूर करने के लिए भ्रूण बचाव तकनीक का उपयोग 195422 की शुरुआत में बताया गया था। हालांकि, शुरुआती अध्ययनों में भ्रूण बचाव की सफलता या तो रिपोर्ट नहीं की गई थी या बहुत कम थी। मेटवेली एट अल ने सी. पेपो और सी. मार्टिनेजी23 के बीच एक क्रॉस से बचाए गए 100 इंटरस्पेसिफिक हाइब्रिड भ्रूणों के बीच 10% सफलता दर (परिपक्व पौधों में पुनर्जनन) की सूचना दी। सिस्को एट अल ने विभिन्न क्रॉस संयोजनों से प्राप्त भ्रूणों के बीच भ्रूण पुनर्जनन की एक परिवर्तनीय सफलता दर की सूचना दी: सी मैक्सिमा (बोस मैक्स) और सी पेपो (गोल्ड रश) को पार करके प्राप्त संकरों की पुनर्जनन दर 15.5% थी, सी. पेपो (जुकिनी) और सी. मोस्काटा (होकाइडो) के लिए 20% थी, जबकि सी. पेपो (गोल्ड रश) और सी. मोस्काटा (डोलगा) के लिए यह 37.5% थी। जीनोटाइप के अलावा, मीडिया और इन विट्रो संस्कृति की स्थिति तकनीक25,26 की सफलता के लिए महत्वपूर्ण कारक हैं। वर्तमान अध्ययन में, सी मोस्काटा और सी पेपो के बीच विभिन्न क्रॉस संयोजनों का परीक्षण किया गया था, और स्क्वैश में भ्रूण बचाव तकनीक का उपयोग करने के लिए एक सरल पद्धति विकसित की गई थी। एक सरल और आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य भ्रूण बचाव तकनीक का विकास स्क्वैश प्रजनन कार्यक्रमों में अंतर-संकरण और जर्मप्लाज्म वृद्धि की सुविधा प्रदान करेगा।

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Protocol

1. रोपण और परागण

नोट: संगत जीनोटाइप की पहचान करना महत्वपूर्ण है जिनके संकरण के परिणामस्वरूप फल सेट और व्यवहार्य भ्रूण का उत्पादन होगा।

  1. रोपण की स्थिति और रखरखाव
    1. संकरण के लिए स्क्वैश जीनोटाइप (कल्टीवेटर/परिग्रहण) के बीज प्राप्त करें (तालिका 1)।
    2. 1.38 ग्राम/किलोग्राम एन, 1.38 ग्राम/किलोग्राम पी, और 1.38 ग्राम/किलोग्राम के युक्त पूर्ण एनपीके उर्वरक के साथ संशोधित पॉटिंग माध्यम के साथ 50 सेल स्टार्टिंग फ्लैट (25 सेमी चौड़ाई x 50 सेमी लंबाई) भरें।
    3. बीजों को उनकी लंबाई के बराबर गहराई तक बोएं और पॉटिंग माध्यम से कवर करें। खड़े पानी का निर्माण किए बिना फ्लैटों को पानी दें। बाद में, मीडिया को प्रति दिन एक बार हाथ से पानी देकर नम रखें।
    4. दूसरे सच्चे पत्ती चरण में, रोपाई को 25 सेमी से 30 सेमी व्यास के बर्तनों में प्रत्यारोपित करें, जिसमें 3 बड़े चम्मच / बर्तन पर पूर्ण एनपीके उर्वरक शामिल है। पौधों को सप्ताह में एक बार 500 एमएल / पॉट तरल उर्वरक के साथ निषेचित करें जिसमें एनपीके 20: 20: 20 प्रति गैलन पानी की एकाग्रता में जोड़ा जाता है।
    5. प्राकृतिक प्रकाश शासन के तहत 22-28 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान पर ग्रीनहाउस में पौधों को बनाए रखें। जीनोटाइप को विन करने के लिए, ग्रीनहाउस में एक सहायक ट्रेलिस प्रदान करें (चित्रा 1)।
  2. परागण करना
    1. आमतौर पर, स्क्वैश में फूल कल्टीवेटर (चित्रा 2 ए, बी) के आधार पर बीज बोने से 6 से 8 सप्ताह में शुरू होता है। जैसे ही पौधों में फूल आना शुरू होते हैं, नियंत्रित संकरण (क्रॉस) बनाना शुरू करें। ग्रीनहाउस परिस्थितियों में, परागण साल भर किया जा सकता है।
    2. सी. पेपो और सी. मोस्काटा कल्टीवेटर के नर और मादा फूलों की पहचान करें जो अगले दिन परागण के लिए तैयार होंगे। ऐसे फूलों की पहचान करने के लिए उन फूलों की जांच करें जिनकी पंखुड़ियों में पीला रंग होता है लेकिन वे खुले नहीं होते हैं। आकस्मिक कीट परागण को रोकने के लिए मास्किंग टेप का उपयोग करके शीर्ष पर बंद फूलों को धीरे से टेप करें (चित्रा 2 सी, डी)।
    3. अगले दिन की सुबह, फूल परागण के लिए तैयार हैं। संकरणसफलता की दर में सुधार के लिए सुबह 10:00 बजे से पहले परागण करें।
    4. पंखुड़ियों के टेप किए गए शीर्ष भाग को धीरे से हटाकर मादा और नर फूलों को खोलें। नर फूल से पंखुड़ियों को हटा दें और मादा फूल के कलंक पर धीरे से एथर रगड़कर पराग को स्थानांतरित करें (चित्रा 3 ए)।
    5. परागण के बाद, तुरंत परागण वाली मादा फूल को मास्किंग टेप के साथ बंद करें। परागण की तारीख को रिकॉर्ड करने और क्रॉस में उपयोग किए गए पैतृक और मातृ माता-पिता को इंगित करने के लिए एक टैग का उपयोग करें (चित्रा 3 बी)।
    6. एक सफल क्रॉस को एक विस्तारित अंडाशय द्वारा इंगित किया जाता है जो जल्दी से 1 सप्ताह के भीतर एक छोटा फल बनाता है (चित्रा 4 ए)। पौधे को परागण28 (चित्रा 4 बी) के 45-55 दिनों के बाद फसल के लिए तैयार किया जाता है।

2. भ्रूण बचाव तकनीक

  1. मीडिया की तैयारी
    1. एंटीबायोटिक स्टॉक तैयार करें: सेफोटैक्सिम (सोडियम नमक) के लिए, एंटीबायोटिक को 4 एमएल विआयनीकृत या आसुत पानी में घोलें, बाँझ 0.22 μm सिरिंज फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करें, और 0.5 एमएल एलिकोट बनाएं। -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। परिणामी स्टॉक समाधान में 250 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता होगी।
    2. एम्पीसिलीन (सोडियम नमक) के लिए, पाउडर को 10 एमएल पानी में घोलें, बाँझ 0.22 μm सिरिंज फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करें, और 100 मिलीग्राम / एमएल की अंतिम एकाग्रता के साथ 1 एमएल स्टॉक में एलिकोट करें। -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
    3. 1 लीटर बोतल में 500 एमएल आसुत जल में 2.45 ग्राम मध्यम (4.91 ग्राम / एल एकाग्रता) को घोलकर मुराशिगे और स्कूग (एमएस) को मध्यम बनाएं। 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर 1.5 ग्राम गेलन गम और ऑटोक्लेव जोड़ें। आटोक्लेविंग के दौरान गेलन गम पूरी तरह से घुल जाता है।
    4. आटोक्लेविंग के बाद, बोतल को 50 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखकर माध्यम को ठंडा करें। फ्रीजर से एंटीबायोटिक स्टॉक निकालें और उन्हें लैमिनार प्रवाह कैबिनेट में पिघलाएं।
    5. मध्यम बोतल को लामिनार प्रवाह हुड में स्थानांतरित करें। मध्यम बोतल में 0.6 मिलीलीटर सेफोटैक्सिम स्टॉक समाधान (250 मिलीग्राम / एमएल) और 0.25 मिलीलीटर एम्पीसिलीन स्टॉक (100 मिलीग्राम / एमएल) जोड़ें और अच्छी तरह मिलाएं। माध्यम के लगभग 7 एमएल को बाँझ पेट्री डिश (60 मिमी x 15 मिमी) में डालें।
    6. लगभग 15-20 मिनट के लिए पेट्री व्यंजनों में माध्यम को ठोस होने दें। पेट्री व्यंजनों को सीलिंग रैप के साथ बंद करें और उन्हें भंडारण बॉक्स में रखें। कमरे के तापमान पर स्टोर करें।
  2. भ्रूण का बचाव
    1. शुरू करने से पहले, 70% एथिल अल्कोहल के साथ लैमिनार-एयर-फ्लो कैबिनेट को साफ और निष्फल करें।
    2. स्क्वैश फल को मुख्य बेल को तोड़कर / काटकर काटें और प्रयोगशाला सिंक में तरल डिटर्जेंट (जैसे, 0.3% क्लोरोक्सीलेनॉल) से धोकर फल की सतह को कीटाणुरहित करें जब तक कि सभी ढीली गंदगी को हटा न दिया जाए (चित्रा 5 ए)।
    3. पर्याप्त नल के पानी से धो लें। फल को साफ पेपर तौलिए से सुखाएं। फल को लामिनार-वायु-प्रवाह कैबिनेट (चित्रा 5 बी) में ले जाएं।
    4. सतह बाँझ लामिनार-वायु-प्रवाह कैबिनेट में फल पर 70% इथेनॉल छिड़ककर फल को निष्फल करती है। फल को बाँझ चाकू (चित्रा 5 सी) के साथ विभाजित करें और बीज निकालें।
    5. बीज कोट को सड़न रोकने और अपरिपक्व भ्रूण को उजागर करने के लिए बाँझ बल का उपयोग करें (चित्रा 6)। अपरिपक्व भ्रूण को सावधानीपूर्वक पेट्री डिश में रखें जिसमें एमएस माध्यम से सेफोटैक्सिम और एम्पीसिलीन (चित्रा 7 ए) के साथ पूरक हो। पेट्री डिश को बंद करें और रैपिंग फिल्म के साथ सील करें।
      नोट: भ्रूण के आकार के आधार पर, पेट्री डिश में पांच या छह भ्रूण फिट करना संभव है।
    6. 25 डिग्री सेल्सियस और 70% सापेक्ष आर्द्रता पर 16 घंटे की फोटोअवधि के तहत एक विकास कक्ष में भ्रूण के साथ सील पेट्री व्यंजन रखें। यदि संदूषण होता है, तो तुरंत अदूषित भ्रूण को उसी माध्यम के साथ एक नई प्लेट में उपसंस्कृति करें।
    7. कोटिलेडॉन 4 दिनों के बाद विस्तार करना शुरू कर देगा और 10 दिनों में हरा हो जाएगा (चित्रा 7 बी)। इस बिंदु पर, यदि आवश्यक हो, तो ऊतक विस्तार की अनुमति देने के लिए एक ही माध्यम युक्त नई प्लेटों में उप-संवर्धन करें। जड़ें 14 दिनों (चित्रा 7 सी) में दिखाई देना शुरू हो जाएंगी, और 21 दिनों में पौधों में विस्तारित जड़ें और कोटिलेडोन होंगे (चित्रा 7 डी)।
      नोट: प्रोटोकॉल में उपयोग किया जाने वाला संस्कृति माध्यम पूरक विकास नियामकों के बिना शूट और जड़ों में भेदभाव के लिए उपयुक्त है।
    8. इस स्तर पर, पेट्री व्यंजनों से पौधों को हटा दें और धीरे से नल के पानी के साथ जड़ों से मीडिया को धो लें (चित्रा 8)। प्लांटलेट्स को प्लास्टिक कंटेनर (14 सेमी x 9 सेमी x 4 सेमी) में रखें और जड़ों को गीले पेपर तौलिए (चित्रा 9 ए) से कवर करें। कंटेनर को कवर करें और आवश्यकतानुसार पेपर तौलिए को फिर से तैयार करें।
    9. कंटेनरों को कमरे के तापमान (25-28 डिग्री सेल्सियस) और 16 घंटे की फोटोअवधि के साथ रखें। यह कदम पौधों को अनुकूलित करेगा। कंटेनर में 7-10 दिनों के लिए अनुकूलन के बाद, रोपाई लगभग 3-4 इंच लंबी होगी। इस अवधि के दौरान, आवश्यकतानुसार पेपर तौलिए को फिर से तैयार करें।
    10. रोपाई को 50 सेल स्टार्टिंग फ्लैट्स (25 सेमी चौड़ाई x 50 सेमी लंबाई) में स्थानांतरित करें, जैसा कि पहले वर्णित उर्वरक के साथ संशोधित किया गया था और उन्हें ग्रीनहाउस में ले जाएं (चित्रा 9 बी)। सड़ने से बचने के लिए रोपाई को अधिक पानी न दें; आवश्यकतानुसार प्रति सेल लगभग 10-20 एमएल जोड़ें।
    11. दूसरे से तीसरे सच्चे पत्ती चरण में, रोपाई को 30 सेमी व्यास के बर्तनों में प्रत्यारोपित करें जो पहले वर्णित उर्वरक के साथ संशोधित पॉटिंग माध्यम से भरे हुए हैं (चित्रा 10 ए)। पौधों को बेलने के लिए ट्रेलिस समर्थन प्रदान करें और नियंत्रित संकरण करें जब पौधे फूलना शुरू करते हैं, जैसा कि पहले वर्णित है (चित्रा 10 बी)।
    12. प्राकृतिक प्रकाश शासन के तहत 22-28 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान पर ग्रीनहाउस में पौधों को बनाए रखें। फल और बीज विशेषताओं के लिए पौधों का मूल्यांकन करें।

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Representative Results

फल सेट और बीज व्यवहार्यता
विभिन्न प्रकार के क्रॉस-संयोजनों में फल सेट और बीज व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए एक प्रारंभिक परीक्षण आयोजित किया गया था। कुल 15 स्क्वैश जीनोटाइप, चार सी पेपो और 11 सी मोस्काटा को चुना गया था (तालिका 1)। प्रयास किए गए 24 अंतर-विशिष्ट क्रॉस संयोजनों में से, 22 (तालिका 2) के लिए एक फल सेट प्राप्त किया गया था, जो फल सेट में समग्र >92% सफलता का प्रतिनिधित्व करता है। O और M और E और J को पार करके कोई परिपक्व फल प्राप्त नहीं किए गए थे, जबकि F और J को पार करके सबसे अधिक फल (n = 6) प्राप्त किए गए थे (तालिका 2)। विभिन्न क्रॉस संयोजनों के लिए परागण किए गए फूलों की संख्या एक से 11 तक थी, और परागण की सफलता दर 0% से 100% तक थी। फूलों के सेट की संख्या और नर और मादा फूलों के बीच फूलों के सिंक्रनाइज़ेशन के आधार पर विभिन्न क्रॉस संयोजनों में परागित फूलों की संख्या भिन्न होती है। भले ही फल दो को छोड़कर सभी क्रॉस से प्राप्त किए गए थे, लेकिन उन्हें काटने के बाद फलों के मूल्यांकन से पता चला कि अधिकांश फलों ने बिना किसी व्यवहार्य बीज के भ्रूण का गर्भपात किया था। अधिकांश क्रॉस के फल सामान्य दिखते थे लेकिन बीज से रहित थे या अल्पविकसित भ्रूण वाले बीज शामिल थे। सभी क्रॉस संयोजनों से कुल 44 फलों का उत्पादन किया गया था, और सी और जे को पार करके विकसित केवल एक फल में खराब विकसित भ्रूण थे जिन्हें भ्रूण बचाव तकनीक के माध्यम से पुनर्प्राप्त किया जा सकता था।

भ्रूण बचाव और आगे की प्रगति
सी और जे को पार करके विकसित एफ1 इंटरस्पेसिफिक हाइब्रिड में कुल मिलाकर 44 बीज थे, लेकिन उनमें से केवल 10 में भ्रूण थे जिन्हें पीढ़ी की प्रगति के लिए बचाया जा सकता था। शेष बीजों में कोई भ्रूण नहीं था। सभी 10 भ्रूणों को भ्रूण बचाव मीडिया में सुसंस्कृत किया गया था और उनकी वृद्धि और विकास के लिए दैनिक जांच की गई थी। 10 अपरिपक्व भ्रूण का आकार 3.51 मिमी से 8.26 मिमी तक था। भ्रूण बचाव की सफलता दर 80% थी। सी मोस्काटा और सी पेपो (सी और जे) को पार करके विकसित एफ1 इंटरस्पेसिफिक हाइब्रिड (ब्रिज लाइन्स) में 1: 1 (प्रत्येक 50%) अनुपात में दोनों प्रजातियों के जीनोम शामिल थे। इन पौधों को दो प्रजातियों में आर्थिक रूप से महत्वपूर्ण लक्षणों के प्रवेश के लिए पुल लाइनों के रूप में इस्तेमाल किया गया था। उदाहरण के लिए, सी मोस्काटा के साथ इन पुल लाइनों को पार करने से क्रमशः 75% सी मोस्काटा और 25% सी पेपो आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ संकर होंगे। इन पुल लाइनों से प्राप्त फलों में अपरिपक्व भ्रूण के साथ अव्यवहार्य बीज और बीज का मिश्रण था, जिन्हें बाद में पुनर्जनन के लिए ऊतक संवर्धन की आवश्यकता थी। उदाहरण के लिए, फलों में से एक में कुल 54 बीज थे, जिनमें से 14 बीजों में अपरिपक्व भ्रूण थे जिन्हें यहां वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करके बचाया गया था।

Figure 1
चित्र 1: ग्रीनहाउस में लंबवत रूप से बढ़ते स्क्वैश पौधों के लिए ट्रेलिस का समर्थन करना। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्र 2: खुले और टेप किए गए फूलों का चित्रण। ग्रीनहाउस में खुले (ए) नर और (बी) मादा स्क्वैश फूल। (सी) कुकुरबिटा मोस्काटा पैतृक माता-पिता से एक टेप किया हुआ नर फूल। (डी) कुकुरबिटा पेपो मातृ माता-पिता से एक टेप किया गया मादा फूल। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्र 3: परागण का चित्रण। (A) मादा फूल के कलंक पर धीरे-धीरे एथर रगड़कर नर फूल से पराग को स्थानांतरित करें। (बी) परागण के बाद, मादा फूल को टेप करें और परागण की तारीख और क्रॉस में उपयोग किए जाने वाले पैतृक और मातृ माता-पिता को रिकॉर्ड करने के लिए एक टैग का उपयोग करें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
(ए) परागण के बाद, अंडाशय जल्दी से फैल जाएगा, 1 सप्ताह के भीतर एक छोटा फल बन जाएगा। (बी) फल परागण के 45 दिनों के बाद फसल के लिए तैयार हो जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्र 5: फल तैयार करना। (A) फल को डिटर्जेंट से धोएं। लैब सिंक में तरल डिटर्जेंट से धोकर फल की सतह को काटें और कीटाणुरहित करें। (बी) फल को धोकर सुखा लें। फल को साफ पेपर तौलिए के साथ सुखाएं, पर्याप्त नल के पानी से कुल्ला करने के बाद, और इसे लामिनार-एयर-फ्लो कैबिनेट में ले जाएं। (सी) फल को बाँझ चाकू से खोलें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्र 6: बीज से भ्रूण निकालें। बीज कोट को सड़न रोकने और अपरिपक्व भ्रूण को उजागर करने के लिए बाँझ बल का उपयोग करें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 7
चित्र 7: एमएस मीडिया में भ्रूण पुनर्जनन। (A) सावधानीपूर्वक अपरिपक्व भ्रूण को एक पेट्री डिश में रखें जिसमें एमएस माध्यम होता है। (बी) कोटिलेडोन का विस्तार होगा और 10 दिनों के भीतर हरा हो जाएगा। (C) जड़ें 14 दिनों में दिखाई देने लगेंगी। (डी) 21 दिनों में, प्लांटलेट में विस्तारित जड़ें और कोटिलेडोन होंगे जो अनुकूलन के लिए प्लास्टिक कंटेनर में स्थानांतरित करने के लिए तैयार हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 8
चित्र 8: जड़ों को धो लें। पेट्री व्यंजनों से पौधों को हटा दें और धीरे से नल के पानी के साथ जड़ों से मीडिया को धो लें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 9
चित्र 9: पौधों को अनुकूलित करें। (A) पौधों को एक प्लास्टिक के कंटेनर में रखें और जड़ों को 5 दिनों के लिए गीले पेपर तौलिया से ढक दें ताकि उन्हें अनुकूलित किया जा सके। (बी) प्लांटलेट्स को सेल ट्रे में स्थानांतरित करें जिसमें पूर्ण एनपीके उर्वरक के साथ संशोधित वाणिज्यिक पॉटिंग मिश्रण होता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 10
चित्र 10: रोपाई को बर्तनों में प्रत्यारोपित करें। (A) दूसरे से तीसरे सच्चे पत्ती चरण में, रोपाई को उर्वरक के साथ संशोधित पॉटिंग माध्यम से भरे 30 सेमी व्यास के बर्तनों में प्रत्यारोपित करें। (बी) पौधों को बेलने के लिए ट्रेलिस समर्थन प्रदान करें और जब पौधे फूलना शुरू करते हैं तो नियंत्रित संकरण करें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

लैब कोड प्रजातियां स्रोत
एक ग. मोस्काटा स्थानीय किसान बाजार
B ग. मोस्काटा स्थानीय किसान बाजार
C ग. मोस्काटा स्थानीय किसान बाजार
D ग. मोस्काटा स्थानीय किसान बाजार
E ग. मोस्काटा स्थानीय किसान बाजार
F ग. मोस्काटा स्थानीय किसान बाजार
G ग. मोस्काटा फ्लोरिडा प्रजनन लाइन विश्वविद्यालय
H ग. मोस्काटा फ्लोरिडा प्रजनन लाइन विश्वविद्यालय
मैं C. पेपो NCRPIS (उत्तर मध्य क्षेत्रीय संयंत्र घुसपैठ स्टेशन)
J C. पेपो NCRPIS (उत्तर मध्य क्षेत्रीय संयंत्र घुसपैठ स्टेशन)
M C. पेपो NCRPIS (उत्तर मध्य क्षेत्रीय संयंत्र घुसपैठ स्टेशन)
O ग. मोस्काटा फ्लोरिडा प्रजनन लाइन विश्वविद्यालय
Q ग. मोस्काटा फ्लोरिडा प्रजनन लाइन विश्वविद्यालय
W C. पेपो फ्लोरिडा प्रजनन लाइन विश्वविद्यालय
Y ग. मोस्काटा बर्पी सीड्स कंपनी

तालिका 1: स्क्वैश के कुल 15 जीनोटाइप, चार सी पेपो और 11 सी मोस्काटा, का उपयोग इंटरस्पेसिफिक क्रॉस के लिए अध्ययन में किया गया था।

क्रॉस (महिला x पुरुष) परागण वाले फूलों का एन N. फलों का फल सेट (%) निरस्त बीजों का N. अपरिपक्व भ्रूण का एन बचाए गए भ्रूण ों का एन
A (C. moschata) x I (C. pepo) 5 4 80 0 0 0
H (C. moschata) x I (C. pepo) 2 2 100 0 0 0
B (C. moschata) x J (C. pepo) 2 1 50 0 0 0
C (C. moschata) x J (C. pepo) 3 1 33.3 44 10 8
E (C. moschata) x J (C. pepo) 6 0 0 0 0 0
F (C. moschata) x J (C. pepo) 11 6 54.5 0 0 0
G (C. moschata) x J (C. pepo) 2 2 100 0 0 0
J (C. pepo) x H (C. moschata) 7 2 28.6 0 0 0
J (C. pepo) x O (C.moschata) 6 1 16.7 0 0 0
O (C. moschata) x J (C. pepo) 6 1 16.7 0 0 0
Q (C. moschata) x J (C. pepo) 1 1 100 0 0 0
C (C. moschata) x M (C. pepo) 4 3 75 0 0 0
D (C. moschata) x M (C. pepo) 1 1 100 0 0 0
F (C. moschata) x M (C. pepo) 9 5 55.6 0 0 0
G (C. moschata) x M (C. pepo) 1 1 100 0 0 0
O (C. moschata) x M (C. pepo) 22 0 0 0 0 0
Q (C. moschata) x M (C. pepo) 2 1 50 0 0 0
F (C. moschata) x W (C. pepo) 1 1 100 0 0 0
G (C. moschata) x W (C. pepo) 1 1 100 0 0 0
H (C. moschata) x W (C. pepo) 2 1 50 0 0 0
O (C. moschata) x W (C. pepo) 0 0 0 0 0 0
Y (C. moschata) x W (C. pepo) 3 2 66.7 0 0 0
M (C. pepo) x H (C.moschata) 3 2 66.7 0 0 0
M (C. pepo) x O (C.moschata) 4 4 100 0 0 0
कुल 44 10 8

तालिका 2: स्क्वैश के 15 जीनोटाइप और संबंधित फल सेट, गर्भपात किए गए बीजों की संख्या, अपरिपक्व भ्रूण और सफल भ्रूण बचाव के साथ क्रॉस संयोजन का प्रयास किया गया।

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Discussion

मोस्काटा और सी पेपो के बीच सफल अंतर-विशिष्ट संकरण के लिए दो मुख्य बाधाएं हैं: क्रॉस-संगतता बाधा, जो संकर भ्रूण का उत्पादन करने के लिए जीनोटाइप प्रतिक्रिया द्वारा निर्धारित की जाती है, और पोस्ट-निषेचन बाधाएं, जो संकर भ्रूण के विकास में बाधा डालती हैं। जैसा कि स्क्वैश के लिए पहले बताया गया था, वर्तमान अध्ययन में क्रॉस-संगतता परीक्षण से पता चला है कि अधिकांश फल पार्थेनोकार्पिक रूप से विकसित हुए हैं, जिसमें अधिकांश बीज अव्यवहार्य16 हैं। माता-पिता के जीनोटाइप का सी मोस्काटा और सी पेपो के बीच अंतर-विशिष्ट संकरण की संगतता पर काफी प्रभाव पड़ता है। वर्तमान अध्ययन में परीक्षण किए गए 24 क्रॉस संयोजनों में से, केवल एक (सी और जे) ने भ्रूण बचाव के लिए अपरिपक्व भ्रूण का उत्पादन किया। जैसे, अध्ययन विकसित प्रोटोकॉल की दक्षता का परीक्षण करने के लिए जैविक प्रतिकृति की कमी से सीमित था। हालांकि, सी और जे क्रॉस से बचाए गए 10 अपरिपक्व भ्रूणों के लिए 80% की पुनर्जनन दक्षता प्राप्त की गई थी। पिछले अध्ययनों ने सी. पेपो और सी. मोस्काटा क्रॉस के लिए भ्रूण बचाव से कम पुनर्जनन सफलता की सूचना दी है, इस प्रकार नए प्रोटोकॉल14,15 की प्रभावशीलता का प्रदर्शन किया है। उदाहरण के लिए, डी ओलिवेरा एट अल ने बताया कि 26 भ्रूणों में से सी पेपो सीवी के बीच एक क्रॉस से प्राप्त किया गया था। असमारा और सी मोस्काटा सीवी। पिरामोइता, कोई पुनर्जन्म प्राप्त नहीं किया गया था। हालांकि, लेखकों ने 16% पुनर्जनन सफलता की सूचना दी जब जीनोटाइप (सी. पेपो सीवी. अस्मारा और सी. मोस्काटा सीवी डूडा) के एक अलग संयोजन का उपयोग किया गया था। विभिन्न कुकुरबिटा प्रजातियों के बीच अंतर-विशिष्ट संकरण के एक अन्य अध्ययन में, राखा एट अल ने क्रमशः सी. फिसिफोलिया एक्स सी. पेपो और सी. मार्टिनेजी एक्स सी. पेपो को पार करके प्राप्त अपरिपक्व भ्रूण से 40% और15% की पुनर्जनन दक्षता की सूचना दी। वर्तमान अध्ययन ने पहले से स्थापित प्रोटोकॉल की तुलना में पूरक विकास नियामकों से रहित एमएस माध्यम का उपयोग किया, जिसने भ्रूण बचाव 15,29,30 के लिए जटिल मीडिया को नियोजित किया। इसके अलावा, एंटीबायोटिक दवाओं सेफोटैक्सिम और एम्पीसिलीन के अलावा माइक्रोबियल संदूषण को रोकने के लिए पर्याप्त था। इस प्रकार, माध्यम सस्ता होने के फायदे प्रदान करता है, उच्च कुशल कर्मियों की आवश्यकता के बिना तैयार करना आसान है, और इसे सीमित संसाधनों के साथ छोटे प्रजनन कार्यक्रमों द्वारा अपनाया जा सकता है।

वर्तमान अध्ययन में, भ्रूण परिपक्वता और उत्थान को अधिकतम करने के लिए परागण (डीपीपी) के 45-55 दिनों के बाद फलों की कटाई की गई थी। वर्तमान अध्ययन के लिए चुना गया डीपीपी एक पिछली रिपोर्ट पर आधारित था जिसमें दिखाया गया था कि भ्रूण के लिए ऊर्जा भंडार (ज्यादातर लिपिड और प्रोटीन) का इष्टतम संचय 60 डीपीपी31,32 पर हुआ था। मस्कमेलॉन में, नुनेज़-पैलेनियस एट अल ने भ्रूण बचाव और डीपीपी30 की सफलता के बीच एक सकारात्मक सहसंबंध की सूचना दी।

वर्तमान अध्ययन में, सी मोस्काटा के साथ इंटरस्पेसिफिक एफ1 संकरों को पार करके विकसित फलों की दूसरी पीढ़ी ने सामान्य बीज नहीं दिए। यह अवलोकन इंगित करता है कि एक ही पीढ़ी में सी मोस्काटा और सी पेपो के बीच प्रजनन बाधा को दूर करना मुश्किल है जैसा कि पहले बताया गयाथा। हालांकि, वर्तमान प्रोटोकॉल को अपनाने से प्रजनन कार्यक्रमों में कुकुरबिटा इंटरस्पेसिफिक हाइब्रिड के सफल विकास में सहायता मिलेगी। प्रजनकों के लिए जर्मप्लाज्म पहुंच को व्यापक बनाने के लिए जीनोटाइप की एक विस्तृत सरणी की क्रॉस-संगतता निर्धारित करने के लिए आगे के अध्ययन की आवश्यकता है

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Disclosures

लेखक ों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।

Acknowledgments

इस कार्य को यूएसडीए राष्ट्रीय खाद्य और कृषि संस्थान, एनआरएस परियोजना सं 2006 द्वारा समर्थित किया गया था। एफएलए-टीआरसी-006176 और फ्लोरिडा इंस्टीट्यूट ऑफ फूड एंड एग्रीकल्चर साइंसेज विश्वविद्यालय।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ampicillin Fisher Scientific BP1760-5
autoclave Steris AMSCO LAB 250
balance
cefotaxime Sigma Alfrich C 7039
centrifuge tubes (1.5 ml) Sigma Alfrich T9661
detergent
ethanol, 95% Decon Labs 2805HC
forceps VWR 82027-408
gellan gum Caisson Laboratories G024
growth chamber or illuminated shelf
laminar hood / biosafety cabinet The Baker Company, Inc Edgegard
masking tape Uline S-11735
media bottle
Murashige & Skoog Medium Research Products International M10200
NPK fertilizer (20-20-20) BWI Companies, Inc  PR200
Osmocote Plus fertilizer BWI Companie,s Inc OS90590
Parafilm M Sigma Alfrich P7793
Petri dish (60 x 15 mm) USA Scientific, Inc 8609-0160
plant pots BWI Companies, Inc NP4000BXL
plastic food containers, reused Oscar Mayer 4470003330
plastic hang tags Amazon B07QTZRY6T
potting mix Jolly Gardener Pro-Line C/B
seedling starter trays BWI Companies Inc GPPF128S4
syringe filter (0.22 um ) ExtraGene B25CA022-S
trellis support The Home Depot  2A060006
water bath

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References

  1. Paris, H. S. Genetic Resources of Pumpkins and Squash, Cucurbita spp. Genetics and Genomics of Cucurbitaceae. Plant Genetics and Genomics: Crops and Models. Grumet, R., Katzir, N., Garcia-Mas, J. 20, (2016).
  2. Gong, L., Stift, G., Kofler, R., Pachner, M., Lelley, T. Microsatellites for the genus Cucurbita and an SSR-based genetic linkage map of Cucurbita pepo L. Theoretical and Applied Genetics. 117 (1), 37-48 (2008).
  3. Paris, H. S., et al. Assessment of genetic relationships in Cucurbita pepo (Cucurbitaceae) using DNA markers. Theoretical and Applied Genetics. 106 (6), 971-978 (2003).
  4. Robinson, R. W., Decker-Walters, D. S. Cucurbits. , CAB International. Wallingford, Oxon, UK. (1997).
  5. Teppner, H. Cucurbita pepo (Cucurbitaceae)-history, seed coat types, thin coated seeds and their genetics. Phyton (Horn). 40 (1), 1-42 (2000).
  6. Hazra, P., Mandal, A. K., Dutta, A. K., Ram, H. H. Breeding pumpkin (Cucurbita moschata Duch. Ex Poir.) for fruit yield and other characters. International Journal of Plant Breeding. 1 (1), 51-64 (2007).
  7. Paris, H. S. History of the cultivar-groups of Cucurbita pepo. Horticultural Reviews-Westport Then New York. 25, 71 (2001).
  8. Baggett, J. R. Attempts to cross Cucurbita moschata (Duch.) Poir. 'Butternut and C. pepo L. 'Delicata'. The Cucurbit Genetics Cooperative. 2, 32-34 (1979).
  9. Erwin, A. T., Haber, E. S. Species and Varietal Crosses in Cucurbits. Agricultural Experiment Station, Iowa State College of Agriculture and Mechanical Arts. , (1929).
  10. Whitaker, T. W., Bohn, G. W. The taxonomy, genetics, production and uses of the cultivated species of Cucurbita. Economic Botany. 4 (1), 52-81 (1950).
  11. Bemis, W. P., Nelson, J. M. Interspecific hybridization within the genus Cucurbita I, fruit set, seed and embryo development. Journal of the Arizona Academy of Science. 2 (3), 104-107 (1963).
  12. Washek, R. L., Munger, H. M. Hybridization of Cucurbita pepo with disease resistant Cucurbita species. The Cucurbit Genetics Cooperative. 6, 92 (1983).
  13. Davoodi, S., Olfati, J. A., Hamidoghli, Y., Sabouri, A. Standard heterosis in Cucurbita moschata and Cucurbita pepo interspecific hybrids. International Journal of Vegetable Science. 22 (4), 383-388 (2016).
  14. De Oliveira, A. C. B., Maluf, W. R., Pinto, J. E. B., Azevedo, S. M. Resistance to papaya ringspot virus in summer squash Cucurbita pepo L. introgressed from an interspecific C. pepo× C. moschata cross. Euphytica. 132 (2), 211-215 (2003).
  15. Rakha, M. T., Metwally, E. I., Moustafa, S. A., Etman, A. A., Dewir, Y. H. Production of Cucurbita interspecific hybrids through cross pollination and embryo rescue technique. World Applied Sciences Journal. 20 (10), 1366-1370 (2012).
  16. Zhang, Q. I., Yu, E., Medina, A. Development of advanced interspecific-bridge lines among Cucurbita pepo, C. maxima, and C. moschata. HortScience. 47 (4), 452-458 (2012).
  17. Brown, R. N., Bolanos-Herrera, A., Myers, J. R., Miller Jahn, M. Inheritance of resistance to four cucurbit viruses in Cucurbita moschata. Euphytica. 129 (3), 253-258 (2003).
  18. Pachner, M., Paris, H. S., Winkler, J., Lelley, T. Phenotypic and marker-assisted pyramiding of genes for resistance to zucchini yellow mosaic virus in oilseed pumpkin (Cucurbita pepo). Plant Breeding. 134 (1), 121-128 (2015).
  19. Hayase, H. Cucurbita-crosses. XV. Flower pollination at 4 am in the production of C. pepo x C. moschata F1 hybrids. Japanese Journal of Breeding. 13 (2), 76-82 (1963).
  20. Reed, S. Embryo rescue. Plant development and biotechnology. , 235-239 (2004).
  21. Sharma, D. R., Kaur, R., Kumar, K. Embryo rescue in plants-a review. Euphytica. 89 (3), 325-337 (1996).
  22. Wall, J. R. Interspecific hybrids of Cucurbita obtained by embryo culture. Proceedings of the American Society of Horticultural Science. 63, 427-430 (1954).
  23. Metwally, E. I., Haroun, S. A., El-Fadly, G. A. Interspecific cross between Cucurbita pepo L. and Cucurbita martinezii through in vitro embryo culture. Euphytica. 90 (1), 1-7 (1996).
  24. Sisko, M., Ivancic, A., Bohanec, B. Genome size analysis in the genus Cucurbita and its use for determination of interspecific hybrids obtained using the embryo-rescue technique. Plant Science. 165 (3), 663-669 (2003).
  25. Giancaspro, A., et al. Optimization of an in vitro embryo rescue protocol for breeding seedless table grapes (Vitis vinifera L.) in Italy. Horticulturae. 8 (2), 121 (2022).
  26. Warchol, M., et al. The effect of genotype, media composition, pH and sugar concentrations on oat (Avena sativa L.) doubled haploid production through oat x maize crosses. Acta Physiologiae Plantarum. 40 (5), 1-10 (2018).
  27. Nepi, M., Pacini, E. Pollination, pollen viability and pistil receptivity in Cucurbita pepo. Annals of Botany. 72 (6), 527-536 (1993).
  28. Harvey, W. J., Grant, D. G., Lammerink, J. P. Physical and sensory changes during development and storage of buttercup squash. New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science. 25 (4), 341-351 (1997).
  29. Moon, P., Meru, G. Embryo rescue of aged Cucurbita pepo seeds using squash rescue medium. Journal of Horticultural Science and Research. 2 (1), 62-69 (2018).
  30. Nuñez-Palenius, H. G., Ramírez-Malagón, R., Ochoa-Alejo, N. Muskmelon embryo rescue techniques using in vitro embryo culture. Plant Embryo Culture. , Humana Press. 107-115 (2011).
  31. Vining, K. J., Loy, J. B. Seed development and seed fill in hull-less seeded cultigens of pumpkin (Cucurbita pepo L). Cucurbitaceae 98: Evaluation and Enhancement of Cucurbit Germplasm. McCreight, J. M. , ASHS Press. Alexandria, VA. 64-69 (1998).
  32. Vining, K. J. Seed development in hull-less-seeded pumpkin (Cucurbita pepo L.). , University of New Hampshire. L.), Durham, NH. M.S. Thesis (1999).

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जीव विज्ञान अंक 187
स्क्वैश में इंटरस्पेसिफिक हाइब्रिडाइजेशन के लिए भ्रूण बचाव प्रोटोकॉल
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Fu, Y., Shrestha, S., Moon, P.,… More

Fu, Y., Shrestha, S., Moon, P., Meru, G. Embryo Rescue Protocol for Interspecific Hybridization in Squash. J. Vis. Exp. (187), e64071, doi:10.3791/64071 (2022).

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