Summary
Il presente protocollo descrive la contaminazione degli alcaloidi pirrolizidinici (PA) nei campioni di tè provenienti da erbe infestanti produttrici di PA nei giardini del tè.
Abstract
Gli alcaloidi pirrolizidinici tossici (PA) si trovano nei campioni di tè, che rappresentano una minaccia per la salute umana. Tuttavia, la fonte e la via della contaminazione da PA nei campioni di tè sono rimaste poco chiare. In questo lavoro, è stato sviluppato un metodo adsorbente combinato con UPLC-MS / MS per determinare 15 PA nell'erba Ageratum conyzoides L., nel terreno rizosferico di A. conyzoides , foglie di tè fresco e campioni di tè essiccato . I recuperi medi variavano dal 78% al 111%, con deviazioni standard relative dello 0,33% -14,8%. Quindici coppie di campioni di terreno rizosferico di A. conyzoides e A. conyzoides e 60 campioni di foglie di tè fresco sono stati raccolti dal giardino del tè Jinzhai nella provincia di Anhui, in Cina, e analizzati per i 15 PA. Non tutti i 15 PA sono stati rilevati nelle foglie di tè fresco, ad eccezione dell'intermedio-N-ossido (ImNO) e della senecionina (Sn). Il contenuto di ImNO (34,7 μg/kg) era superiore a quello di Sn (9,69 μg/kg). Inoltre, sia ImNO che Sn erano concentrati nelle foglie giovani della pianta del tè, mentre il loro contenuto era inferiore nelle foglie vecchie. I risultati hanno indicato che i PA nel tè sono stati trasferiti attraverso il percorso delle erbacce che producono PA-terra-foglie di tè fresche nei giardini del tè.
Introduction
Come metaboliti secondari, gli alcaloidi pirrolizidinici (PA) proteggono le piante da erbivori, insetti e agenti patogeni 1,2. Fino ad ora, oltre 660 PA e ossidi di PA-N (PANO) con strutture diverse sono stati trovati in più di 6.000 specie di piante in tutto il mondo 3,4. Le piante produttrici di PA si trovano principalmente nelle famiglie Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae e Apocynaceae 5,6. I PA sono facilmente ossidati in alcaloidi deidropirrolizidinici instabili, che hanno una forte elettrofilicità e possono attaccare nucleofili come DNA e proteine, con conseguente necrosi delle cellule del fegato, occlusioni venose, cirrosi, ascite e altri sintomi 7,8. Il principale organo bersaglio della tossicità PA è il fegato. Le PA possono anche causare tossicità polmonare, renale e di altri organi e tossicità mutagena, cancerogena e dello sviluppo 9,10.
Casi di avvelenamento umano e animale sono stati segnalati in molti paesi dall'ingestione di erbe tradizionali, integratori o tè contenenti PA o dalla contaminazione indiretta di alimenti come latte, miele o carne (tossici dall'ingestione di pascoli contenenti PA)11,12,13. Le conclusioni dell'Autorità europea per la sicurezza alimentare (EFSA) indicano che sostanze come il tè (alle erbe) sono un'importante fonte di esposizione umana agli AP/PANO14. I campioni di tè non producono PA, mentre le piante produttrici di PA si trovano comunemente nei giardini del tè (ad esempio, Emilia sonchifolia, Senecio angulatus e Ageratum conyzoides)15. In precedenza si sospettava che il tè potesse essere contaminato da PA provenienti dai loro impianti di produzione durante la raccolta e la lavorazione. Tuttavia, i PA sono stati rilevati anche in alcune foglie di tè raccolte a mano (cioè nessun impianto che produce PA), suggerendo che ci devono essere altre vie o fonti di contaminazione16. È stato condotto un esperimento di co-coltivazione di erba (Senecio jacobaea) con melissa (Melissa officinalis), menta piperita (Mentha piperita), prezzemolo (Petroselinum crispum), camomilla (Matricaria recutita) e nasturzio (Tropaeolum majus) e i risultati hanno mostrato che le PA sono state rilevate in tutte queste piante17. È stato verificato che le PA sono effettivamente trasferite e scambiate tra piante viventi attraverso il suolo18,19. Van Wyk et al.20 hanno scoperto che il tè rooibos (Aspalathus linearis) era gravemente contaminato in siti ricchi di erba e conteneva PA dello stesso tipo e proporzione. Tuttavia, non sono stati rilevati PA nel tè rooibos in siti privi di erbacce.
Attualmente, la spettrometria di massa tandem per cromatografia liquida ad altissime prestazioni (UPLC-MS/MS) ad alta selettività e sensibilità è stata ampiamente utilizzata nell'analisi qualitativa e quantitativa delle PA nei prodotti agricoli e alimentari21,22. Il metodo di trattamento del campione è solitamente costituito dall'estrazione in fase solida (SPE) o dalla pulizia QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe) di estratti di matrici alimentari complesse, che possono ottenere la massima sensibilità possibile12,19. Tuttavia, mancano ancora solidi metodi analitici che consentano il rilevamento e la quantificazione di PA in matrici complesse come suolo, erbe infestanti e foglie di tè fresco.
Questo studio ha analizzato 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erbe infestanti e campioni di terreno rizosferico con UPLC-MS / MS combinato con un metodo di purificazione adsorbente. Inoltre, 15 campioni di terreno rizosferico accoppiati di erba e 60 campioni di foglie di tè fresco sono stati raccolti da cinque siti di campionamento nel giardino del tè Jinzhai nella provincia di Anhui, in Cina, e sono stati analizzati per 15 PA. Questi risultati possono fornire un metodo di indagine e alcune informazioni sulla fonte e il percorso dei PA (contaminazione) nei campioni di tè per garantire la qualità e la sicurezza del tè.
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Protocol
Per il presente studio sono state raccolte le seguenti specie di piante infestanti: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. e Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. Le foglie di tè fresco sono state raccolte dalla varietà di alberi di tè Longjing 43 # e i campioni di tè essiccato erano tè disponibili in commercio elaborati secondo il processo di produzione del tè verde (vedi Tabella dei materiali).
1. Raccolta dei campioni
- Raccogli 40 campioni reali.
- Raccogli 10 erbacce, 10 terreni e 10 foglie di tè fresco in modo casuale da più giardini di tè.
NOTA: Per il presente studio, il terreno è stato campionato ad una profondità di 20 cm con una quantità di campione di 200 g. - Raccogli casualmente 10 prodotti a base di tè essiccati (250 g) da un supermercato.
- Raccogli 10 erbacce, 10 terreni e 10 foglie di tè fresco in modo casuale da più giardini di tè.
- Raccogli campioni di erbe infestanti, terra e foglie di tè fresco per studiare la fonte di contaminazione delle PA nel tè.
- Impostare cinque punti di campionamento nella stessa piantagione di tè, con tre repliche in ogni punto.
- Raccogliere campioni di erba Ageratum conyzoides L. con il più alto contenuto di PA che si trova comunemente nei giardini del tè.
NOTA: La quantità del campione era di 250 g per il presente studio. - Raccogli i campioni di terreno.
NOTA: I campioni di terreno erano terreno rizosferico di A. conyzoides ad una profondità di 20 cm con una quantità di campione di 200 g. - Raccogli le foglie di tè fresche da diverse parti delle piante del tè, tra cui una gemma con due foglie, una gemma con tre foglie, una gemma con quattro foglie e foglie mature.
NOTA: La quantità del campione era di 250 g.
2. Trattamento del campione
- Pretrattare i campioni seguendo i passaggi seguenti.
- Macinare il tè essiccato e i campioni di terreno con un macinino, passare i campioni polverizzati attraverso un setaccio a 200 maglie e conservarli a -20 °C.
NOTA: Il tè essiccato era un prodotto di tè disponibile in commercio (vedi Tabella dei materiali), quindi è stato direttamente frantumato e setacciato per la conservazione. I campioni di terreno (200 g) sono stati posti in un luogo ventilato al buio per asciugare all'aria per circa una settimana. - Omogeneizzare l'erba e le foglie di tè fresco con un omogeneizzatore e conservarle a -20 °C.
- Macinare il tè essiccato e i campioni di terreno con un macinino, passare i campioni polverizzati attraverso un setaccio a 200 maglie e conservarli a -20 °C.
- Eseguire il trattamento a campione dei prodotti a base di tè essiccati, foglie di tè fresco ed erbe infestanti.
- Pesare 1,00 g di ciascun campione (prodotti a base di tè essiccati, foglie di tè fresco ed erbe infestanti) e metterlo in una provette da centrifuga da 50 ml.
- Aggiungere 10 mL di soluzione di acido solforico 0,1 mol/L e vortice per 2 minuti per l'estrazione in fase solida (utilizzando cartuccia SPE, vedere Tabella dei materiali) e 1 min per la purificazione adsorbente. Eseguire l'estrazione ad ultrasuoni23 per 15 minuti, quindi centrifugare per 10 minuti ad una velocità di 9.390 x g a temperatura ambiente.
NOTA: la potenza dell'oscillatore ad ultrasuoni era di 290 W, la frequenza di oscillazione era di 35 kHz e la temperatura era impostata su 30 °C. - Trasferire il surnatante in una provetta da centrifuga da 50 ml con un contagocce in plastica.
- Seguire i passaggi precedenti per ripetere l'estrazione una volta. Combinare i due surnatanti
- Attivare le cartucce SPE con 5 mL di metanolo e 5 mL di acqua deionizzata. Aggiungere 10 mL di surnatante alla cartuccia preattivata ed eseguire la pulizia del campione.
- Dopo che il livello della soluzione del campione ha raggiunto lo strato superiore delle cartucce, eluire gli analiti con 5 ml di soluzione di acido formico all'1% e quindi 5 ml di metanolo. Scartare l'eluato.
- Eluire con 5 mL di metanolo (contenente lo 0,5% di acqua ammoniaca), filtrare l'eluato attraverso un filtro a membrana da 0,22 μm e analizzare mediante UPLC-MS/MS (vedere Tabella dei materiali).
- Eseguire la pulizia del campione utilizzando adsorbenti.
- Prelevare 2 mL di surnatante (fase 2.2.4) in una provetta da centrifuga da 10 mL riempita con gli adsorbenti di GCB:PSA:C18 (10 mg:20 mg:15 mg; vedere Tabella dei materiali), vortice per 1 minuto e centrifugare a 9.390 x g per 8 minuti a temperatura ambiente.
- Far passare 1 mL di surnatante attraverso un filtro a membrana da 0,22 μm prima dell'analisi mediante UPLC-MS/MS.
- Eseguire il trattamento dei campioni di terreno.
- Pesare un campione di terreno di 1,00 g. Metterlo in una provetta da centrifuga da 50 mL e aggiungere 0,1 mL di soluzione di citrato trisodico 0,1 mol/L (vedere Tabella dei materiali) per regolare il valore del pH del terreno a 6,0.
- Lasciare riposare per 2 minuti, quindi aggiungere 10 ml di soluzione di metanolo acido solforico 0,1 mol / L, vortice per 2 minuti e agitare per 30 minuti, quindi eseguire l'estrazione ad ultrasuoni per 30 minuti.
- Centrifugare a 9.390 x g per 10 minuti e trasferire il surnatante in una provetta da centrifuga da 50 ml con un contagocce di plastica.
- Seguire i passaggi precedenti per ripetere l'estrazione e combinare il surnatante due volte.
NOTA: il metodo di purificazione era lo stesso dei punti 2.2.5.1 e 2.2.5.2.
3. Analisi strumentale
- Rilevare i 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erba e terreno (campioni della fase 2) utilizzando un sistema UPLC-MS/MS disponibile in commercio (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) (vedere Tabella dei materiali).
- Impostare la temperatura della colonna a 40 °C, la portata a 0,250 ml/min e il volume di iniezione a 3 μL.
- Impostare la fase mobile A: metanolo (contenente 0,1% di acido formico + 1 mmol/L di formiato di ammonio) e la fase mobile B: acqua (contenente 0,1% di acido formico + 1 mmol/L di formiato di ammonio).
- Impostare una procedura di eluizione del gradiente: 10% A da 0,0 min a 0,25 min, 10%-30% A da 0,25 min a 6,0 min, 30%-40% A da 6,0 min a 9,0 min, 40%-98% A da 9,0 min a 9,01 min che si è tenuto per 1,9 min, e 98%-100% A da 11,0 min a 11,1 min che si è tenuto per 2,9 min.
- Impostare i parametri dello spettrometro di massa: modalità di ionizzazione, sorgente ionica positiva elettrospray (ESI+); pressione atomizzatore, 7,0 bar; tensione capillare, 4,0 kV; flusso di controsoffiaggio del foro di cono, 150 L/h; flusso gas solvente, 800 L/h; temperatura di dissolvenza, 400 °C; flusso di gas d'impatto, 0,25 ml/min.
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Representative Results
Il metodo di purificazione e analisi adsorbente ottimizzato di 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erbe infestanti e terreno è stato stabilito e confrontato con il metodo di purificazione comunemente usato utilizzando la cartuccia SPE. I risultati hanno mostrato che i recuperi dei 15 PA in campioni di tè essiccato, erba e foglie di tè fresco utilizzando la cartuccia SPE erano del 72% -120%, mentre quello che utilizzava la purificazione adsorbente era del 78% -98% (Figura 1). I recuperi dei 15 PA nel suolo utilizzando la purificazione adsorbente sono stati del 79%-111% (Figura 1). Quaranta (40) campioni reali sono stati raccolti in modo casuale per rilevare il contenuto di PA per confrontare i due metodi di pulizia (tabelle supplementari 1-7). L'eliotrina (He) è stata rilevata in tutti i 10 campioni di tè essiccato utilizzando il metodo adsorbente con un contenuto di 1,3-22 μg/kg, mentre è stata rilevata solo in tre campioni di tè essiccato utilizzando la cartuccia SPE con un contenuto di 1,8-24,6 μg/kg (tabelle supplementari 3-4).
Il metodo di purificazione adsorbente (GCB: PSA: C18) è stato selezionato per rilevare PA nelle erbe infestanti, nei terreni rizosferici delle erbe infestanti e nelle foglie di tè fresco nei sistemi di piantagioni di tè. Cinque siti di campionamento sono stati scelti in un giardino del tè a Jinzhai. Oltre alla jacobina (Jb), alla senecifillina (Sp), alla senecifillina N-ossida (SpNO) e alla senkirkine (Sk), un totale di 11 PA sono stati rilevati nell'erba A. conyzoides, di cui il più alto contenuto di PA era intermedio (Im) (2.006-2.970 μg / kg), eliotrina-N-ossido (HeNO) (2.446-2.731 μg / kg) e intermedio-N-ossido (ImNO) (13.535-17.345 μg / kg) (Tabella 1). Nel suolo, solo ImNO è stato rilevato nel sito di campionamento 5, con un contenuto di 6,05 μg/kg (tabella supplementare 8). ImNO e Sn sono stati rilevati nelle foglie di tè fresco dei cinque siti di campionamento (Figura 2). ImNO è stato rilevato in diverse parti delle piante di tè e il suo contenuto variava da 4,36-26,5 μg / kg, che era maggiore di quello di Sn, tranne che Sn non è stato rilevato nelle foglie mature dal sito di campionamento 1 e dal sito di campionamento 2. Sn è stato rilevato in diverse parti delle piante di tè negli altri siti di campionamento e il contenuto variava da 1,0 a 3,14 μg / kg (Figura 2).
Nel sito di campionamento 5, è stato mostrato il fenomeno di trasferimento delle PA tra le erbe infestanti, il terreno rizosferico delle erbe infestanti e le foglie di tè fresco (Figura 3). Tra le 11 PA infestanti, solo ImNO è stato rilevato nel terreno, con un contenuto di 6,05 μg / kg, mentre ImNO e Sn sono stati rilevati in diverse parti delle piante di tè. Il contenuto di ImNO in una gemma con due foglie era il più alto, che era di 12,6 μg / kg (Figura 3).
Figura 1: Confronto del recupero. Confronto dei recuperi di 15 PA (alcaloidi pirrolizidinici) in estratti da (A) foglie di tè fresco, (B) campioni di tè essiccato, (C) erba infestante e (D) campioni di terreno dopo la pulizia con l'adsorbente (livello di spiked = 0,02 mg / kg) e le cartucce SPE (colonne di estrazione in fase solida a scambio cationico misto, livello spiked = 0,01 mg / kg). Le barre di errore mostrano la deviazione standard e il test di significatività è stato eseguito mediante analisi della varianza. Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
Figura 2: Il contenuto e i tipi di PA (alcaloidi pirrolizidinici) nelle diverse parti delle piante di tè raccolte dai cinque siti di campionamento. (A) Sito di campionamento 1. B) Sito di campionamento 2. C) Sito di campionamento 3. D) Sito di campionamento 4. E) Sito di campionamento 5. Le barre di errore mostrano la deviazione standard e il test di significatività è stato eseguito mediante analisi della varianza. Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
Figura 3: PA contenute nelle erbe infestanti e loro trasferimento al suolo e foglie di tè fresco. (A) Il contenuto e il tipo di PA (alcaloidi pirrolizidinici) rilevati nelle erbe infestanti, nel suolo e nelle foglie di tè fresco. (B) Il contenuto e il tipo di PA rilevati nelle erbe infestanti. Le barre di errore mostrano la deviazione standard e il test di significatività è stato eseguito mediante analisi della varianza. Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
| Sito di campionamento | Il contenuto medio di singoli PA (± deviazioni standard relative), μg/kg | Il contenuto di PA totali (μg/kg) | |||||||||||||||||||||||||||
| Lui | HeNO | Im | ImNO | Jb | JbNO | Ri | Reno | Sn | SnNO | Sp | Sp NO |
UE | EuNO | Sk | |||||||||||||||
| 1 | 97.4 (2.43) | 2731.1 (2.04) | 2424.9 (1.84) | 13754 (0.56) | ND | 1.92 (1.54) | 21.2 (10.45) | 4.01 (5.72) | 58.4 (2.52) | 17.2 (9.03) | ND | ND | 224.0 (1.75) | 6.9 (2.02) | ND | 19341.03 | |||||||||||||
| 2 | 83.9 (1.21) | 2518.6 (0.81) | 2476.5 (1.15) | 13945 (0.30) | ND | 2.60 (2.52) | 28.8 (1.51) | 4.82 (3.66) | 63.7 (3.52) | 19.8 (10.2) | ND | ND | 248.6 (1.48) | 7.0 (1.58) | ND | 19399.32 | |||||||||||||
| 3 | 96.6 (1.67) | 2470.4 (1.08) | 2969.7 (1.02) | 16829 (0.36) | ND | 2.12 (1.08) | 20.9 (9.30) | 2.94 (1.08) | 51.0 (7.50) | 14.9 (8.25) | ND | ND | 252.1 (3.17) | 5.91 (0.35) | ND | 22715.57 | |||||||||||||
| 4 | 91.4 (1.98) | 2638.6 (2.75) | 2882.4 (1.98) | 17345 (0.76) | ND | 2.42 (10.59) | 15.4 (6.99) | 2.67 (10.59) | 51.6 (6.73) | 15.0 (0.92) | ND | ND | 281.3 (2.36) | 6.78 (2.15) | ND | 23332.57 | |||||||||||||
| 5 | 83.4 (3.79) | 2446.7 (6.0) | 2005.5 (3.79) | 13535 (1.96) | ND | 1.68 (4.94) | 15.2 (0.91) | 2.70 (4.94) | 49.4 (8.78) | 16.9 (10.7) | ND | ND | 215.2 (2.47) | 5.99 (3.76) | ND | 18377.67 | |||||||||||||
Tabella 1: Il contenuto di PA singoli e totali (alcaloidi pirrolizidinici) delle erbe infestanti nei cinque siti di campionamento. ND non rappresenta nessuno rilevato.
Tabella supplementare 1: Il contenuto di PA singoli e totali nelle foglie di tè fresche purificate con il metodo adsorbente. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella supplementare 2: Il contenuto di PA singoli e totali nelle foglie di tè fresco purificate da SPE. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella supplementare 3: Il contenuto di PA singoli e totali nel tè essiccato purificato con il metodo adsorbente. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella supplementare 4: Il contenuto di PA singoli e totali nel tè essiccato purificato con SPE. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella complementare 5: Il contenuto di PA singole e totali nelle erbe infestanti purificate con il metodo adsorbente. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella supplementare 6: Il contenuto di PA singoli e totali nelle erbe infestanti purificate con SPE. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella supplementare 7: Il contenuto di PA singoli e totali nei terreni purificati con il metodo adsorbente. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
Tabella supplementare 8: Contenuto di PA singoli e totali di suoli nei cinque siti di campionamento. ND non rappresenta nessuno rilevato. Clicca qui per scaricare questa tabella.
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Discussion
Il presente lavoro è stato progettato per sviluppare un metodo efficace e sensibile per esplorare le vie di contaminazione e le fonti di PA nei campioni di tè, nonché la distribuzione di PA in diverse parti delle piante di tè. Tuttavia, in questo studio, solo 15 PA sono stati separati con successo sulla colonna cromatografica, che è un numero molto piccolo rispetto al gran numero di alcaloidi nelle specie vegetali 3,4. Ciò non era solo correlato alle proprietà di imballaggio della colonna stessa, ma anche alla complessa matrice dei campioni di tè esaminati. Pertanto, sono ancora necessari ulteriori approfondimenti metodi di separazione e purificazione per rilevare le multi-PA.
Le cartucce SPE e i metodi adsorbenti sono stati applicati per rilevare multi-PA in una varietà di matrici campione, ma nella complessa matrice del tè, il metodo adsorbente non è stato riportato24. Pertanto, il metodo adsorbente con un rapporto di GCB:PSA:C18 (10 mg:20 mg:15 mg) è stato sviluppato in questo lavoro e i recuperi di 15 PA hanno soddisfatto i requisiti di rilevazione per i PA in diverse matrici di campioni. Al contrario, i recuperi di ImNO, Eu e Re sono stati in media rispettivamente del 119%, 120% e 115% nel tè essiccato dopo la pulizia con cartucce SPE, che hanno mostrato un significativo effetto matrice. Inoltre, rispetto alle cartucce SPE, il metodo adsorbente (GCB:PSA:C18) ha avuto un tempo di trattamento del campione più breve, un costo inferiore e recuperi migliori per l'analisi PA (Figura 1B). La definizione di metodi di rilevamento per 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erbe infestanti e terreno ha fornito un metodo di rilevamento efficace per esplorare la fonte di contaminazione dei PA nei campioni di tè. Inoltre, secondo le conoscenze attuali, un metodo di rilevamento multi-PA nel suolo è stato stabilito per la prima volta in questo studio.
È stata studiata la via di trasferimento delle PA nel sistema delle piantagioni di tè. I nostri studi indicano che A. conyzoides era una delle erbacce con il più alto contenuto totale di PA nel giardino del tè Jinzhai e cresceva accanto alle piante del tè. Pertanto, A. conyzoides, A. conyzoides terreno rizosferico e le diverse parti di foglie di tè fresco sono stati raccolti dai cinque siti di campionamento in un giardino del tè a Jinzhai per analizzare i 15 PA . La figura 3 mostra che, tra gli 11 PA prodotti in A. conyzoides, solo ImNO è stato rilevato nel terreno rizosferico di A. conyzoides, mentre ImNO e Sn sono stati rilevati nelle foglie di tè fresco . Ciò indica che non tutto il contenuto delle PA prodotte in A. conyzoides potrebbe essere trasportato nelle piante di tè attraverso il terreno di appartenenza. Alcuni contenuti delle PA trasferiti nel suolo possono essere degradati dai microrganismi del suolo.
ImNO e Sn erano distribuiti principalmente in una gemma con due foglie e una gemma con tre foglie, mentre il contenuto di PA nelle foglie mature era relativamente basso. Nel sito di campionamento 4, il contenuto di ImNO in una gemma con due foglie ha raggiunto 26,5 μg/kg, mentre quello in altre parti della pianta del tè variava da 7,14-10,4 μg/kg. Sn non è stato rilevato nelle foglie mature nel sito di campionamento 1 e nel sito di campionamento 2. Ciò indica che le parti arricchite delle PA nelle piante di tè erano concentrate principalmente nelle foglie giovani e il contenuto era molto al di sotto del limite massimo di residui di PA nei campioni di tè fissato dall'Unione europea (150 μg/kg per gli adulti, 75 μg/kg per i lattanti e i bambini nella prima infanzia)25. I risultati rivelano che i PA nei campioni di tè possono provenire da erbacce che producono PA nei giardini del tè attraverso il suolo. Inoltre, i risultati confermano il trasferimento e lo scambio di PA tra impianti17.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Scientific Foundation of China (32102244), dal National Agricultural Products Quality and Safety and Risk Assessment Project (GJFP2021001), dalla Natural Scientific Foundation of Anhui Province (19252002) e dall'USDA (HAW05020H).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile (99.9%) | Tedia Company,Inc. | 21115197 | CAS No:75-05-8 |
| Ammonia (25%-28%) | Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. | 181210 | CAS No:1336-21-6 |
| Ammonium formate (97.0%) | Anpel Laboratory Technoiogies (shanghai) | G0860050 | CAS No:540-69-2 |
| Carbon-GCB | CNW | B7760030 | 120-400 MESH, 10g. per box |
| Centrifuge Z 36 HK | HERMLE | Z36HK | 30000 rpm (min:10 rpm), Dimensions (W x H x D): 71.5 cm× 42 cm × 51 cm |
| Commercially available tea product | Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun | loose tea | Green tea |
| Europine N-oxid (EuNO) (98.0%) | BioCrick | 323256 | CAS No:65582-53-8 |
| Europine (Eu) (98.0%) | BioCrick | 98222 | CAS No:570-19-4 |
| Formate (98.0%) | Aladdin | E2022005 | CAS No:64-18-6 |
| HC-C18 | CNW | D2110060 | 40-63 μm,100g.per box |
| Heliotrine (He) (98.0%) | BioCrick | 906426 | CAS No:303-33-3 |
| Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0%) | BioCrick | 22581 | CAS No:6209-65-0 |
| High speed centrifuge TG16-WS | cence | 203158000 | Max:16000 r/min, 330 × 390 × 300 mm (L × W × H), Capacity: 6 × 50 mL |
| HSS T3 column | Waters | 186004976 | ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm 1.8 μm) |
| Intermedine (Im) (98.0%) | BioCrick | 114843 | CAS No:10285-06-0 |
| Intermedine-N-oxide (ImNO) (98.0%) | BioCrick | 340066 | CAS No:95462-14-9 |
| Jacobine (Jb) (98.0%) | BioCrick | 132282048 | CAS No:6870-67-3 |
| Jacobine-N-oxide (JbNO) (98.0%) | ChemFaces | CFN00461 | CAS No:38710-25-7 |
| Methyl Alcohol (99.9%) | Tedia Company,Inc. | 21115100 | CAS No:67-56-1 |
| PSA | Agela | P19-00833 | 40-60 μm, 60 Å 100g.per box |
| Retrorsine (Re) (98.0%) | BioCrick | 5281743 | CAS No:480-54-6 |
| Retrorsine-N-oxide (ReNO) (98.0%) | BioCrick | 5281734 | CAS No:15503-86-3 |
| Senecionine (Sc) (98.0%) | BioCrick | 5280906 | CAS No:130-01-8 |
| Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0%) | BioCrick | 5380876 | CAS No:13268-67-2 |
| Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0%) | BioCrick | 6442619 | CAS No:38710-26-8 |
| Seneciphylline (Sp) (98.0%) | BioCrick | 5281750 | CAS No:480-81-9 |
| Senkirkine (Sk) (98.0%) | BioCrick | 5281752 | CAS No:2318-18-5 |
| SPE PCX | Agilent Technologies | 12108206 | Cation Mixed Mode, 6 mL |
| Sulfuric acid (97%) | Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. | 1003019 | CAS No:7664-93-9 |
| Trisodium citrate | Sinpharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 20121009 | CAS No:6132-04-3 |
| Ultrasonic cleaner | Supmile | KQ-600B | Inner slot size: 500 × 300 × 150 mm; Capacity: 22.5 L |
| UPLC-xevoTQMS | Waters | ZPLYY-003 | Triple four-stage rod mass analyzer, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Liquid Phase System |
| Water bath thermostat oscillator | Guoyu instrument | SHY-2AHS | Oscillation times: 60-300 times/min, Constant temperature range: room temperature to 100 °C |
References
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