يهدف هذا العمل إلى تقييم ومراجعة إجراء الفحص الحيوي للفتك بالأرتيميا ، والذي تم تحديده أيضا على أنه اختبار فتك الجمبري الملحي. توفر هذه الطريقة البسيطة والرخيصة معلومات حول السمية العامة (التي تعتبر تقييما أوليا للسمية) للعينات ، أي المنتجات الطبيعية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
المقايسة الحيوية الفتاكة باستخدام الأرتيميا سالينا L.
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تم استخدام المنتجات الطبيعية منذ العصور القديمة لإنتاج الأدوية. في الوقت الحاضر ، هناك الكثير من أدوية العلاج الكيميائي التي يتم الحصول عليها من مصادر طبيعية وتستخدم ضد عدد كبير من الأمراض. لسوء الحظ ، غالبا ما تظهر معظم هذه المركبات سمية جهازية وتأثيرات ضارة. من أجل تقييم أفضل لتحمل عينات مختارة يحتمل أن تكون نشطة بيولوجيا ، يستخدم الجمبري الملحي (Artemia salina) بشكل عام كنموذج في دراسات الفتك. يعتمد اختبار A. salina على قدرة المركبات النشطة بيولوجيا المدروسة على قتل القشريات الدقيقة في مرحلة اليرقات (nauplii). تمثل هذه الطريقة نقطة انطلاق ملائمة لدراسات السمية الخلوية ، وكذلك لفحص السمية العامة للمنتجات الاصطناعية وشبه الاصطناعية والطبيعية. يمكن اعتباره مقايسة بسيطة وسريعة ومنخفضة التكلفة ، مقارنة بالعديد من المقايسات الأخرى (الخلايا المختبرية أو سلالات الخميرة ، الزرد ، القوارض) مناسبة بشكل عام للأغراض المذكورة أعلاه ؛ علاوة على ذلك ، يمكن إجراؤه بسهولة حتى بدون أي تدريب محدد. بشكل عام ، تمثل مقايسة A. salina أداة مفيدة لتقييم السمية الأولية للمركبات المختارة والتجزئة الموجهة بيولوجيا لمستخلصات المنتجات الطبيعية.
المقدمة
كانت المنتجات الطبيعية من النباتات أو الحيوانات أو الكائنات الحية الدقيقة مجال اهتمام متزايد على مر السنين في تطوير جزيئات نشطة بيولوجيا جديدة بسبب مجموعتها المتنوعة من الأنشطة البيولوجية والدوائية1. ومع ذلك ، فإن الآثار الجانبية المرتبطة ، أو مقاومة الأدوية ، أو عدم كفاية خصوصية العوامل ، خاصة عند استخدامها كأدوية مضادة للسرطان ، تمثل العوامل الرئيسية التي يمكن أن تؤدي إلى علاج غير فعال 1,2.
على مدى العقود القليلة الماضية ، تم اكتشاف العديد من العوامل السامة للخلايا المشتقة من النباتات ، بعضها يستخدم كعوامل مضادة للسرطان1،<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد المعدات
- الحصول على معدات الفقس المتاحة تجاريا. حدد مكانا مناسبا لإعداد معدات الفقس (الشكل 2 أ). ضع الحاوية على شكل قمع في الدعامة السوداء (المضمنة في المجموعة) وأدر القمع في اتجاه مناسب لرؤية علامة المستوى والصنبور.
- لصنع معدات ترحيل يدوية الصنع ، قم بقص الجزء العلوي من زجاجتين بلاستيكيتين سعة 0.5 لتر (قطرها 5.8 سم) للحصول على ارتفاع نهائي يبلغ 12 سم. قم بإنشاء ثقب بقطر 1.5 سم على جانب واحد عند 7 سم من الأسفل في كل زجاجة وأدخل أنبوبا مطاطيا 13 سم (1.3 سم خارجي وقطر داخلي 0.9 سم) بين الفتحتين. أغلق الفتحات بالغراء الساخن (الشكل 2 ب) واتركها لتجف لمدة 15 دقيقة ؛ ضع ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم تقييم السمية العامة لبعض المنتجات الطبيعية التي درستها مجموعتنا مؤخرا من خلال الفحص الحيوي لفتك الجمبري الملحي. أربعة مقتطفات (Pa- P. ambigerus; Pb- P. بارباتوس ؛ Pc- P. أسطواني. و Pe- P. ecklonii) من جنس Plectranthus ، المعروف بنشاطه المضاد للأكسدة (نتائج غير منشورة). بالإضافة إلى ذلك ، تم الحصول على مركبين طبيعيين (1 و 2) من Plectranthus spp. ، وثلاثة مشتقات شبه اصطناعية (3 ، 4 ، 5 ؛ 3 ، 4 ، 5 ؛ 3 ، 4 ، 5 ، 3 ، 5 ، 3 ، 5 ، 3 ، 4 ، 5 ، 3 ، 3 ، 5 ، 3 ، 3 ، 5 ، 3 ، .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
خلال السنوات الأخيرة ، زاد المجتمع العلمي من اهتمامه بالنماذج البديلة لفحوصات السمية21. بجانب الفحص الحيوي لفتك A. salina ، عادة ما يتم إجراء منهجيات أخرى لتقييم تحمل العينات وتشمل المقايسات الحيوية للفقاريات (مثل القوارض) ، واللافقاريات (مثل الزرد) ، والطرق المختبرية باستخدام سلالات أو خلايا الخميرة ، وفي طرق السيليكو 22،23،24،25 . كل هذه الطر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح ، مالي أو غير ذلك.
شكر وتقدير
في ذكرى البروفيسور أميلكار روبرتو.
تم دعم هذا العمل ماليا من قبل Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT ، البرتغال) في إطار المشروعين UIDB / 04567/2020 و UIDP / 04567/2020 المنسوبين إلى CBIOS ومنحة الدكتوراه SFRH / BD / 137671/2018 (Vera Isca).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 24 بئر لوحات | Thermo Fisher Scientific ، الدنمارك | 174899 | Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 |
| رقائق الألومنيوم | Albal | - | يمكن شراؤها في سوبر ماركت |
| Artemio Set | JBL GmbH and Co. KG ، D-67141 ، Neuhofen Germany | 61066000 | يمكن شراؤها في متاجر الأليفة |
| مجهر مجهر | Ceti ، بلجيكا | ؛ 1700.0000 | زجاجات فليكسوم-24 درهم ، 220-240 فولت ، 50 هرتز |
| - | 0.5 لتر القطر: 5.8 سم ؛ الارتفاع: 12 سم | ||
| أكياس الجمبري المالح | JBL GmbH and Co. KG ، D-67141 ، Neuhofen Germany | 3090700 | يمكن شراؤها من محلات الأليفة |
| الجمبري الملحي | JBL GmbH and Co. KG ، D-67141 ، Neuhofen Germany | 3090600 | يمكن شراؤها من محلات الأليفة |
| ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | كيماويات VWR | CAS: 67-68-5 | ؛ 99٪ نقاء |
| نصائح قابلة للتفكيك | F171500 الماس | نطاق الحجم: 100 - 1000 & micro ؛ L | |
| Eppendorf microtubes | العلامة التجارية | 7،80،546 | Microtubes ، PP ، 2 مل لتر ، BIO-CERT ؛ PCR QUALITY |
| قارورة Erlenmeyer | VWR للكيماويات | 4،47،109 | الحجم: 100 مل |
| دورق زجاجي | Normax | 3.2111654N | الحجم: 1000 مل |
| قفازات | Guantes Luna | GLSP3-GraphPad | |
| Prism GraphPad Software ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة | الأمريكية-GraphPad | Prism الإصدار 5.00 لنظام التشغيل Windows ، www.graphpad.com ، تم الوصول إليه في 5 فبراير 2021 ؛ إحصائية تجارية برنامج التحليل | |
| محلي الصنع A. salina Grower | ؛ - | ؛ - | منزلي الصنع: زجاجتان بلاستيكيتان متصلتان بخرطوم |
| PHP500E3 | الغراء الساخن | Parkside | 230 فولت ، 50 هرتز ، 25 واط |
| حاضنة | هايدولف إنسترومنتسز ، الدنمارك ؛ | - | واحد Heidolph Unimax 1010 المعدات وواحد Heidolph Inkubator 1006 |
| Light | Roblan | SKYC3008FE14 | LED ضوء |
| لمبة كهربائية Micropipettes | VWR الكيميائية | 613-5265 | نطاق الحجم: 100 - 1000 & micro ؛ ل |
| ثنائي كرومات البوتاسيوم (K2Cr2O7) | المواد الكيميائية VWR | CAS: 7778-50-9 | 99٪ |
| نقاء مضخة ProAir a50 | JBL GmbH and Co. KG ، D-67141 ، Neuhofen Germany | ؛ - | مضمنة في مجموعة Artemio + 1 مجموعة |
| أنبوب مطاطي | - | 1.3 سم خارجي و 0.9 سم قطر داخلي | |
| قضيب التحريك | VWR الكيميائية | 441-0147 |  6 مم ، 250 مم |
| تيمومتر | VWR المواد الكيميائية | 620-0821 | 0 - 100 درجة ؛ ج |
المراجع
- Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
- Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
