Summary
Xenopus tropicalis is een ideaal model voor regeneratief onderzoek, omdat veel van zijn organen een opmerkelijk regeneratief vermogen bezitten. Hier presenteren we een methode voor het construeren van een hartletselmodel in X. tropicalis via apexsectie.
Abstract
Het is bekend dat bij volwassen zoogdieren het hart zijn regeneratieve capaciteit heeft verloren, waardoor hartfalen wereldwijd een van de belangrijkste doodsoorzaken is. Eerder onderzoek heeft het regeneratieve vermogen aangetoond van het hart van de volwassen Xenopus tropicalis, een anuran amfibie met een diploïde genoom en een nauwe evolutionaire relatie met zoogdieren. Bovendien hebben studies aangetoond dat na ventriculaire apex-resectie het hart kan regenereren zonder littekens in X. tropicalis. Bijgevolg suggereren deze eerdere resultaten dat X. tropicalis een geschikt alternatief gewerveld model is voor de studie van volwassen hartregeneratie. Een chirurgisch model van hartregeneratie bij de volwassen X. tropicalis wordt hierin gepresenteerd. Kortom, de kikkers werden verdoofd en gefixeerd; Vervolgens werd een kleine incisie gemaakt met een iridectomieschaar, die de huid en het hartzakje binnendrong. Er werd zachte druk uitgeoefend op de ventrikel en de top van de ventrikel werd vervolgens met een schaar uitgesneden. Hartletsel en regeneratie werden bevestigd door histologie 7-30 dagen na resectie (dpr). Dit protocol stelde een apicale resectiemodel vast bij volwassen X. tropicalis, dat kan worden gebruikt om de mechanismen van volwassen hartregeneratie op te helderen.
Introduction
Hartfalen is de afgelopen jaren wereldwijd een belangrijke doodsoorzaak geweest. Sinds 2000 neemt het aantal sterfgevallen als gevolg van hartfalen in de loop van de tijd toe. Meer dan 9 miljoen mensen stierven in 2019 aan cardiomyopathie, wat goed was voor 16% van het totale aantal sterfgevallen wereldwijd1. Vanwege het verlies van de regeneratieve capaciteit van het hart bij volwassen zoogdieren, zijn er in sommige gevallen niet genoeg cardiomyocyten om de contractiefuncties in het hart te behouden, wat de hartfunctie beïnvloedt en bijdraagt aan abnormale ventriculaire remodellering en hartfalen 2,3,4. Inderdaad, bij zoogdieren heeft het hart de slechtste regeneratieve capaciteit in vergelijking met de andere organen, zoals de lever, longen, darmen, blaas, bot en huid. Naarmate de vergrijzing van de wereldbevolking een wereldwijde megatrend wordt, zullen de uitdagingen waarmee we worden geconfronteerd met hartaandoeningen toenemen5.
Het ophelderen van de mechanismen van hartregeneratie kan belangrijke implicaties hebben voor therapieën voor ischemische hartziekten. Rapporten hebben aangetoond dat de harten van neonatale muizen een regeneratief vermogen hebben na topresectie6. Niettemin gaat dit regeneratieve vermogen verloren na 7 dagen van de leeftijd van7. Studies hebben aangetoond dat volwassen zoogdierharten niet in staat zijn om te regenereren omdat hun capaciteit voor cardiomyocytenproliferatie is afgenomen 8,9. De harten van lagere gewervelde dieren bezitten echter een krachtig regeneratief vermogen na een verwonding. Zebravissen 10, X. tropicalis11, Xenopus laevis12, salamander 13 en axolotl14 zijn bijvoorbeeld in staat tot volledige regeneratie na topresectie. Bovendien kunnen de andere delen van de lichamen van sommige lagere gewervelde dieren ook volledige regeneratie ondergaan, zoals de ledematen van salamanders en de staarten, lenzen en armen van tropische klauwkikkers 4,15,16.
Het opstellen van hartletselmodellen is de eerste stap naar het ophelderen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan hartregeneratie en heeft grote betekenis in regeneratief onderzoek. Onderzoekers hebben verschillende methoden ontwikkeld om modellen voor hartletsel te bouwen, waaronder steken, contuseren, genetische ablatie, cryoletsel en infarct 5,6.
Cryoletsel, myocardinfarct (MI) en apexresectie worden veel gebruikt voor het induceren van hartletsel en het type letsel kan aanzienlijke effecten hebben op de volgende regeneratie van cardiomyocyten6. Afhankelijk van de chirurgische techniek kan de reactie van het hart op regeneratie variëren. Cryoinjury veroorzaakt massale celdood en produceert fibrotische littekens in de harten van zebravissen17, waardoor een model ontstaat dat lijkt op een zoogdierinfarct. Apicale resectie wordt uitgevoerd door een deel van de ventriculaire weefsels weg te snijden, wat is gedaan bij zebravissen10 en X. tropicalis11, zonder permanente littekens te veroorzaken. Deze studie voerde apicale resectie uit, wat een eenvoudigere operatie is en minder chirurgische instrumenten vereist dan cryoletsel. Met behulp van lineage-tracing-analyse toonde een eerdere studie aan dat hartregeneratie gerelateerd is aan de proliferatie van cardiomyocyten die al bestaan in de harten van de muis6 en zebravis18, maar er bestaan geen rapporten voor amfibieën. Vandaar dat het model van topresectie in X. tropicalis een belangrijke rol speelt bij het ophelderen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan regeneratieve reacties.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle experimentele protocollen met betrekking tot X. tropicalis werden goedgekeurd door de Jinan University Animal Care Committee.
1. Operatie
- Preoperatieve voorbereiding: Houd een oogheelkundige schaar, oogheelkundige tang, naaldtang, absorberende ballen, filterpapier en chirurgische hechtingen / naalden klaar voor topresectie in de harten van X. tropicalis. Raadpleeg de materiaaltabel voor gedetailleerde informatie. Steriliseer voor gebruik alle chirurgische instrumenten door autoclaveren en bereid een voldoende hoeveelheid ijs voor toekomstig gebruik.
- Verdoof een volwassen X. tropicalis met tricaïne door het gedurende 4 min19 in 500 ml tricaïne-oplossing (1 mg / ml) bij kamertemperatuur te plaatsen en vervolgens op een oppervlak van ijs op de operatietafel te leggen om ervoor te zorgen dat de kikker niet wakker wordt tijdens het operatieproces.
LET OP: De hele procedure vereist 5-10 minuten; de tijd van anesthesie mag niet te lang zijn, anders kan de X. tropicalis mogelijk niet wakker worden na de operatie. - Thoracotomie
- Plaats de verdoofde X. tropicalis-buik omhoog en bedek de buik van de kikker met gaas dat is voorgedrenkt in gedestilleerd water om het uitdrogen van de huid van het dier tijdens de operatie te voorkomen.
- Druk zachtjes op de borst met een tang, zoek het midden van de borst parallel aan de onderste voorpoot, til de huid op met een oogheelkundige schaar en maak voorzichtig een kleine incisie van ~ 1 cm. Gebruik een oogheelkundige schaar om de spierlaag onder de huid op te pakken en maak een wond in de centrale borstspier. Omdat het hart zich in de bovenste positie van de wondplaats bevindt, drukt u zachtjes op de borst met de oogheelkundige tang om het hart uit de wond te persen.
LET OP: Aangezien de huid van X. tropicalis antimicrobiële peptiden kan produceren, is het niet nodig om conventionele desinfectieprocedures toe te passen op de chirurgische plaats van de X. tropicalis. Elk ontsmettingsmiddel beschadigt de huid van de X. tropicalis.
- Ventriculaire apex resectie
- Klem het hartzakje voorzichtig vast met een tang en breek het voorzichtig met een oogheelkundige schaar in de buurt van de top van het hart. Wacht tot het hartzakje loskomt als gevolg van systolisch bloedpompen (figuur 1A, B).
- Houd de punt van het hart met een tang in de niet-dominante hand en til het hart iets op volgens het hartcontractieritme. Wanneer het hart samentrekt om bloed door de bloedvaten te recirculeren, snijdt u snel de top van het hart af (~ 14% van de ventrikel) (figuur 1C).
- Om ervoor te zorgen dat de hoeveelheid apex-resectie ongeveer 14% van het hele hart is, analyseert u het hartgewicht (HW) en het oppervlak met of zonder resectie20. Plaats het hart in de borst met behulp van een tang en een absorberende bal.
OPMERKING: Druk niet direct met de tang op het hart; anders worden andere delen van het hart doorboord.
- Hecht de huid met een 4-0 niet-absorberende niet-zijden chirurgische draadhechting (figuur 1D). Wees voorzichtig om te voorkomen dat u zich hecht aan de spierlaag om postoperatieve sterfte te voorkomen. Wacht tot de huidwond binnen 1 week na de operatie op natuurlijke wijze is genezen.
- Voer in de schijnoperatiegroep de thoracotomie uit, open het hartzakje en hechtdraad, zonder de apex-resectie uit te voeren.
2. Chirurgisch herstel
- Plaats de postoperatieve X. tropicalis met zijn buik naar boven gericht in een petrischaal met een kleine hoeveelheid gedeïoniseerd water (overspoel het dier niet volledig). Wacht tot de X. tropicalis binnen ~10 min wakker wordt.
- Bij het herwinnen van het bewustzijn, observeer de mobiliteit en activiteit van het dier, evenals de wondhechting tijdens activiteit. Breng de kikkers die hun evenwicht hebben herwonnen over naar een container gevuld met zuiver water voor de teelt. Vervang het water elke dag door zuiver water om wondinfectie te voorkomen.
OPMERKING: Met deze maatregelen zou de overlevingskans ~ 90% kunnen bereiken. Een langdurige tijd van anesthesie en overmatig bloeden tijdens de operatie leiden beide tot de dood, die meestal optreedt op de dag van de operatie.
3. Detectie van de herstelconditie na hartletsel
- Verzamel de harten van X. tropicalis op meerdere tijdstippen na de operatie.
- Na het verdoven van de X. tropicalis met tricaïne, opent u de buik en gebruikt u een tang om de andere inwendige organen en weefsels te verwijderen om de locatie van het hart te vinden.
OPMERKING: Vanwege de apex-resectie zal het hart zich waarschijnlijk samen met andere weefsels en organen ontwikkelen tijdens het reparatieproces. Soms kleeft het aan de spierwand en is het niet gemakkelijk te scheiden, dus het moet voorzichtig worden behandeld tijdens het verzamelen. - Nadat je het hart hebt gevonden, gebruik je een tang om de andere organen voorzichtig uit het hart te scheuren. Pel voorzichtig de andere weefsels rond het hart weg om het hart bloot te leggen. Gebruik een tang om het hart voorzichtig op te tillen en knip het uit met een schaar. Plaats het hart onmiddellijk in PBS om het resterende bloed te verwijderen en fotografeer het met een stereoscoop voor documentatie (figuur 2).
- Na het verdoven van de X. tropicalis met tricaïne, opent u de buik en gebruikt u een tang om de andere inwendige organen en weefsels te verwijderen om de locatie van het hart te vinden.
- Gradiënt uitdroging
- Dep de harten met filtreerpapier om de overtollige PBS-resten te drogen en plaats ze in een celkweekschaal met 24 putten. Gebruik 1-2 ml 4% paraformaldehyde om de hartweefsels 's nachts te fixeren. Voer de volgende dag ethanoluitdroging uit. Gebruik eerst 70% ethanol 's nachts, gevolgd door 80% ethanol, 90% ethanol en 100% ethanol voor gradiëntuitdroging (elke keer 1 uur). Herhaal het gebruik van 100% ethanol drie keer.
- Paraffine inbedding
- Behandel het uitgedroogde hartweefsel met xyleen gedurende 6-8 minuten. Plaats het met xyleen behandelde weefsel gedurende 2-3 uur in een glazen container gevuld met paraffine bij 65 °C.
OPMERKING: Het is essentieel om luchtbellen te vermijden, omdat deze de sectie beïnvloeden tijdens het inbeddingsproces.
- Behandel het uitgedroogde hartweefsel met xyleen gedurende 6-8 minuten. Plaats het met xyleen behandelde weefsel gedurende 2-3 uur in een glazen container gevuld met paraffine bij 65 °C.
- Vries het ingebedde weefsel gedurende 1 uur in bij −20 °C en snijd het.
- Na het snijden van het hart, voer standaard hematoxyline en eosine (H &E) en Masson's trichrome kleuringstechnieken uit op de secties11.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De hartjes werden verzameld bij 0 dpr, 7 dpr, 14 dpr en 30 dpr. Uit de morfologische analyse bleek dat het door het hartletsel veroorzaakte bloedstolsel verdween bij 30 dpr (figuur 2). Tegelijkertijd was het uiterlijk van de harten bij 30 dpr in de resectiegroep vergelijkbaar met dat van de harten in de schijnoperatiegroep; er waren geen duidelijke wonden (figuur 2). Na apicale resectie vormde zich een bloedstolsel en sloot de wond in de ventrikel, zoals waargenomen door H &E (figuur 3) en masson's trichrome kleuring (figuur 4). Binnen 14 dpr verdween het stolsel geleidelijk en werd vervangen door fibrine (figuur 4). Van 14 dpr tot 30 dpr verving het myocardium stapsgewijs het fibrine en herstelde het beschadigde ventrikeltop (figuur 4). De histologische analyse toonde geen verschil tussen de schijn- en gereseceerde harten bij 30 dpr (figuur 3 en figuur 4). Deze morfologische en histologische analyse onthulde dat volwassen X. tropicalis de gewonde ventriculaire apex met 30 dpr kon herstellen en regenereren.
Figuur 1: Chirurgische ingreep . (A) Representatief beeld van een blootgesteld hart bedekt door het hartzakje. (B) Representatief beeld van een hart in de systolische fase, waarin het hartzakje werd afgepeld; De stippellijn geeft de plaats van de apicale resectie van het hart aan. (C) Representatief beeld van de topresectie van het hart. (D) Representatief beeld van de hechting van de huid na de operatie. Schaalstaven = 1 mm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Morfologische analyse van X. tropicalis-harten van 0 dpr tot 30 dpr. (A) Representatieve beelden van harten uit de schijn- (links) en apicale resectiegroepen (rechts) bij 0 dpr, waarbij de top van het hart significant afwezig is in de resectiegroep. (B,C) Representatieve beelden van harten uit de schijn (links) versus resectiegroepen (rechts) bij 7-14 dpr, met veel bloedstolsels in de harten van de resectiegroep bij 7 dpr. Bij 14 dpr wordt significante regeneratie gezien op de apicale resectieplaats, maar de randen van de top van het hart zijn niet gelijkmatig. (D) Representatief beeld van harten uit de schijn (links) versus resectiegroepen (rechts) bij 30 dpr; De top van het gereseceerde hart is bijna volledig geregenereerd. Schaalstaven = 1 mm. Afkorting: dpr = days post resection. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Histologische analyse van Xenopus tropicalis harten van 0 dpr tot 30 dpr. Representatieve beelden van H&E-kleuring met behulp van harten uit de schijn- en resectiegroepen bij 0 dpr tot 30 dpr. (A) Representatief beeld van H&E-kleuring met behulp van harten uit de schijngroep, met stippellijnen die de geschatte amputatievlakken aangeven. (B) Representatief beeld van H&E-kleuring met behulp van harten uit de resectiegroep bij 0 dpr. (C-E) Representatieve beelden van H&E-kleuring met behulp van harten uit de resectiegroep bij 7-30 dpr, met grote hoeveelheden rode bloedcellen opgehoopt in de wond bij 7 dpr (pijlen). Op de resectieplaats is een massa fibrine verschenen bij 14 dpr (pijlpunten). De harten zijn volledig geregenereerd zonder littekens bij 30 dpr. Schaalbalk = 500 μm. Afkorting: dpr = days post resection. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Myocardiale fibrose analyse van X. tropicalis harten van 0 dpr tot 30 dpr. Representatieve beelden van Masson's kleuring van harten uit de schijn- en resectiegroepen bij 0 dpr tot 30 dpr. (A) Representatief beeld van Masson's kleuring van harten uit de schijngroep, met stippellijnen die de geschatte amputatievlakken aangeven. (B) Representatief beeld van Masson's kleuring van harten uit de resectiegroep bij 0 dpr. (C-E) Representatieve beelden van Masson's kleuring van harten uit de resectiegroep bij 7-30 dpr, met grote hoeveelheden rode bloedcellen opgehoopt in de wond bij 7 dpr (pijlen). Op de resectieplaats is een massa fibrine verschenen bij 14 dpr (pijlpunten). De harten zijn volledig geregenereerd zonder littekens bij 30 dpr. Schaalbalk = 500 μm. Afkorting: dpr = days post resection. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Apicale resectie, waarbij de chirurgische amputatie van de top van het hart plaatsvindt, is beschreven bij zebravissen en muizen 6,18; dit is echter niet beschreven in X. tropicalis. Dit rapport beschrijft een geloofwaardig model van hartletsel en toont aan dat het hart van volwassen X. tropicalis volledig kan regenereren na apicale resectie zonder littekens. Sommige tekortkomingen moeten echter worden verbeterd en bepaalde details moeten worden opgemerkt.
Hoewel apicale resectie een hartletselmodel kan vaststellen, is het een uitdaging om dezelfde mate van excisie van het hart te garanderen vanwege de diversiteit van de kikkers, die verschillende hartgroottes hebben. Om ervoor te zorgen dat harten met toppen van dezelfde grootte worden gereseceerd, is het noodzakelijk om kikkers van dezelfde grootte te selecteren en moet de operator voorafgaand aan het experiment uitgebreid oefenen.
Ten tweede is het vermogen om het hart nauwkeurig en snel te lokaliseren en bloot te stellen van cruciaal belang voor het succes van de procedure, omdat het proces van het vinden van het hart kan resulteren in de punctie van de aangrenzende bloedvaten en bloedingen kan veroorzaken, waardoor de voortgang van de procedure wordt belemmerd of zelfs falen wordt veroorzaakt. De duur van de anesthesie mag niet te kort of te lang zijn. Als het te kort is, kan de kikker wakker worden voordat de operatie is voltooid, en als dit proces te lang duurt, zal dit waarschijnlijk leiden tot de dood van de kikker. Zoals vermeld in protocolsecties 2-5, moet het hechten voorzichtig worden gedaan. Om ervoor te zorgen dat de verhouding van de hoeveelheid apex-resectie ten opzichte van het hele hart ongeveer hetzelfde is bij kikkers, worden het hartgewicht (HW) en het oppervlak met of zonder resectie geanalyseerd20 en wordt een klein deel van de harttop gereseceerd om kamerblootstelling6 te garanderen.
Cryoinjury, MI en apicale resectie zijn de drie meest gebruikte methoden om hartletsel bij zebravissen en muizen te induceren 6,18,21. De beperking van dit artikel is dat alleen de derde methode werd gebruikt, wat betekent dat dit werk geen informatie geeft over de verschillende regeneratieve reacties na letsel met de andere twee methoden6. Cryoinjury resulteert in de dood van een groot aantal cellen in ~ 20% van de ventriculaire wand, vergelijkbaar met zoogdierinfarcten21. MI, dat ook wel coronaire occlusie wordt genoemd, heeft hogere overlevingskansen in X. tropicalis in vergelijking met apicale resectie bij muizen6, maar is moeilijker te bereiken in X. tropicalis omdat de harten van tropische klauwkikkers kleiner zijn dan die van muizen. De X. tropicalis apicale resectiemethode die in deze studie is vastgesteld, is eenvoudiger uit te voeren en heeft een hoge postoperatieve overlevingskans.
De apicale resectie die in dit rapport wordt ontwikkeld, zal een belangrijke methode zijn voor het onderzoeken van de moleculaire mechanismen van regeneratie in de harten van X. tropicalis. Een eerdere studie toonde ook aan dat Fosl1 onmisbaar is voor hartregeneratie in X. tropicalis na apicale resectie20. Dit model van apicale resectie hartletsel in X. tropicalis kan worden gebruikt om meer te leren over de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan hartregeneratie om de studie van de genen en moleculaire mechanismen gerelateerd aan menselijke hartregeneratie te bevorderen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door subsidies van het National Key R&D Program of China (2016YFE0204700), de National Natural Science Foundation of China (82070257, 81770240) en de Research Grant of Key Laboratory of Regenerative Medicine, Ministerie van Onderwijs, Jinan University (ZSYXM202004 en ZSYXM202104), China.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | GHTECH | 64-19-7-500ml | |
| Acid Alcohol Fast Differentiation Solution | Beyotime | C0163M | |
| Acid Fuchsin | aladdin | A104916 | |
| Alcohol Soluble Eosin Y Stainin Solution | Servicebio | G1001-500ML | |
| BioReagent | Beyotime | ST2600-100g | |
| Ethanol absolute | Guangzhou Chemical Reagent Factory | HB15-GR-0.5L | |
| Hematoxylin Stain Solution | Servicebio | G1004-500ML | |
| Neutral balsam | Solarbio | G8590 | |
| Operating Scissors | Prosperich | HC-JZ-YK-Z-10cm | |
| Paraffins | Leica | 39601095 | |
| Para-formaldehyde Fixative | Servicebio | G1101-500ML | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) powder | Servicebio | G0002-2L | |
| Phosphomolybdic acid hydrate | Macklin | P815551 | |
| Stereo microscope | Leica | ||
| surgical forceps | ChangZhou | zfq-11-btjw | |
| Surgical Suture | HUAYON | 18-5140 | |
| Tricaine | Macklin | ||
| Xylene | Guangzhou Chemical Reagent Factory | IC02-AR-0.5L |
References
- Thiara, B.
- van Amerongen, M. J., Engel, F. B. Features of cardiomyocyte proliferation and its potential for cardiac regeneration. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 12 (6), 2233-2244 (2008).
- Burke, A. P., Virmani, R.
- Sessions, S. K., Bryant, S. V. Evidence that regenerative ability is an intrinsic property of limb cells in Xenopus. Journal of Experimental Zoology. 247 (1), 39-44 (1988).
- Laflamme, M. A.
- Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice. Nature Protocols. 9 (2), 305-311 (2014).
- Tzahor, E., Poss, K. D. Cardiac regeneration strategies: Staying young at heart. Science. 356 (6342), 1035-1039 (2017).
- Porrello, E. R., et al. Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart. Science. 331 (6020), 1078-1080 (2011).
- Porrello, E. R., et al. Regulation of neonatal and adult mammalian heart regeneration by the miR-15 family. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (1), 187-192 (2013).
- Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T.
- Liao, S., et al. Heart regeneration in adult Xenopus tropicalis after apical resection. Cell & Bioscience. 7, 70 (2017).
- Marshall, L. N., et al. Stage-dependent cardiac regeneration in Xenopus is regulated by thyroid hormone availability. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (9), 3614-3623 (2019).
- Witman, N., Murtuza, B., Davis, B., Arner, A., Morrison, J. I. Recapitulation of developmental cardiogenesis governs the morphological and functional regeneration of adult newt hearts following injury. Developmental Biology. 354 (1), 67-76 (2011).
- Cano-Martinez, A., et al. Functional and structural regeneration in the axolotl heart (Ambystoma mexicanum) after partial ventricular amputation. Archivos de Cardiología de México. 80 (2), 79-86 (2010).
- Kragl, M., et al. Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration. Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).
- Oberpriller, J. O., Oberpriller, J. C. Response of the adult newt ventricle to injury. Journal of Experimental Zoology. 187 (2), 249-253 (1974).
- Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish. Development. 138 (9), 1663-1674 (2011).
- Ellman, D. G., et al. Apex resection in zebrafish (Danio rerio) as a model of heart regeneration: A video-assisted guide. International Journal of Molecular Sciences. 22 (11), 5865 (2021).
- Lee-Liu, D., et al. Genome-wide expression profile of the response to spinal cord injury in Xenopus laevis reveals extensive differences between regenerative and non-regenerative stages. Neural Development. 9, 12 (2014).
- Wu, H. Y., et al. Fosl1 is vital to heart regeneration upon apex resection in adult Xenopus tropicalis. npj Regenerative Medicine. 6 (1), 36 (2021).
- Chablais, F., Jazwinska, A. Induction of myocardial infarction in adult zebrafish using cryoinjury. Journal of Visualized Experiments. (62), e3666 (2012).
