Summary
Xenopus tropicalis, organlarının çoğu dikkate değer bir rejeneratif kapasiteye sahip olduğu için rejeneratif araştırmalar için ideal bir modeldir. Burada, X. tropicalis'te apeks rezeksiyonu yoluyla bir kalp hasarı modeli oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz.
Abstract
Yetişkin memelilerde, kalbin rejeneratif kapasitesini kaybettiği ve kalp yetmezliğini dünya çapında önde gelen ölüm nedenlerinden biri haline getirdiği bilinmektedir. Önceki araştırmalar, diploid genoma sahip bir anuran amfibi olan yetişkin Xenopus tropicalis'in kalbinin rejeneratif yeteneğini ve memelilerle yakın bir evrimsel ilişkiyi göstermiştir. Ek olarak, çalışmalar ventriküler apeks rezeksiyonunu takiben, X. tropicalis'te kalbin skar olmadan yenilenebileceğini göstermiştir. Sonuç olarak, bu önceki sonuçlar X. tropicalis'in yetişkin kalp rejenerasyonu çalışması için uygun bir alternatif omurgalı modeli olduğunu göstermektedir. Burada erişkin X. tropicalis'te kardiyak rejenerasyonun cerrahi bir modeli sunulmaktadır. Kısaca, kurbağalar uyuşturuldu ve sabitlendi; Daha sonra iridektomi makası ile cilde ve perikarda nüfuz eden küçük bir kesi yapıldı. Ventriküle hafif basınç uygulandı ve ventrikülün tepesi makasla kesildi. Kardiyak hasar ve rejenerasyon rezeksiyon (dpr) sonrası 7-30 gün sonra histoloji ile doğrulandı. Bu protokol , yetişkin X. tropicalis'te yetişkin kalp rejenerasyonunun mekanizmalarını aydınlatmak için kullanılabilecek apikal bir rezeksiyon modeli oluşturmuştur.
Introduction
Kalp yetmezliği son yıllarda dünya çapında mortalitenin önde gelen nedenlerinden biri olmuştur. 2000 yılından bu yana, kalp yetmezliğine bağlı ölümlerin sayısı zamanla artmaktadır. 2019 yılında 9 milyondan fazla insan kardiyomiyopatiden öldü ve bu da küresel olarak toplam ölüm sayısının% 16'sını oluşturdu1. Yetişkin memelilerde kalbin rejeneratif kapasitesinin kaybı nedeniyle, bazı durumlarda, kalpteki kasılma fonksiyonlarını korumak için yeterli kardiyomiyosit yoktur, bu da kalp fonksiyonunu etkiler ve anormal ventrikül yeniden şekillenmesine ve kalp yetmezliğine katkıda bulunur 2,3,4. Gerçekten de, memelilerde, kalp, karaciğer, akciğerler, bağırsaklar, mesane, kemik ve cilt gibi diğer organlara kıyasla en zayıf rejeneratif kapasiteye sahiptir. Dünya nüfusunun yaşlanması küresel bir megatrend haline geldikçe, kalp hastalığı ile karşı karşıya kaldığımız zorluklar yoğunlaşacaktır5.
Kardiyak rejenerasyon mekanizmalarının aydınlatılması, iskemik kalp hastalığının tedavileri için önemli etkilere sahip olabilir. Raporlar, yenidoğan farelerin kalplerinin apeks rezeksiyon6 sonrası rejeneratif kapasiteye sahip olduğunu ortaya koymuştur. Bununla birlikte, bu rejeneratif kapasite7 günlük 7 yaşından sonra kaybolur. Çalışmalar, yetişkin memeli kalplerinin yenilenemediğini, çünkü kardiyomiyosit proliferasyonu kapasitelerinin 8,9 azaldığını göstermiştir. Bununla birlikte, alt omurgalıların kalpleri yaralanma sonrası güçlü bir rejeneratif kapasiteye sahiptir. Örneğin, zebra balığı 10, X. tropicalis11, Xenopus laevis12, newt 13 ve axolotl14, apeks rezeksiyonundan sonra tam rejenerasyon yeteneğine sahiptir. Ek olarak, bazı alt omurgalıların vücutlarının diğer kısımları da, yenilerin uzuvları ve tropikal pençeli kurbağaların kuyrukları, lensleri ve kolları gibi tam bir yenilenme geçirebilir 4,15,16.
Kardiyak hasar modellerinin oluşturulması, kardiyak rejenerasyonun altında yatan mekanizmaların aydınlatılmasında ilk adımdır ve rejeneratif araştırmalarda büyük öneme sahiptir. Araştırmacılar, bıçaklama, kontüzyon, genetik ablasyon, kriyoyaralanma ve enfarktüs dahil olmak üzere kardiyak yaralanma modelleri oluşturmak için çeşitli yöntemler geliştirmişlerdir 5,6.
Kriyoyaralanma, miyokard enfarktüsü (MI) ve apeks rezeksiyonu kardiyak hasarı indüklemek için yaygın olarak kullanılmaktadır ve yaralanma tipinin kardiyomiyositlerin aşağıdaki rejenerasyonu üzerinde önemli etkileri olabilir6. Cerrahi tekniğe bağlı olarak, kalbin yenilenmeye cevabı değişebilir. Kriyoyaralanma büyük hücre ölümüne neden olur ve zebra balığı17'nin kalbinde fibrotik izler üretir, böylece memeli enfarktüsüne benzeyen bir model oluşturur. Apikal rezeksiyon, zebra balığı 10 ve X. tropicalis11'de yapılan ventrikül dokularının bir kısmının kalıcı izlere neden olmadan kesilmesiyle gerçekleştirilir. Bu çalışmada daha basit bir operasyon olan ve kriyoyaralanmaya göre daha az cerrahi alet gerektiren apikal rezeksiyon uygulandı. Soy izleme analizini kullanarak, önceki bir çalışma, kardiyak rejenerasyonun, fare6 ve zebra balığı18'in kalplerinde önceden var olan kardiyomiyositlerin çoğalmasıyla ilişkili olduğunu, ancak amfibiler için hiçbir rapor bulunmadığını göstermiştir. Bu nedenle, X. tropicalis'teki apeks rezeksiyon modeli, rejeneratif yanıtların altında yatan mekanizmaların aydınlatılmasında önemli bir rol oynamaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
X. tropicalis ile ilgili tüm deneysel protokoller Jinan Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Ameliyat
- Preoperatif hazırlık: X. tropicalis'in kalbinde apeks rezeksiyonu için oftalmik makas, oftalmik forseps, iğne forseps, emici toplar, filtre kağıdı ve cerrahi dikişler/iğneler hazır bulundurun. Ayrıntılı bilgi için Malzeme Tablosuna bakın. Kullanmadan önce, tüm cerrahi aletleri otoklavlayarak sterilize edin ve gelecekte kullanmak üzere yeterli miktarda buz hazırlayın.
- Yetişkin bir X. tropicalis'i 4 dakika19 boyunca oda sıcaklığında 500 mL trikain çözeltisine (1 mg / mL) yerleştirerek trikain ile uyuşturun ve daha sonra kurbağanın ameliyat işlemi sırasında uyanmamasını sağlamak için ameliyat masasındaki bir buz yüzeyine koyun.
DİKKAT: Tüm prosedür 5-10 dakika gerektirir; anestezi süresi çok uzun olmamalıdır, aksi takdirde X. tropicalis ameliyattan sonra uyanamayabilir. - Torakotomi
- Anestezi uygulanan X. tropicalis karnını yukarı yerleştirin ve operasyon sırasında hayvanın derisinin kurumasını önlemek için kurbağanın karnını damıtılmış suya batırılmış gazlı bezle örtün.
- Göğsünü forseps ile hafifçe bastırın, göğsün merkezini alt ön ayağa paralel olarak bulun, cildi oftalmik makasla kaldırın ve yavaşça ~ 1 cm'lik küçük bir kesi yapın. Oftalmik makas kullanarak, cildin altındaki kas tabakasını toplayın ve merkezi göğüs kasında bir yara oluşturun. Kalp, yara bölgesinin üst pozisyonunda bulunduğundan, kalbi yaradan sıkmak için göğsüne oftalmik forseps ile hafifçe bastırın.
DİKKAT: X. tropicalis'in derisi antimikrobiyal peptitler üretebildiğinden, X. tropicalis'in cerrahi bölgesinde geleneksel dezenfeksiyon prosedürlerinin uygulanması gereksizdir. Herhangi bir dezenfektan X. tropicalis'in cildine zarar verecektir.
- Ventriküler apeks rezeksiyonu
- Perikardın forseps ile hafifçe kelepçelenmesi ve kalbin tepesine yakın oftalmik makas kullanarak hafifçe kırılması. Sistolik kan pompalaması nedeniyle perikardın çıkmasını bekleyin (Şekil 1A, B).
- Baskın olmayan elde forseps ile kalbin ucunu tutun ve kalp kasılma ritmine göre kalbi hafifçe kaldırın. Kalp, kan damarları boyunca kan dolaşımını sağlamak için kasıldığında, kalbin tepesini (ventrikülün ~% 14'ü) hızla kesin (Şekil 1C).
- Apeks rezeksiyon miktarının tüm kalbin yaklaşık% 14'ü olduğundan emin olmak için, rezeksiyon20 ile veya rezeksiyon olmadan kalp ağırlığını (HW) ve yüzey alanını analiz edin. Forseps ve emici bir top kullanarak kalbi göğsüne yerleştirin.
NOT: Kalbe doğrudan forseps ile bastırmayın; Aksi takdirde, kalbin diğer kısımları delinecektir.
- Cildi 4-0 emici olmayan ipek olmayan cerrahi iplik sütürü ile dikin (Şekil 1D). Postoperatif mortaliteyi önlemek için kas tabakasına dikiş atılmamasına dikkat edin. Ameliyattan sonraki 1 hafta içinde cilt yarasının doğal olarak iyileşmesini bekleyin.
- Sahte operasyon grubunda, tepe rezeksiyonu yapmadan torakotomi yapın, perikardı açın ve dikiş atın.
2. Cerrahi iyileşme
- Postoperatif X. tropicalis'i karnı yukarı bakacak şekilde az miktarda deiyonize su içeren bir Petri kabına yerleştirin (hayvanı tamamen su basmayın). X. tropicalis'in ~ 10 dakika içinde uyanmasını bekleyin.
- Bilinci yeniden kazandıktan sonra, hayvanın hareketliliğini ve aktivitesini ve ayrıca aktivite sırasında yara dikişini gözlemleyin. Dengelerini yeniden kazanan kurbağaları, yetiştirme için saf suyla dolu bir kaba aktarın. Yara enfeksiyonunu önlemek için suyu her gün saf suyla değiştirin.
NOT: Bu önlemlerle, hayatta kalma oranı ~% 90'a ulaşabilir. Uzun süreli anestezi ve ameliyat sırasında aşırı kanama, tipik olarak ameliyat gününde meydana gelen ölüme yol açar.
3. Kardiyak yaralanma sonrası onarım durumunun tespiti
- Ameliyattan sonra X. tropicalis'in kalbini birden fazla zaman noktasında toplayın.
- X. tropicalis'i trikain ile uyuşturduktan sonra, karnı açın ve kalbin yerini bulmak için diğer iç organları ve dokuları çıkarmak için forseps kullanın.
NOT: Apeks rezeksiyonu nedeniyle, onarım işlemi sırasında kalbin diğer doku ve organlarla birlikte gelişmesi muhtemeldir. Bazen, kas duvarına yapışır ve ayrılması kolay değildir, bu nedenle toplama sırasında dikkatlice ele alınması gerekir. - Kalbi bulduktan sonra, diğer organları kalpten nazikçe yırtmak için forseps kullanın. Kalbi açığa çıkarmak için kalbi çevreleyen diğer dokuları yavaşça soyun. Kalbi yavaşça kaldırmak için forseps kullanın ve makas kullanarak kesin. Kalan kanı çıkarmak için kalbi hemen PBS'ye yerleştirin ve dokümantasyon için bir stereoskopla fotoğraflayın (Şekil 2).
- X. tropicalis'i trikain ile uyuşturduktan sonra, karnı açın ve kalbin yerini bulmak için diğer iç organları ve dokuları çıkarmak için forseps kullanın.
- Gradyan dehidrasyonu
- Fazla PBS kalıntılarını kurutmak için kalpleri filtre kağıdıyla kurutun ve 24 kuyucuklu bir hücre kültürü kabına yerleştirin. Kalp dokularını gece boyunca sabitlemek için 1-2 ml% 4 paraformaldehit kullanın. Ertesi gün, etanol dehidrasyonu yapın. İlk olarak, gece boyunca% 70 etanol, ardından gradyan dehidrasyonu için% 80 etanol,% 90 etanol ve% 100 etanol kullanın (her seferinde 1 saat). % 100 etanol kullanımını üç kez tekrarlayın.
- Parafin gömme
- Susuz kalmış kalp dokusunu 6-8 dakika boyunca ksilen ile tedavi edin. Ksilen ile muamele edilmiş dokuyu 2-3 saat boyunca 65 ° C'de parafin balmumu ile doldurulmuş bir cam kaba yerleştirin.
NOT: Gömme işlemi sırasında bölümü etkiledikleri için hava kabarcıklarından kaçınmak önemlidir.
- Susuz kalmış kalp dokusunu 6-8 dakika boyunca ksilen ile tedavi edin. Ksilen ile muamele edilmiş dokuyu 2-3 saat boyunca 65 ° C'de parafin balmumu ile doldurulmuş bir cam kaba yerleştirin.
- Gömülü dokuyu -20 ° C'de 1 saat boyunca dondurun ve bölümlendirin.
- Kalbi kesitledikten sonra, standart hematoksilin ve eozin (H&E) ve Masson'un trikrom boyama tekniklerini bölüm11'de uygulayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kalpler 0 dpr, 7 dpr, 14 dpr ve 30 dpr'de toplandı. Morfolojik analiz, kalp hasarının neden olduğu kan pıhtısının 30 dpr'de kaybolduğunu ortaya koydu (Şekil 2). Aynı zamanda, rezeksiyon grubunda kalplerin 30 dpr'deki görünümü, sahte operasyon grubundaki kalplerinkine benzerdi; belirgin bir yara yoktu (Şekil 2). Apikal rezeksiyondan sonra, H&E (Şekil 3) ve Masson'un trikrom boyaması (Şekil 4) ile gözlendiği gibi, ventriküldeki yarayı bir kan pıhtısı oluşturdu ve kapattı. 14 dpr içinde pıhtı yavaş yavaş kayboldu ve yerini fibrin aldı (Şekil 4). 14 dpr'den 30 dpr'ye kadar, miyokard kademeli olarak fibrinin yerini aldı ve hasarlı ventrikül tepesini onardı (Şekil 4). Histolojik analizde 30 dpr'de sahte ve rezeke edilmiş kalpler arasında fark saptanmadı (Şekil 3 ve Şekil 4). Bu morfolojik ve histolojik analiz, erişkin X. tropicalis'in yaralı ventrikül tepesini 30 dpr ile onarıp yenileyebildiğini ortaya koymuştur.
Şekil 1: Cerrahi işlem . (A) Perikard ile kaplı açıkta kalan bir kalbin temsili görüntüsü. (B) Perikardın soyulduğu sistolik fazdaki bir kalbin temsili görüntüsü; Kesikli çizgi, kalbin apikal rezeksiyonunun yerini gösterir. (C) Kalbin tepe rezeksiyonunun temsili görüntüsü. (D) Ameliyat sonrası deri sütürünün temsili görüntüsü. Ölçek çubukları = 1 mm. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: X. tropicalis kalplerinin 0 dpr'den 30 dpr'ye kadar morfolojik analizi. (A) 0 dpr'de sahte (solda) ve apikal rezeksiyon gruplarından (sağda) kalplerin temsili görüntüleri, rezeksiyon grubunda kalbin tepesi anlamlı olarak yoktur. (B,C) 7-14 dpr'de rezeksiyon gruplarına (sağda) karşı sahte (solda) kalplerin temsili görüntüleri, rezeksiyon grubunun kalplerinde 7 dpr'de birçok kan pıhtısı görülür. 14 dpr'de, apikal rezeksiyon bölgesinde önemli rejenerasyon görülür, ancak kalbin tepesinin kenarları eşit değildir. (D) 30 dpr'de rezeksiyon gruplarına (sağda) karşı sahte (solda) kalplerin temsili görüntüsü; rezeke edilen kalbin tepesi neredeyse tamamen yenilenmiştir. Ölçek çubukları = 1 mm. Kısaltma: dpr = rezeksiyondan sonraki günler. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Xenopus tropicalis kalplerinin 0 dpr'den 30 dpr'ye kadar histolojik analizi. 0 dpr ila 30 dpr arasında sahte ve rezeksiyon gruplarından kalpler kullanılarak H&E boyamasının temsili görüntüleri. (A) Yaklaşık amputasyon düzlemlerini gösteren kesikli çizgilerle sahte gruptan kalpler kullanılarak H&E boyamasının temsili görüntüsü. (B) Rezeksiyon grubundan kalpler kullanılarak H&E boyamasının temsili görüntüsü 0 dpr'de. (C-E) Rezeksiyon grubundan kalpleri 7-30 dpr'de kullanarak H&E boyamasının temsili görüntüleri, 7 dpr'de (oklar) yara içinde biriken büyük miktarda kırmızı kan hücresi ile. Rezeksiyon bölgesinde 14 dpr'de (ok uçları) bir fibrin kütlesi ortaya çıkmıştır. Kalpler 30 dpr'de yara izi olmadan tamamen yenilenmiştir. Ölçek çubuğu = 500 μm. Kısaltma: dpr = rezeksiyondan sonraki günler. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: X. tropicalis kalplerinin 0 dpr'den 30 dpr'ye kadar miyokard fibroz analizi. Masson'un sahte ve rezeksiyon gruplarından kalpleri 0 dpr ila 30 dpr arasında boyamasının temsili görüntüleri. (A) Masson'un sahte gruptan kalpleri boyamasının temsili görüntüsü, yaklaşık amputasyon düzlemlerini gösteren kesikli çizgilerle. (B) Masson'un rezeksiyon grubundan kalpleri 0 dpr'de boyamasının temsili görüntüsü. (C-E) Masson'un rezeksiyon grubundan kalpleri 7-30 dpr'de boyadığının temsili görüntüleri, 7 dpr'de (oklar) yara içinde biriken büyük miktarda kırmızı kan hücresi ile. Rezeksiyon bölgesinde 14 dpr'de (ok uçları) bir fibrin kütlesi ortaya çıkmıştır. Kalpler 30 dpr'de yara izi olmadan tamamen yenilenmiştir. Ölçek çubuğu = 500 μm. Kısaltma: dpr = rezeksiyondan sonraki günler. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kalbin tepesinin cerrahi amputasyonunu içeren apikal rezeksiyon, zebra balığı ve farelerdetanımlanmıştır 6,18; ancak, bu X. tropicalis'te tanımlanmamıştır. Bu yazıda kardiyak hasarın güvenilir bir modeli açıklanmakta ve erişkin X. tropicalis'in kalbinin apikal rezeksiyondan sonra skar oluşmadan tamamen yenilenebildiği gösterilmiştir. Bununla birlikte, bazı eksikliklerin iyileştirilmesi ve bazı detayların dikkat edilmesi gerekir.
Apikal rezeksiyon bir kalp hasarı modeli oluşturabilse de, farklı kalp boyutlarına sahip kurbağaların çeşitliliği nedeniyle kalbin aynı ölçüde eksizyonunu sağlamak zordur. Aynı boyutta apeksleri olan kalplerin rezeke edildiğinden emin olmak için, aynı büyüklükteki kurbağaların seçilmesi gerekir ve operatör deneyden önce kapsamlı bir şekilde pratik yapmalıdır.
İkincisi, kalbi doğru ve hızlı bir şekilde bulma ve açığa çıkarma yeteneği, prosedürün başarısı için kritik öneme sahiptir, çünkü kalbi bulma süreci, bitişik kan damarlarının delinmesine ve kanamaya neden olabilir, böylece prosedürün ilerlemesini engelleyebilir veya hatta başarısızlığa neden olabilir. Anestezi süresi çok kısa veya çok uzun olmamalıdır. Çok kısaysa, kurbağa operasyon tamamlanmadan uyanabilir ve bu işlem çok uzunsa, kurbağanın ölümüne yol açması muhtemeldir. Protokol bölüm 2-5'te belirtildiği gibi, dikiş dikkatli yapılmalıdır. Tüm kalbe kıyasla apeks rezeksiyon miktarının oranının kurbağalar arasında yaklaşık olarak aynı olmasını sağlamak için, kalp ağırlığı (HW) ve rezeksiyonlu veya rezeksiyonsuz yüzey alanı analiz edilir20 ve kalp apeksinin küçük bir kısmı oda maruziyetini sağlamak için rezeke edilir6.
Kriyoyaralanma, MI ve apikal rezeksiyon, zebra balığı ve farelerde kardiyak hasarı indüklemek için en yaygın kullanılan üç yöntemdir 6,18,21. Bu makalenin sınırlaması, sadece üçüncü yöntemin kullanılmış olmasıdır, yani bu çalışma, diğer iki yöntemle yaralanma sonrası farklı rejeneratif yanıtlar hakkında herhangi bir bilgi sağlamamaktadır6. Kriyoyaralanma, memeli enfarktlarına benzer şekilde, ventriküler duvarın ~% 20'sinde çok sayıda hücrenin ölümüyle sonuçlanır21. Koroner arter tıkanıklığı olarak da adlandırılan MI, X. tropicalis'te farelerde apikal rezeksiyona kıyasla daha yüksek sağkalım oranlarına sahiptir 6, ancak tropikal pençeli kurbağaların kalpleri farelerinkindendaha küçük olduğu için X. tropicalis'te elde edilmesi daha zordur. Bu çalışmada uygulanan X. tropicalis apikal rezeksiyon yönteminin uygulanması daha basittir ve postoperatif sağkalım oranı yüksektir.
Bu yazıda geliştirilen apikal rezeksiyon, X. tropicalis'in kalbindeki moleküler rejenerasyon mekanizmalarını araştırmak için önemli bir yöntem olacaktır. Önceki bir çalışmada ayrıca apikal rezeksiyon20 sonrası X. tropicalis'te Fosl1'in kardiyak rejenerasyon için vazgeçilmez olduğu gösterilmiştir. X. tropicalis'teki apikal rezeksiyon kalp hasarının bu modeli, insan kardiyak rejenerasyonu ile ilgili genlerin ve moleküler mekanizmaların incelenmesini teşvik etmek için kardiyak rejenerasyonun altında yatan moleküler mekanizmalar hakkında daha fazla bilgi edinmek için kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların beyan edecekleri çıkar çatışmaları yoktur.
Acknowledgments
Bu çalışma, Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2016YFE0204700), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82070257, 81770240) ve Eğitim Bakanlığı, Jinan Üniversitesi (ZSYXM202004 ve ZSYXM202104), Çin Rejeneratif Tıp Anahtar Laboratuvarı Araştırma Bursu ile desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | GHTECH | 64-19-7-500ml | |
| Acid Alcohol Fast Differentiation Solution | Beyotime | C0163M | |
| Acid Fuchsin | aladdin | A104916 | |
| Alcohol Soluble Eosin Y Stainin Solution | Servicebio | G1001-500ML | |
| BioReagent | Beyotime | ST2600-100g | |
| Ethanol absolute | Guangzhou Chemical Reagent Factory | HB15-GR-0.5L | |
| Hematoxylin Stain Solution | Servicebio | G1004-500ML | |
| Neutral balsam | Solarbio | G8590 | |
| Operating Scissors | Prosperich | HC-JZ-YK-Z-10cm | |
| Paraffins | Leica | 39601095 | |
| Para-formaldehyde Fixative | Servicebio | G1101-500ML | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) powder | Servicebio | G0002-2L | |
| Phosphomolybdic acid hydrate | Macklin | P815551 | |
| Stereo microscope | Leica | ||
| surgical forceps | ChangZhou | zfq-11-btjw | |
| Surgical Suture | HUAYON | 18-5140 | |
| Tricaine | Macklin | ||
| Xylene | Guangzhou Chemical Reagent Factory | IC02-AR-0.5L |
References
- Thiara, B.
- van Amerongen, M. J., Engel, F. B. Features of cardiomyocyte proliferation and its potential for cardiac regeneration. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 12 (6), 2233-2244 (2008).
- Burke, A. P., Virmani, R.
- Sessions, S. K., Bryant, S. V. Evidence that regenerative ability is an intrinsic property of limb cells in Xenopus. Journal of Experimental Zoology. 247 (1), 39-44 (1988).
- Laflamme, M. A.
- Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice. Nature Protocols. 9 (2), 305-311 (2014).
- Tzahor, E., Poss, K. D. Cardiac regeneration strategies: Staying young at heart. Science. 356 (6342), 1035-1039 (2017).
- Porrello, E. R., et al. Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart. Science. 331 (6020), 1078-1080 (2011).
- Porrello, E. R., et al. Regulation of neonatal and adult mammalian heart regeneration by the miR-15 family. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (1), 187-192 (2013).
- Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T.
- Liao, S., et al. Heart regeneration in adult Xenopus tropicalis after apical resection. Cell & Bioscience. 7, 70 (2017).
- Marshall, L. N., et al. Stage-dependent cardiac regeneration in Xenopus is regulated by thyroid hormone availability. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (9), 3614-3623 (2019).
- Witman, N., Murtuza, B., Davis, B., Arner, A., Morrison, J. I. Recapitulation of developmental cardiogenesis governs the morphological and functional regeneration of adult newt hearts following injury. Developmental Biology. 354 (1), 67-76 (2011).
- Cano-Martinez, A., et al. Functional and structural regeneration in the axolotl heart (Ambystoma mexicanum) after partial ventricular amputation. Archivos de Cardiología de México. 80 (2), 79-86 (2010).
- Kragl, M., et al. Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration. Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).
- Oberpriller, J. O., Oberpriller, J. C. Response of the adult newt ventricle to injury. Journal of Experimental Zoology. 187 (2), 249-253 (1974).
- Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish. Development. 138 (9), 1663-1674 (2011).
- Ellman, D. G., et al. Apex resection in zebrafish (Danio rerio) as a model of heart regeneration: A video-assisted guide. International Journal of Molecular Sciences. 22 (11), 5865 (2021).
- Lee-Liu, D., et al. Genome-wide expression profile of the response to spinal cord injury in Xenopus laevis reveals extensive differences between regenerative and non-regenerative stages. Neural Development. 9, 12 (2014).
- Wu, H. Y., et al. Fosl1 is vital to heart regeneration upon apex resection in adult Xenopus tropicalis. npj Regenerative Medicine. 6 (1), 36 (2021).
- Chablais, F., Jazwinska, A. Induction of myocardial infarction in adult zebrafish using cryoinjury. Journal of Visualized Experiments. (62), e3666 (2012).
