Summary
ここでは、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(LC-MS-MS)を使用して、水耕条件下で小麦中のイミダクロプリドの吸収、転座、および分布を決定するためのプロトコルを示します。その結果、イミダクロプリドはコムギに吸収され、コムギの根と葉の両方でイミダクロプリドが検出された。
Abstract
殺虫剤の一種であるネオニコチノイドは、その新しい作用機序、高い殺虫活性、および強力な根の取り込みのために広く使用されています。世界で最も広く使用されている殺虫剤であるイミダクロプリドは、代表的な第一世代のネオニコチノイドであり、作物、野菜、果樹の害虫駆除に使用されています。イミダクロプリドのこのような幅広い用途により、作物中のその残留物はますます精査されています。本研究では,15本のコムギ苗を0.5 mg/Lまたは5 mg/Lのイミダクロプリドを含む培地に入れ,水耕栽培を行った。コムギの根および葉におけるイミダクロプリドの含有量は、コムギ中のイミダクロプリドの移動および分布を探索するために、1日、2日、および3日間の水耕後に決定された。その結果,コムギの根と葉の両方でイミダクロプリドが検出され,根のイミダクロプリドの含有量は葉よりも高かった。さらに、コムギ中のイミダクロプリド濃度は、曝露時間の増加とともに増加した。3日間の曝露後、0.5 mg/L処理群のコムギの根および葉は、それぞれ4.55 mg/kg±1.45 mg/kgおよび1.30 mg/kg±0.08 mg/kgイミダクロプリドを含み、5 mg/L処理群の根および葉は0.62 mg/kgおよび8.71 mg/kg±0.14 mg/kgイミダクロプリド±42mg/kgおよび8.71mg/kgを含み、 それぞれ。本研究の結果は、作物中の残留農薬のより良い理解を可能にし、農薬の環境リスク評価のためのデータ参照を提供します。
Introduction
今日の農学では、農薬の使用は作物の収量を増やすために不可欠です。ネオニコチノイド系殺虫剤は、昆虫神経系のニコチン性アセチルコリン受容体を制御することによって膜電位バランスを変化させ、それによって昆虫の中枢神経系の正常な伝導を阻害し、昆虫の麻痺および死をもたらす1。従来の殺虫剤と比較して、ネオニコチノイドには、新しい作用機序、高い殺虫活性、強力な根の吸収などの利点があり、農薬市場で非常に成功しています2,3。ネオニコチノイドの販売量は、2014年に世界の農薬市場の27%を占めると報告されました。ネオニコチノイドの平均年間成長率は2005年から2010年まで11.4%で、そのうち約7%が中国で登録されました4,5,6。2016年末から2017年前半にかけて、中国での農薬の売上高は下落した後、回復し始め、農薬の価格は上昇し続け、その中でネオニコチノイド系殺虫剤は大幅な価格上昇を示しました7。これまでに、3世代のネオニコチノイド殺虫剤が開発されており、それぞれニコチンの塩化ピリジン、チアゾリル、およびテトラヒドロフラン基を含有する8。
イミダクロプリドは、分子式がC9H10ClN5O2である第一世代のネオニコチノイド殺虫剤を表し、無色の結晶である。イミダクロプリドは、主にアブラムシ、ウンカ、ミールワーム、アザミウマなどの害虫を防除するために使用され9 、米、小麦、トウモロコシ、綿花などの作物、ジャガイモなどの野菜、果樹に適用できます。農薬の長期的、実質的、継続的な施用により、益虫と害虫の天敵の両方が急速に減少し、一部の農業害虫は農薬に耐性を持つようになり、農薬の継続的かつ増加量という悪循環が生じています10。さらに、農薬の広範な施用は、土壌の質の悪化、農産物中の残留農薬の残留、およびその他の生態学的問題を引き起こし、農業生態環境に重大な損害を与えるだけでなく11 、人間の健康に深刻な脅威をもたらします12。農薬散布は、土壌微生物と土壌動物の成長と質に深刻な影響を及ぼします13。農薬の不当または過度の使用は、土壌および水環境、動植物、さらには人命に重大なセキュリティリスクを引き起こしました14。近年、農薬の広範な施用に伴い、作物中の過剰な残留農薬の問題がより深刻になっています。イミダクロプリドを使用して野菜収量を増加させると、野菜中のイミダクロプリドの吸収率は、イミダクロプリドの量と残留物の増加とともに増加しました15。主要な食用作物として、小麦の生産と安全性の両方が重要です。したがって、小麦に使用される農薬の残留と流通政策を明確にする必要があります。
近年、水、土壌、植物からイミダクロプリド残留物を抽出するための多くの方法が開発されています。QuEChERS法(迅速、簡単、安価、効果的、堅牢、安全)は、固相マイクロ抽出技術と分散固相抽出技術を組み合わせた新しい方法であり、抽出溶媒としてアセトニトリルを使用し、それぞれNaClと無水MgSO4を使用してサンプル中の混合不純物と水を除去します16。.QuEChERS法は、最小限のガラス製品を必要とし、簡単な実験ステップを備えているため、最も人気のある農薬抽出方法の1つとなっています17。イミダクロプリドの検出では、液体クロマトグラフィー(LC)で1 × 10-9 g18という低い検出限界を達成し、ガスクロマトグラフィー(GC)で1 × 10-11 g 19を達成しました。それらの高い分解能と感度のために、LC-MSおよびGC-MSは、1 × 10-13から1 × 10-14 g20,21のさらに低いイミダクロプリド検出限界を示しています。したがって、これらの技術は、微量イミダクロプリド残基の分析に適しています。
本研究では、小麦中のイミダクロプリド残留物の分布を研究するために、イミダクロプリドを標的汚染物質として選択し、小麦を試験作物として選択しました。このプロトコルは、水耕栽培条件下で栽培された小麦植物のさまざまな部分におけるイミダクロプリドの吸収と貯蔵を探索することにより、小麦中の農薬イミダクロプリドの濃縮と移動の包括的な分析の方法を詳述しています。本研究は、小麦中の残留農薬のリスク評価の理論的基礎を提供し、残留農薬を減らすための農業生産活動における農薬の合理的な適用を導き、作物生産の安全性を向上させることを目的としています。
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Protocol
1.小麦種子の発芽
- 完全な顆粒、無傷の胚、均一なサイズ(長さ:6 mm±0.5 mm)の小麦種子(ジマイ20)を1,000個選択します。
- 333.3mLの30%H2O2溶液を1Lメスフラスコに移し、イオン交換水で希釈して1Lの10%H2O2溶液を調製した。小麦種子を10%H 2 O2溶液に15分間浸して、種子表面を消毒します(図1)。
- 小麦の種子を毎回10秒間、滅菌水で5回すすぎます。
- 湿った滅菌濾紙が入ったガラスのペトリ皿に胚を上に向けて小麦の種子を均等に広げます(図2)。ペトリ皿を30°C、相対湿度80%の人工気候インキュベーターに入れます。小麦の種子が発芽して根付くまで、暗所で3日間培養します。
図1:小麦種子の消毒。コムギ種子を10%H2O2溶液(ビーカー中)に15分間浸し、種子表面を消毒した。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:小麦種子の発芽。 小麦種子を、湿った滅菌濾紙を含むガラスシャーレに均等に広げた。ペトリ皿を人工気候インキュベーターに入れて小麦種子を発芽させた。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
2.小麦苗の栽培
- 551 mgのホーグランド基礎塩混合物を1 Lの脱イオン水に溶解し、1/2ホーグランド栄養溶液(0.75 mmol/L K 2 SO 4、0.1 mmol/L KCl、0.6 mmol/L MgSO 4、4.0 × 10-2 mmol/L FeEDTA、1.0 ×10−3 mmol/L H 3 BO3、1.0 × 10−3 mmol/L MnSO 4を含む)を調製する。 1.0 × 10−3ミリモル/L ZnSO 4、1.0 × 10−4ミリモル/L CuSO 4、および5.0 × 10−6ミリモル/L Na2 MoO 4)。
- 小麦の種子(ステップ1.4)が発芽した後、水耕栽培用の1/2ホーグランド栄養溶液100mLを含む水耕栽培装置( 材料表を参照)に15本の小麦苗を置きます(図3)。水耕栽培装置全体を人工気候インキュベーター( 材料の表を参照)に入れ、25°C、相対湿度80%で7日間、16時間の明/8時間の暗明周期でインキュベートします。
図3:コムギ苗の水耕栽培。 コムギ苗を100mLの1/2ホーグランド養液中で0日、3日、7日間水耕栽培した。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
3. コムギ植物をイミダクロプリド溶液に曝露する実験
- 7日間の水耕栽培期間の後、小麦植物を0.5 mg / Lまたは5 mg / Lのイミダクロプリドを含む1/2ホーグランド栄養溶液に移植して、イミダクロプリド曝露実験を実施します。各水耕栽培装置で15本の小麦植物を育てます。イミダクロプリド濃度グループごとに15個の水耕栽培装置を設置して、サンプリング中に適切なサンプルが採取されるようにします。
- 水耕栽培装置全体を人工気候インキュベーターに3日間置き、25°C、相対湿度80%、明長16時間/暗明周期8時間。
- 暴露期間中、小麦の根(小麦植物あたり0.2 g)と葉(小麦植物あたり0.5 g)を毎日収集します。5つおきの水耕栽培装置からの小麦サンプルを並列グループとして統合し、サンプルのイミダクロプリド含有量を決定します。
4.小麦からイミダクロプリドを抽出する手順
- コムギ根からのイミダクロプリドの抽出
- 実験誤差を避けるために、小麦の根を毎回10秒間流す滅菌水で4回洗浄し、根の表面に吸着したイミダクロプリドを取り除きます。
- 小麦の根をハサミで約1cmに細断します(図4)。細かく刻んだ小麦の根10.00 gの重さを量り、50 mLの遠沈管に入れます。
- 10 mLのアセトニトリルを遠沈管に加え、チューブをボルテクサー上で1分間ボルテックスします。次に、4 gの無水MgSO4 と1.5 gのNaClを遠沈管に加え、すぐにチューブを30秒間ボルテックスします。チューブを6,000 x gで5分間遠心分離します。
- 使い捨てシリンジで上清を吸引し、シリンジフィルター(孔径0.22μm)に通してサンプルを採取します。
- コムギ葉からのイミダクロプリドの抽出(図5)
- 新鮮な小麦の葉をハサミで約1cmに細切りにします(図4)。細かく刻んだ小麦の葉10.00 gを量り、50 mLの遠沈管に入れます。
- 10 mLのアセトニトリルを遠沈管に加え、チューブをボルテクサー上で1分間ボルテックスします。
- 4 gの無水MgSO4 と1.5 gのNaClを遠心管に加え、すぐにチューブを30秒間ボルテックスします。
- チューブを6,000 x gで5分間遠心分離します。
- 遠心分離後、黒鉛化カーボンブラック(GCB)50 mgと無水MgSO4 150 mgを入れた5 mL遠沈管に上清2 mLを加え(サンプルから色素と水分を除去するため)、遠沈管を30秒間ボルテックスします(図6)。チューブを6,000 x gで5分間遠心分離します。
- 使い捨てシリンジで上清を吸引し、シリンジフィルター(孔径0.22μm)に通してサンプルを採取します。
図4:細かく刻んだ小麦の根と葉。 新鮮な小麦の根と葉をハサミで約1cmに細断した。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図5:コムギ葉中のイミダクロプリドの抽出。 サンプル中のイミダクロプリドをQuEChERS法を用いて抽出した(プロトコルのステップ4.2.1〜4.2.4)。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図6:コムギ葉中のイミダクロプリドの精製。 除染剤は50 mg GCB + 150 mg MgSO4でした。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
5.イミダクロプリドの定量
- 0.2〜250 μg/Lのイミダクロプリド濃度から得られた標準曲線(y = 696.61x + 56.411、R = 1)に基づいて、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(LC-MS-MS)を使用してサンプル中のイミダクロプリドを定量します。(図7)。質量分析計には、C18 カラム(100 mm x 2.1 mm、3 μm)とエレクトロスプレーイオン化源(ESI+)が装備されていました。溶出プログラムとイオン源パラメータを 表1に示します。
図7:コムギ葉中のイミダクロプリドのクロマトグラムおよび質量分析。 上のパネルは、イミダクロプリドのクロマトグラムを示す(保持時間= 0.93分)。下のパネルは、0.93分でのイミダクロプリドの質量分析を示し、イミダクロプリドの生産の応答強度(m / z = 208.8)を示しています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| カラム温度 | 40 °C |
| 溶剤A | 99.9%水/0.1%ギ酸(V / V) |
| 溶剤B | アセトニ トリル |
| 溶出プログラム | 0–0.5分, A = 20% |
| 0.5〜2分、A = 20%〜50% | |
| 2–3 分, A = 50% | |
| 3〜3.1分、A = 50%〜20% | |
| 3.1〜5分、A = 20% | |
| 流量(ミリリットル/分) | 0.3 |
| 注入量(μL) | 5 |
| キャピラリー温度(°C) | 330 |
| 気化器温度(°C) | 350 |
| シースガス流量(Arb) | 40 |
| 補助ガス流量(Arb) | 20 |
| スプレー電圧(V) | 3900 |
| 衝突ガス圧(mTorr) | 1.5 |
| プリカーサーイオン | 256.1 |
| プロダクトイオン/衝突エネルギー(eV) | 208.8/16 |
表1:液体クロマトグラフィー-質量分析法の溶出プログラムとイオン源パラメータ。
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Representative Results
イミダクロプリドの検出限界(LOD)は5.76 × 10-14 gであり、小麦の根または葉におけるイミダクロプリドのLODは0.01 μg/kgでした。マトリックス効果は観察されなかった。コムギ中のイミダクロプリドの回収収率を 表2に示す。イミダクロプリド濃度0.5 mg/Lおよび5 mg/Lに曝露されたコムギ根からのイミダクロプリドの回収収率は,それぞれ94.0%-97.6%および98.8%-99.2%であった。変動係数はそれぞれ1.92%と0.20%でした。0.5 mg/Lおよび5 mg/Lのイミダクロプリド濃度に曝露されたコムギ葉からのイミダクロプリドの回収収率は、それぞれ88.2%-91.4%および92.5%-93.4%であった。変動係数はそれぞれ1.85%と0.53%でした。
コムギの根及び葉におけるイミダクロプリド濃度を 表3に示す。イミダクロプリドはコムギの根と葉の両方で検出され、葉よりも根の含有量が高かった。イミダクロプリド含有量は、より長い曝露時間とともに増加した。3日間の曝露後、小麦の根および葉のイミダクロプリドの量は、0.5 mg/L処理群でそれぞれ4.55 mg/kg±1.45 mg/kgおよび1.30 mg/kg±0.08 mg/kg、5 mg/L処理群でそれぞれ0.62 mg/kgおよび8.71 mg/±kg±0.14 mg/kgであった。コムギの根をイミダクロプリドに1日間曝露すると,コムギの根と葉の両方でイミダクロプリドが検出され,コムギの根が培地からイミダクロプリドを速やかに吸収し,コムギ植物に導くことが示された。コムギ葉中のイミダクロプリド含量は2日目と比較して3日目にわずかに減少した。これはおそらく、水耕栽培期間の延長に伴う小麦葉の単位体積あたりのイミダクロプリド含有量の希釈と相まって、いくつかのイミダクロプリドの分解によって引き起こされた。コムギの根と葉には異なる量のイミダクロプリドが含まれており、イミダクロプリドはコムギ植物で異なる方法で吸収および伝導され、同時にその作用部位に到達しなかったことが示唆された。小麦植物の異なる部分におけるイミダクロプリド残留物の違いは、小麦植物の生理学的構造およびイミダクロプリドの物理化学的性質と密接に関連している。
植物に吸収される農薬の一般的な濃縮および移動関連のパラメータには、根濃縮係数(RCF)と転座係数(TF)22が含まれます。RCFは、植物の根におけるイミダクロプリドの濃度と培地中のイミダクロプリドの濃度の比率です。RCF > 1は、イミダクロプリドが植物によって容易に濃縮されることを示し、RCF < 1は、植物がイミダクロプリドを容易に濃縮しないことを示す。 表4から分かるように、本研究のRCFは>1であり、コムギがイミダクロプリドに対して濃縮効果を有することを示している。TFは、植物(ここでは小麦)が植物の根、新芽、および葉の間に物質(ここではイミダクロプリド)を移管する能力を表します。TF>1は、イミダクロプリドが植物によって容易に転座することを示し、TF<1は、植物がイミダクロプリドによって容易に転座しないことを示す。TFは、小麦のさまざまな部分のイミダクロプリドの残留濃度と根のイミダクロプリドの濃度の比率として計算されます:TF葉 = C葉/ C根。TF葉 >1は、イミダクロプリドが植物の根から葉に容易に移行することを示し、TF葉 <1はその逆を示す。 表4から分かるように、本研究におけるTF葉は <1であり、イミダクロプリドがコムギの根から葉へ容易に移行しなかったことを示している。
イミダクロプリド曝露後のコムギ植物の生育状態を 図8に示す。3日間の曝露後、0.5 mg / Lも5 mg / Lのイミダクロプリドも小麦植物の成長を明らかに阻害しませんでした。.
この研究に関連するデータセットは、https://doi.org/10.5281/zenodo.7022287 で入手できます。
図8:イミダクロプリドに1日、2日、3日間曝露された小麦植物。 CK =コントロールグループ;0.5 = 0.5 mg / Lイミダクロプリド群;5 = 5 mg / Lイミダクロプリド群。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| 見本 | イミダクロプリド濃度(mg / L) | 回収率(%) | RSD(%) | |||
| 治療1 | 治療2 | 治療3 | 平均 | |||
| 小麦の根 | 0.5 | 94.00 | 97.60 | 95.20 | 95.60 | 1.92 |
| 5 | 99.00 | 98.80 | 99.20 | 99.00 | 0.20 | |
| 小麦の葉 | 0.5 | 88.20 | 91.40 | 90.60 | 90.10 | 1.85 |
| 5 | 93.30 | 93.40 | 92.50 | 93.10 | 0.53 | |
表2:コムギの根および葉におけるイミダクロプリドの回収率および相対標準偏差(RSD)(n=3)。イミダクロプリド濃度は、小麦の根または葉の新鮮な重量に基づいています。
| 見本 | 溶液中のイミダクロプリド濃度(mg / L) | イミダクロプリド含有量(mg / kg) | ||
| 1 d | 2 d | 3 d | ||
| 小麦の根 | 0.5 | 2.11 ± 0.05 | 3.18 ± 0.48 | 4.55 ± 1.45 |
| 5 | 14.83 ± 0.50 | 26.86±1.38 | 42.5± 0.62 | |
| 小麦の葉 | 0.5 | ±0.34± ±0.03 | 1.43 ± 0.60 | 1.30 ± ±0.08 |
| 5 | 2.10 ± 0.18 | 9.81±0.70 | 8.71±0.14 | |
表3:1日、2日、および3日間の曝露後の小麦の根と葉のイミダクロプリド含有量。 データはSD±平均値(n=2)として表す。イミダクロプリド濃度は、小麦の根または葉の新鮮な重量に基づいています。
| 群 | ティッカー | TFリーフ | ||||
| 1日間 | 2日間 | 3日間 | 1日間 | 2日間 | 3日間 | |
| 0.5 mg/Lイミダクロプリド群 | 4.22 | 6.36 | 9.10 | 0.16 | 0.45 | 0.29 |
| 5 mg/Lイミダクロプリド群 | 2.97 | 5.37 | 8.50 | 0.14 | 0.37 | 0.20 |
表4:小麦からイミダクロプリドへの根濃縮因子(RCF)および葉転座因子(TF葉)。 RCFは、小麦根中のイミダクロプリドの濃度と水耕栽培培地中のイミダクロプリドの濃度の比率です。TF葉は 、小麦葉のイミダクロプリドの残存濃度と小麦根の残存濃度の比率です。
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Discussion
近年、農薬イミダクロプリドの前処理及び残留の検出のための方法が頻繁に報告されている。Badawyら23は、温室条件下で栽培されたトマト果実中のイミダクロプリドの含有量を決定するために高速液体クロマトグラフィーを使用し、0.0125〜0.15μg/ mLの範囲のイミダクロプリドの良好な直線性を報告しました。Zhaiら24は、LC-MS-MSを用いて、チャイナのイミダクロプリドの残留物を研究した。本研究では、QuEChERS法を用いてコムギの根および葉からイミダクロプリドを抽出した。迅速かつ効率的な方法として、QuEChERS法は、土壌25および植物20,26(唐辛子、トマト、キャベツ、小麦など)サンプルからイミダクロプリドを抽出するのに非常に適しており、広く使用されています。現在の研究の目的は、イミダクロプリドの回復が一貫しており、決定要件を満たしているかどうかを判断することでした。コムギ中のイミダクロプリドの回収率および変動係数は残留物測定の要件を満たしており,本手法がコムギからのイミダクロプリドの抽出に実行可能であることが示された。本研究ではLC-MS-MSによりイミダクロプリド含量を測定し,イミダクロプリドの機器検出限界は残留農薬定量分析の要件を満たした。ただし、この方法では、サンプルの含有量が0.01 μg / kg未満の場合、イミダクロプリドを検出できない場合があります。このような場合は、サンプルを濃縮するか、LC-MS-MS用に大量に注入する必要があります。本研究で用いたイミダクロプリドの抽出・検出法は、迅速性、簡便性、信頼性再現性、利便性、高精度という特徴を有し、残留農薬の分析に適している。本研究で実証されたように、この方法論の成功は、小麦中のイミダクロプリドの食品安全性評価におけるその使用の可能性を示しています。プロトコルの重要なステップには、無水MgSO4、NaCl、およびGCBの添加が含まれます。無水MgSO4とNaClを添加して試料溶液から水分を除去し、GCBを添加して試料溶液から色素を除去します。この研究で使用される抽出方法は、十分に大きい(10 g)サンプル量の要件によって制限されているため、小さなサンプルサイズの評価にはあまり適していません。
コムギの根および葉におけるイミダクロプリドの存在は、コムギがイミダクロプリドを急速に吸収および移動できることを示している。植物における有機化合物の濃縮と輸送は、N-オクタノールと平衡下の水相27の有機化合物の平衡濃度の比であるKow値と密接に関連しています。それらのlog Kow値によると、有機汚染物質は疎水性有機汚染物質、親水性有機汚染物質、および適度に親水性有機汚染物質に分けることができます。疎水性有機汚染物質(log Kow > 3)は根の表面に強く吸着され、上向きに移動しにくい。一方、親水性有機汚染物質(log Kow < 0.5)は、根に吸収されにくく、植物の細胞膜を通過しにくい。水性有機汚染物質(log Kow = 0.53)は、植物に容易に吸収され、濃縮され、そして移動される。イミダクロプリドの対数Kow値(0.57)は、それが適度に親水性の有機物であり、植物によって容易に吸収され、濃縮され、そして移動されることを示している。
植物の異なる組織は、同じ環境下で時間の経過とともに異なる農薬を吸収し輸送する能力が異なる28。本研究では、イミダクロプリドの分布がコムギ植物の異なる部分で異なることを見出した。具体的には、この研究では、小麦の根と葉の間でイミダクロプリドの吸収に大きな違いが検出されました。コムギの根は、イミダクロプリドを吸収して移動させる強い能力を有し、環境濃度の数倍の濃度でイミダクロプリドを蓄積することができ、それによって環境中のイミダクロプリドをコムギ葉に移動することを可能にする。制御放出イミダクロプリドを適用した後のコムギ中のイミダクロプリドの分布に関するYuanら20の研究は、コムギの根におけるイミダクロプリドの蓄積が葉の5〜10 倍であり、これは本研究の結果と一致していることが明らかになった。
本研究は、作物中のイミダクロプリドの残留農薬の全体的な理解に貢献するが、いくつかの限界がある。例えば、水耕栽培条件下で栽培されたコムギのみを本研究の試験植物として選択した。したがって、土壌や水中で生育する野菜や果樹などの植物における農薬の吸収・移動・分布のメカニズムについては、今後の研究が期待されます。さらなる研究では、さまざまな濃度のイミダクロプリドとさまざまな植物を研究して、植物におけるイミダクロプリドの吸収、輸送、および蓄積をより詳細に調査し、 イミダクロプリドによってもたらされる環境リスク。
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Disclosures
著者は、利益相反がないことを宣言します。すべての著者が原稿を読み、承認しました。この研究は以前に発表されておらず、他の査読付きジャーナルでも検討されていません。
Acknowledgments
この研究は、中国国家自然科学基金会(第42277039号)の支援を受けました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | 01-06-1995 | Suitable for HPLC, gradient grade, >99.9% |
| Analytical balance | Sartorius Lab Instruments Co.Ltd. | GL124-1SCN | |
| Artificial climate incubator | Shanghai Badian Instrument Equipment Co. Ltd. | HK320 | |
| Centrifuge | Eppendorf China Co. Ltd. | Centrifuge5804 | |
| Disposable syringe | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | Z116866 | Capacity 5 mL, graduated 0.2 mL, non-sterile |
| Formic acid | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | Y0001970 | European pharmacopoeia reference standard |
| Graphitized carbon black (GCB) | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | V900058 | 45 μm |
| H2O2 | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | 31642 | 30% (w/w) |
| Hoagland’s Basal Salt Mixture | Shanghai Yu Bo Biotech Co. Ltd. | NS1011 | Anhydrous, reagent grade |
| Hydroponic equipment | Jiangsu Rongcheng Agricultural Science and Technology Development Co.Ltd. | SDZ04BD | |
| Hypersil BDS C18 column | Thermo Fisher Scientific (China) Co. Ltd. | 28103-102130 | |
| Imidacloprid | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | Y0002028 | European pharmacopoeia reference standard |
| MgSO4 | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | 208094 | Anhydrous, reagent grade, >97% |
| NaCl | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | S9888 | Reagent grade, 99% |
| pH meter | Shanghai Thunder Magnetic Instrument Factory | PHSJ-3F | |
| Phytotron box | Harbin Donglian Electronic Technology Co. Ltd. | HPG-280B | |
| Pipettes | Eppendorf China Co. Ltd. | Research plus | |
| Syringe filter | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | SLGV033N | Nylon, 0.22 µm pore size, 33 mm, non-sterile |
| Ultra performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry | Thermo Fisher Scientific (China) Co. Ltd. | UltiMate 3000 | |
| TSQ Quantum Access MAX | |||
| Vortex mixer | Shanghai Yetuo Technology Co. Ltd. | Vortex-2 | |
| Wheat seed | LuKe seed industry | Jimai 20 |
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