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खरगोशों में इस्केमिया और रीपरफ्यूजन चोट का मॉडल

Published: November 3, 2023 doi: 10.3791/64752
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1
1Department of Cardiac Surgery, Boston Children’s Hospital, Harvard Medical School
* These authors contributed equally

Summary

वर्तमान अध्ययन जीवित रहने के मामलों के लिए बाएं मिनी-थोरैकोटॉमी या गैर-जीवित मामलों के लिए एक मिडलाइन स्टर्नोटॉमी का उपयोग करके खरगोशों में तीव्र क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया और रीपरफ्यूजन चोट के एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पशु मॉडल को प्रदर्शित करता है।

Abstract

प्रोटोकॉल यहाँ गैर-अस्तित्व और अस्तित्व प्रयोगों के लिए खरगोश में स्वस्थानी तीव्र क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया में प्रेरित करने के लिए एक सरल, अत्यधिक प्रतिकृति पद्धति प्रदान करता है। न्यूजीलैंड सफेद वयस्क खरगोश को एट्रोपिन, एसेप्रोमाज़िन, ब्यूटोरानोल और आइसोफ्लुरेन के साथ बेहोश किया जाता है। जानवर को इंटुबैट किया जाता है और यांत्रिक वेंटिलेशन पर रखा जाता है। दवाओं के जलसेक के लिए सीमांत कान की नस में एक अंतःशिरा कैथेटर डाला जाता है। जानवर को हेपरिन, लिडोकेन और लैक्टेटेड रिंगर के घोल के साथ पूर्व-औषधीय किया जाता है। रक्तचाप की निगरानी के लिए धमनी लाइन का उपयोग प्राप्त करने के लिए एक कैरोटिड कट-डाउन किया जाता है। चुनिंदा शारीरिक और यांत्रिक मापदंडों की निगरानी की जाती है और निरंतर वास्तविक समय विश्लेषण द्वारा दर्ज किया जाता है।

जानवर बेहोश और पूरी तरह से संवेदनाहारी के साथ, या तो एक चौथा इंटरकोस्टल स्पेस छोटा बाएं थोरैकोटॉमी (अस्तित्व) या मिडलाइन स्टर्नोटॉमी (गैर-उत्तरजीविता) किया जाता है। पेरीकार्डियम खोला जाता है, और बाएं पूर्वकाल अवरोही (एलएडी) धमनी स्थित होती है।

एक पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी को एलएडी धमनी की दूसरी या तीसरी विकर्ण शाखा के आसपास पारित किया जाता है, और पॉलीप्रोपाइलीन फिलामेंट को एक छोटे विनाइल ट्यूब के माध्यम से पिरोया जाता है, जिससे एक जाल बनता है। पशु क्षेत्रीय ischemia के 30 मिनट के अधीन है, जाल कस द्वारा लाड occluding द्वारा हासिल की है. एपिकार्डियम के क्षेत्रीय सायनोसिस द्वारा मायोकार्डियल इस्किमिया की पुष्टि नेत्रहीन रूप से की जाती है। क्षेत्रीय इस्किमिया के बाद, संयुक्ताक्षर को ढीला किया जाता है, और हृदय को फिर से छिड़कने की अनुमति दी जाती है।

अस्तित्व और गैर-उत्तरजीविता प्रयोगों दोनों के लिए, मायोकार्डियल फ़ंक्शन का मूल्यांकन भिन्नात्मक शॉर्टनिंग के इकोकार्डियोग्राफी (ईसीएचओ) माप के माध्यम से किया जा सकता है। गैर-उत्तरजीविता अध्ययनों के लिए, इस्केमिक क्षेत्र के भीतर प्रत्यारोपित तीन डिजिटल पीजोइलेक्ट्रिक अल्ट्रासोनिक जांच का उपयोग करके एकत्र किए गए सोनोमाइक्रोमेट्री से डेटा और बाएं वेंट्रिकल विकसित दबाव (एलवीडीपी) को एपिक रूप से डाले गए बाएं वेंट्रिकल (एलवी) कैथेटर का उपयोग करके क्रमशः क्षेत्रीय और वैश्विक मायोकार्डियल फ़ंक्शन का मूल्यांकन करने के लिए लगातार प्राप्त किया जा सकता है।

उत्तरजीविता अध्ययन के लिए, चीरा बंद कर दिया जाता है, फुफ्फुस वायु निकासी के लिए एक बाईं सुई थोरैसेंटेसिस किया जाता है, और पश्चात दर्द नियंत्रण प्राप्त किया जाता है।

Introduction

हृदय रोग दुनिया में मृत्यु का प्रमुख कारण हैं औरहर साल 18 मिलियन से अधिक मौतों में योगदान करते हैं। तीव्र रोधगलन (एमआई) एक सामान्य चिकित्सा आपातकाल है जो तब विकसित होता है जब रक्त का थक्का या एथेरोमेटस पट्टिका का एक टुकड़ा कोरोनरी धमनी के रक्त प्रवाह को अवरुद्ध करता है। यह उस क्षेत्र में क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया का कारण बनता है जो धमनी को सुगंधित करता है।

वर्तमान अध्ययन एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है जो गैर-अस्तित्व और अस्तित्व प्रयोगों के लिए खरगोश मॉडल में स्वस्थानी तीव्र क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया बनाने के लिए एक सरल और विश्वसनीय पद्धति का उपयोग करता है। इस पद्धति का प्रारंभिक लक्ष्य मायोकार्डियल नेक्रोसिस को संशोधित करने और इस्केमिक घटना के बाद पोस्ट-इस्केमिक हृदय समारोह को बढ़ाने पर माइटोकॉन्ड्रियल प्रत्यारोपण के प्रभावों का मूल्यांकन करना था। पिछले शोध ने माइटोकॉन्ड्रियल परिवर्तनों की घटना और इस्किमिया की शुरुआत और ऑक्सीजन की आपूर्ति में कमी के बाद उच्च ऊर्जा फॉस्फेट के स्तर में तेजी से गिरावट का प्रदर्शन किया है, जिसके परिणामस्वरूप हृदय ऊर्जा भंडार में भारी कमी आईहै 4. जांचकर्ताओं ने पोस्ट-इस्केमिक फ़ंक्शन में सुधार करने और औषधीय हस्तक्षेप और / या प्रक्रियात्मक तकनीकों का उपयोग करके मायोकार्डियल ऊतक परिगलन को कम करने का प्रयास किया है, लेकिन ये तकनीक सीमित कार्डियोप्रोटेक्शन प्रदान करती हैं और माइटोकॉन्ड्रियल क्षति और शिथिलता 5,6,7 पर न्यूनतम प्रभाव डालती हैं। हमारी टीम और अन्य लोगों ने पहले दिखाया है कि माइटोकॉन्ड्रियल क्षति मुख्य रूप से इस्किमिया के दौरान होती है और सिकुड़ा हुआ वसूली को बढ़ाया जा सकता है और रोधगलितांश का आकार 8,9,10 के दौरान माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन समारोह के संरक्षण के साथ कम हो गया है। इस प्रकार, हमने अनुमान लगाया कि इस्किमिया से अप्रभावित ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रियल प्रत्यारोपण से पहले इस्किमिया के क्षेत्र में पुनरावृत्ति मायोकार्डियल परिगलन को कम करने और मायोकार्डियल फ़ंक्शन को बढ़ाने के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण प्रदान करेगा। इसमें, हम इस सिद्धांत का परीक्षण करने के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल और हमारे प्रारंभिक अध्ययन विश्लेषण से प्राप्त प्रतिनिधि परिणामों का विस्तार करते हैं।

इसके अलावा, कई जांचकर्ताओं ने मायोकार्डियल इस्किमिया-रिपरफ्यूजन चोट के प्रभाव को परिभाषित करने और उचित चिकित्सीय हस्तक्षेप स्थापित करने के लिए अभिन्न अंग अन्य विषयों पर ध्यान केंद्रित किया है। अनुसंधान का ऐसा ही एक क्षेत्र पूर्व शर्त का है। मायोकार्डियल इस्केमिक प्रीकंडीशनिंग एक कार्डियोप्रोटेक्टिव तंत्र है जो संक्षिप्त इस्केमिक तनाव द्वारा सक्रिय होता है जिसके परिणामस्वरूप लंबे समय तक इस्किमिया के बाद के एपिसोड के दौरान कार्डियक सेल नेक्रोसिस की दर में कमी आती है। इन तंत्रों को हाइपोक्सिया या कोरोनरी रोड़ा द्वारा सक्रिय किया जा सकता है। मंडेल एट अल हाइपोक्सिक-hyperoxic शर्त नाइट्रिक ऑक्साइड चयापचयों के संतुलन को बनाए रखने में मदद की, एंडोटिलिन -1 हाइपरप्रोडक्शन कम, और समर्थित अंग संरक्षण11. इसके अलावा, रिमोट इस्केमिक प्रीकंडीशनिंग की अवधारणा, एक घटना जिससे एकल-अंग पूर्व शर्त प्रणालीगत सुरक्षा प्रदान करती है, का पता लगाया गया है। अली एट अल पाया कि, वैकल्पिक खुले पेट महाधमनी धमनीविस्फार की मरम्मत के दौर से गुजर रोगियों में, रिमोट पूर्व शर्त, एक उत्तेजना के रूप में सेवा करने के लिए आम इलियाक धमनी intermittently पार clamping द्वारा प्रदर्शन किया, पश्चात रोधगलन, और गुर्दे की हानि12.

खरगोश मॉडल अन्य प्रजातियों के साथ मॉडल पर संभावित लाभ प्रदान करते हैं और दशकों से कई अलग-अलग परिदृश्यों में उपयोग किए जाते हैं, जिसमें अतालता, वैश्विक और क्षेत्रीय इस्केमिक मॉडल और हृदय संकुचन अनुसंधान शामिल हैं, दूसरों के बीच13,14,15। हालांकि खरगोश दिल एक कुत्ते या सुअर की तुलना में छोटा है, यह आसानी से एक बहुत कम लागत13 पर शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं प्रदर्शन करने के लिए काफी बड़ा है. खरगोश के दिल का उपयोग अक्सर किया जाता है क्योंकि यह मानव हृदय के समानांतर होता है; दरअसल, यह एक समान चयापचय दर है, β-मायोसिन भारी श्रृंखला व्यक्त करता है, औरमहत्वपूर्ण मायोकार्डियल xanthine oxidase16 का अभाव है। क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया को प्रेरित करने के लिए वर्णित तकनीक सरल, दोहराने योग्य और लागत प्रभावी है। यह विधि गैर-अस्तित्व और उत्तरजीविता दोनों मामलों के लिए अनुमति देती है, क्योंकि वैश्विक इस्किमिया के बजाय केवल क्षेत्रीय इस्किमिया प्रेरित होता है, और आवश्यक सामग्री गैर-विशिष्ट होती है। दो अलग-अलग सर्जिकल दृष्टिकोण (यानी, स्टर्नोटॉमी और मिनी-थोरैकोटॉमी) का उपयोग किया जा सकता है, इस प्रकार ऑपरेटर और प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल को अध्ययन डिजाइन के संदर्भ में अधिक स्वतंत्रता प्रदान की जा सकती है। इसके अतिरिक्त, प्रक्रिया को कार्डियोपल्मोनरी बाईपास के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है। इस संदर्भ में, कोरोनरी धमनी बाईपास ग्राफ्टिंग के लिए न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण बहु-पोत revascularizaiton17,18 की आवश्यकता वाले रोगियों के लिए मूल्यवान विकल्प बन गए हैं। इस मॉडल का उपयोग इन दृष्टिकोणों के बीच अंतर का अध्ययन करने और सर्जिकल प्रशिक्षुओं के लिए पशु-आधारित शिक्षण उपकरण प्रदान करने के लिए किया जा सकता है। इसके अतिरिक्त, इस मॉडल का उपयोग करके कार्डियक कैथीटेराइजेशन करना शारीरिक अनुसंधान और / या सर्जिकल प्रशिक्षण के लिए उपयोगी हो सकता है।

हमारा मॉडल उन अनुप्रयोगों के लिए एक पद्धति प्रदान करता है जिसमें क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया को प्रेरित करना और बाद में रोधगलितांश आकार, मायोकार्डियल फ़ंक्शन और सेलुलर परिवर्तनों को मापना महत्वपूर्ण है। इस प्रोटोकॉल के साथ, हम सेलुलर फ़ंक्शन और इस्किमिया के अनुकूलन और ऑर्गेनेल, ऑक्सीजन की खपत, उच्च-ऊर्जा फॉस्फेट संश्लेषण, और साइटोकिन मध्यस्थों और प्रोटिओमिक मार्गों के प्रेरण की जांच करके प्रस्तावित चिकित्सीय हस्तक्षेप (यानी, माइटोकॉन्ड्रियल प्रत्यारोपण) के कई मार्करों का मूल्यांकन करने में सक्षम हैं। ये परिणाम मायोकार्डियल एनर्जेटिक्स, सेल व्यवहार्यता और कार्डियक फ़ंक्शन को संरक्षित करने में महत्वपूर्ण हैं और इस्किमिया-रिपरफ्यूजन चोट के बाद कार्डियोप्रोटेक्टिव तकनीकों के उद्देश्य मूल्यांकन की अनुमति देते हैं। इस मॉडल का उपयोग पोस्ट-इस्केमिक मायोकार्डियल पैथोलॉजी और रिकवरी के क्षेत्र में समान जैविक मार्गों और विकल्पों का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।

इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य गैर-अस्तित्व और उत्तरजीविता प्रयोगों के लिए खरगोश में स्वस्थानी तीव्र क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया में प्रेरित करने के लिए एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पद्धति प्रदान करना है। यह मॉडल उच्च अस्तित्व, कम इंट्राऑपरेटिव मृत्यु दर, और न्यूनतम रुग्णता19 के साथ एक पद्धति प्रदान करता है। तीव्र क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया के लिए अन्य मॉडलों को रेडियोलेबल्ड सामग्री, कंट्रास्ट एजेंट, चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग, या कंप्यूटर सिमुलेशन20,21,22का उपयोग करके वर्णित किया गया है। हमारा प्रोटोकॉल एक विश्वसनीय और सरल पद्धति प्रदान करता है जो लागत प्रभावी, लगातार प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और इसकी कम तकनीकी मांग है और इस प्रकार, सर्जिकल विशेषज्ञता के बिना जांचकर्ताओं द्वारा किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल या तो एक बाएं मिनी-थोरैकोटॉमी या एक मिडलाइन स्टर्नोटॉमी का उपयोग करके एक गैर-अस्तित्व मॉडल का उपयोग करके एक उत्तरजीविता परियोजना को समायोजित करता है।

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Protocol

यह जांच जानवरों की देखभाल और उपयोग पर राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित की गई थी और बोस्टन चिल्ड्रन हॉस्पिटल की पशु देखभाल और उपयोग समिति (प्रोटोकॉल 20-08-4247R) द्वारा अनुमोदित की गई थी। सभी जानवरों को प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड के अनुपालन में मानवीय देखभाल प्राप्त हुई।

1. पशु प्रजातियां, संवेदनाहारी, और एनाल्जेसिक एजेंट

  1. पशु प्रजातियां: प्रयोगात्मक अध्ययन के लिए न्यूजीलैंड सफेद खरगोश (जंगली प्रकार का तनाव; महिला सेक्स; यौन परिपक्व 15-20 सप्ताह पुराना; 3-4 किलो शरीर का वजन) का उपयोग करें।
  2. संवेदनाहारी और एनाल्जेसिक एजेंट:
    1. 0.01 मिलीग्राम/किग्रा इंट्रामस्क्युलर (आईएम) की खुराक पर एट्रोपिन का उपयोग करें
    2. प्रारंभिक बेहोश करने की क्रिया के लिए 0.5 मिलीग्राम/किग्रा आईएम की खुराक पर एसेप्रोमाज़िन का उपयोग करें और पूर्ण संवेदनाहारी के लिए 0.5 मिलीग्राम/किग्रा अंतःशिरा (IV) का उपयोग करें।
    3. 0.5 मिलीग्राम / किग्रा आईएम की खुराक पर ब्यूटोरानोल का उपयोग करें।
    4. प्रेरण के लिए 3% पर एक सटीक वाष्पीकृत प्रणाली चेहरे मुखौटा के माध्यम से isoflurane का उपयोग करें, 1% -2% पर इंटुबैषेण, 2 एल / मिनट पर 100% पर ऑक्सीजन (O2), और रखरखाव के लिए 1% पर सामान्य संज्ञाहरण के बाद।
    5. किग्रा आईएम की खुराक पर मेडिटोमिडाइन का उपयोग करें।
    6. किग्रा IV की खुराक पर केटामाइन का उपयोग करें।
    7. थोरैकोटॉमी साइट पर एक बुपीवाकाइन इंटरकोस्टल ब्लॉक का उपयोग 3 मिलीग्राम / किग्रा आईएम से अधिक नहीं की खुराक पर करें।
    8. किग्रा IV की खुराक पर 1% लिडोकेन का उपयोग करें।
    9. 72 घंटे के लिए 1-4 μg/kg fentanyl ट्रांसडर्मल पैच का उपयोग करें।

2. प्रक्रियात्मक कदम (चित्रा 1)

  1. एट्रोपिन, एसेप्रोमाज़िन और ब्यूटोनोरल के एकल संयुक्त आईएम इंजेक्शन के साथ न्यूजीलैंड सफेद वयस्क खरगोशों को बेहोश करें। एक सटीक vaporized प्रणाली चेहरा मुखौटा के माध्यम से 3% isoflurane के साथ पशु प्रेरित.
  2. अंधे एंडोट्रैचियल इंटुबैषेण से पहले तैयारी (यानी, ग्लोटिस के दृश्य के बिना)
    1. लैरींगोस्पास्म को रोकने के लिए 1% लिडोकेन के साथ स्वरयंत्र स्प्रे करें।
    2. दांतों से अनुमानित कैरिना तक खरगोश के बाहर एंडोट्रैचियल ट्यूब (ईटीटी) की लंबाई को पूर्व-मापें, और खरगोश को गर्दन के साथ एक स्टर्नल रिकम्बेंसी स्थिति में रखें।
  3. एक कफ बाल चिकित्सा आकार (3-0 या 3-5 भीतरी व्यास) ईटीटी के साथ पशु को 1% -2% पर निरंतर साँस संवेदनाहारी और 2 एल / मिनट पर 100% पर ओ2 के साथ इंटुबैट करें।
    1. ईटीटी को मुंह में डालें, और इसे टोरस के पीछे ग्रसनी में निर्देशित करें।
    2. ईटीटी को तब तक आगे बढ़ाएं जब तक कि ट्यूब की नोक ग्लोटिस से संपर्क न कर ले या सांस की आवाज खो जाए, यह दर्शाता है कि ट्यूब टिप ग्लोटिक ओपनिंग से गुजर चुकी है।
    3. सांस की आवाज़ वापस आने तक ट्यूब को थोड़ा वापस ले लें, और फिर फिर से आगे बढ़ें, और ट्यूब को जगह में सुरक्षित करें।
  4. यांत्रिक समर्थन के साथ पशु को वेंटिलेट करें (ज्वारीय मात्रा: 10 एमएल / किग्रा, प्रेरित ओ 2 का अंश: 40%, श्वसन दर: 30-40 सांस / मिनट, सकारात्मक अंत-श्वसन दबाव: 5-10 सीएमएच2ओ)।
    1. हाइपरॉक्सिया को रोकने के लिए पल्स ऑक्सीमेट्री द्वारा मापा गया 92% से अधिक ओ2 संतृप्ति प्राप्त करने के लिए FiO2 को सहन के रूप में समायोजित करें, जो एक प्रणालीगत भड़काऊ प्रतिक्रिया को भड़का सकता है।
  5. एक शारीरिक परीक्षा (यानी, गुदाभ्रंश), नैदानिक संकेतों (यानी, एंडोट्रैचियल ट्यूब के अंत में संक्षेपण का अवलोकन), और उद्देश्य उपायों (यानी, अंत-ज्वारीय कार्बन डाइऑक्साइड) के साथ ईटीटी के उचित स्थान को सत्यापित करें।
  6. लगभग 10 मिनट के बाद, एक साथ संवेदनाहारी और एनाल्जेसिक प्रभाव प्रदान करने के लिए खरगोश को medetomidine के एक आईएम इंजेक्शन वितरित.
  7. शल्य चिकित्सा प्रक्रिया की अवधि के लिए 1% isoflurane के साथ सामान्य संज्ञाहरण बनाए रखें.
  8. सीमांत कान नस में एक 22 जी चतुर्थ कैथेटर डालें, और परिधीय चतुर्थ का उपयोग प्राप्त करने के लिए टेप के साथ सुरक्षित.
    नोट: ऊरु नस शिरापरक पहुंच के एक वैकल्पिक साइट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
    1. एसेप्रोमाज़िन IV और केटामाइन IV के साथ जानवर को पूरी तरह से एनेस्थेटाइज़ करें।
    2. चीरा लगाने से पहले, 3 mg/kg IV की खुराक पर 1,000 U/mL हेपरिन इंजेक्ट करें।
      1. शुरू में 3 मिलीग्राम/किग्रा की खुराक पर 1,000 यू/एमएल हेपरिन का प्रशासन करें, और वर्तमान सर्जिकल प्रोटोकॉल को ध्यान में रखते हुए, >400 एस के सक्रिय थक्के समय को बनाए रखने के लिए प्रयोग के अंत तक प्रति घंटा फिर से खुराक दें।
    3. सर्जरी के दौरान वेंट्रिकुलर फाइब्रिलेशन होने पर आवश्यकतानुसार 1% लिडोकेन IV और/या एपिकार्डियल एसिंक्रोनाइज्ड डिफिब्रिलेशन का प्रशासन करें। वेंट्रिकुलर फाइब्रिलेशन आमतौर पर लिडोकेन की एक या दो खुराक के साथ बंद हो जाता है।
    4. परफ्यूज लैक्टेट रिंगर का घोल लगातार 10 एमएल/किग्रा/घंटा पर।
      नोट: प्रशासित तरल पदार्थ की छोटी मात्रा और कम ऑपरेटिव समय को देखते हुए, इस काम में जीवित रहने के अध्ययन में जानवरों को एक्सट्यूबेशन से पहले या वसूली अवधि के दौरान मूत्रवर्धक की आवश्यकता नहीं थी। यदि जानवर एक बिगड़ती फुफ्फुसीय स्थिति विकसित करता है (यानी, वेंटिलेटर सेटिंग्स में वृद्धि, गुदाभ्रंश पर फुफ्फुसीय एडिमा के सबूत, आदि), तो मूत्रवर्धक की सलाह दी जाती है।
  9. एक मन्या कटौती प्रदर्शन करते हैं, और धमनी रक्तचाप (बीपी) के इंट्रा-ऑपरेटिव निगरानी की सुविधा के लिए एक 4 या 5 फ्रेंच धमनी लाइन रखें।
    नोट: ऊरु धमनी धमनी का उपयोग धमनी पहुंच के वैकल्पिक स्थल के रूप में किया जा सकता है।
  10. निरंतर वास्तविक समय विश्लेषण द्वारा सभी शारीरिक और यांत्रिक चर की निगरानी और रिकॉर्ड करें।
    1. मन्या धमनी लाइन के साथ धमनी बीपी की निगरानी करें, और एक मुंडा पंजा पर रखा सेंसर के माध्यम से पल्स ऑक्सीमेट्री का उपयोग करके ओ2 संतृप्ति रिकॉर्ड करें।
    2. तीन अंग लीड के साथ एक इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी) के साथ मॉनिटर करें: I, II, और III, और तीन गणना संवर्धित लीड: aVL, aVR, और aVF।
      1. पूर्व इस्कीमिक आधार रेखा पर ईसीजी अनुरेखण रिकॉर्ड, ischemia के दौरान, reperfusion के दौरान, और क्रमिक रूप से दिनों के दौरान 7-28 वसूली के (यदि एक अस्तित्व अध्ययन प्रदर्शन).
    3. बीपी और हृदय गति (एचआर) की निरंतर निगरानी द्वारा बेहोश करने की क्रिया के स्तर की निगरानी करें।
    4. एक मलाशय जांच के साथ तापमान की निगरानी करें।
    5. जीवित रहने और गैर-अस्तित्व दोनों मामलों में वांछित समय बिंदुओं पर मायोकार्डियल फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए बाएं पैरास्टर्नल और एपिकल विचारों से 2 डी ईसीएचओ का उपयोग करें।
      1. बाएं वेंट्रिकल एंड-डायस्टोलिक दूरी (LVEDD) और बाएं वेंट्रिकल एंड-सिस्टोलिक दूरी (LVESD) को मापकर और निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके भिन्नात्मक शॉर्टिंग (FS) का उपयोग करके मायोकार्डियल फ़ंक्शन का आकलन करें:
        एफएस = (एलवीईडीडी − एलवीईएसडी)/एलवीडीडी × 100
  11. सर्जरी के दौरान, एक स्थिर कोर शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए एक परिसंचारी गर्म पानी के कंबल पर पशु रखें.
  12. जानवर को बाँझ अंदाज में तैयार और लपेटें:
    1. सर्जिकल साइट को शेव करें, और बीटाडाइन और 70% आइसोप्रोपिल अल्कोहल के साथ तैयार करें, प्रत्येक को तीन प्रतियों में लागू किया जाता है। बाँझ धुंध पैड के साथ क्षेत्र को सूखा थपथपाएं, और बाँझ तौलिये के साथ पूरे जानवर को लपेटें।
  13. बाएं मिनी-थोरैकोटॉमी (उत्तरजीविता अध्ययन)
    1. बुपीवाकेन आईएम के साथ पूर्व निर्धारित थोरैकोटॉमी साइट पर एक इंटरकोस्टल ब्लॉक करें।
    2. चीरा से पहले auricular नस के माध्यम से 1% lidocaine चतुर्थ प्रशासन.
    3. न्यूरोमस्कुलर बंडल से बचने के लिए पांचवें रिब के ऊपरी हिस्से के साथ चौथे इंटरकोस्टल स्पेस के माध्यम से एक बाएं मिनी-थोरैकोटॉमी करें, जो प्रत्येक रिब के अंडरसर्फेस के समानांतर स्थित है।
      1. दिल की anterolateral सतह (यानी, लाड विकर्ण शाखाओं के शारीरिक स्थान) का सबसे अच्छा दृश्य के लिए एक anterolateral thoracotomy प्रदर्शन.
      2. एक तकिया या बीन बैग का उपयोग करके खरगोश को बाईं ओर लगभग 30 ° ऊंचा रखें।
      3. खरगोश के ipsilateral पैर को उसके सिर के ऊपर सुरक्षित करें ताकि ऑपरेटिव क्षेत्र और रिब रिक्त स्थान दोनों के लिए जगह बनाई जा सके।
      4. पल्पेट और पसलियों, उरोस्थि और स्कैपुला सहित बोनी स्थलों की रूपरेखा तैयार करें, एक महसूस-इत्तला दे दी गई मार्किंग पेन के साथ। #10 ब्लेड का उपयोग करके पांचवीं पसली के ऊपर की त्वचा को चीरें। सुनिश्चित करें कि चीरा पसली के समानांतर रहता है।
      5. पेक्टोरलिस प्रमुख मांसपेशी और सेराटस पूर्वकाल मांसपेशी को विभाजित करने के लिए इलेक्ट्रोकॉटरी का उपयोग करें। न्यूरोवास्कुलर बंडल को संरक्षित करने के लिए इलेक्ट्रोक्यूटरी के साथ पांचवीं पसली के ठीक ऊपर इंटरकोस्टल मांसपेशियों को विभाजित करें।
      6. सावधानी से तेज या कुंद विच्छेदन के साथ चौथे इंटरकोस्टल अंतरिक्ष के माध्यम से फुफ्फुस अंतरिक्ष में प्रवेश करें। प्रारंभिक फुफ्फुस चीरा तेज या कुंद विच्छेदन के साथ दोनों दिशाओं में रिब के समानांतर विस्तार जब तक एक रिब स्प्रेडर या स्टर्नल रिट्रैक्टर डाला जा सकता है.
    4. रिब स्पेस के भीतर एक रिब स्प्रेडर या स्टर्नल रिट्रैक्टर रखें, और दिल और पेरिकार्डियल थैली के पर्याप्त दृश्य प्रदान करने के लिए चौड़ा करें। DeBakey संदंश के साथ pericardium उठाओ, और Metzenbaum कैंची के साथ pericardium खुला.
    5. लाड धमनी अलगाव
      1. एक शंकु सुई पर एक पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी (3-0) के साथ लाड धमनी की दूसरी या तीसरी विकर्ण शाखा घेरें। सुई निकालें, और एक जाल बनाने के लिए एक छोटे विनाइल ट्यूब के माध्यम से पॉलीप्रोपाइलीन फिलामेंट के दोनों सिरों को थ्रेड करें।
      2. कोरोनरी को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए स्नेयर और कोरोनरी धमनी के बीच एक प्लेजेट रखें और/या बंधाव के साथ वासोस्पास्म पैदा करें।
        1. DeBakey संदंश का प्रयोग, एक आयताकार PTFE प्रतिज्ञा (लगभग 7 मिमी x 3 मिमी) महसूस उठाओ. दो पॉलीप्रोपाइलीन फिलामेंट्स के बीच प्लेजेट रखें ताकि यह पृथक एलएडी धमनी और विनाइल ट्यूब के बीच सैंडविच हो जब जाल कड़ा हो जाए।
  14. मिडलाइन स्टर्नोटॉमी (गैर-उत्तरजीविता अध्ययन)
    नोट: मिडलाइन स्टर्नोटॉमी दृष्टिकोण गैर-उत्तरजीविता मामलों के लिए आदर्श है, जिसके लिए एलवीडीपी और सोनोमाइक्रोमेट्री के साथ अधिक आक्रामक निगरानी का उपयोग किया जा सकता है।
    1. घुमावदार मेयो कैंची का उपयोग कर एक midline sternotomy प्रदर्शन. एक स्टर्नल रिट्रैक्टर रखें, और दिल और पेरिकार्डियल थैली के पर्याप्त दृश्य प्रदान करने के लिए इसे चौड़ा करें।
    2. DeBakey संदंश के साथ pericardium उठाओ, और Metzenbaum कैंची के साथ pericardium खुला.
    3. तीन पीजोइलेक्ट्रिक सोनोमिक्रोमेट्री क्रिस्टल रखना:
      1. एलवी के एपिकार्डियम पर तीन छोटे 1 मिमी कटौती करें, जिससे त्रिकोण के कोने बन जाएं। एपिकार्डियम कट के अंदर पीजोइलेक्ट्रिक सोनोमिक्रोमेट्री क्रिस्टल रखें।
      2. 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन यू-सिलाई के साथ तारों को हृदय की सतह पर सुरक्षित करें। सोनोमाइक्रोमेट्री का उपयोग करके रिकॉर्डिंग करते समय, दो से तीन दिल की धड़कन पर सटीक रिकॉर्डिंग की अनुमति देने के लिए यांत्रिक वेंटिलेशन को रोकें।
        नोट: यदि हृदय फाइब्रिलेट्स, 1% लिडोकेन प्रभावी नहीं है, और एपिकार्डियल डिफिब्रिलेशन की आवश्यकता है, तो सोनोमिक्रोमीटर बंद करें, और दोनों को विद्युत इनपुट से बचाने के लिए इसे डेटा अधिग्रहण प्रणाली से डिस्कनेक्ट करें।
    4. एलएडी धमनी अलगाव:
      1. एक शंकु सुई पर एक पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी (3-0) के साथ लाड धमनी की दूसरी या तीसरी विकर्ण शाखा घेरें।
      2. सुई निकालें, और एक जाल बनाने के लिए एक छोटे विनाइल ट्यूब के माध्यम से पॉलीप्रोपाइलीन फिलामेंट के दोनों सिरों को थ्रेड करें।
      3. कोरोनरी धमनी को नुकसान पहुंचाने और/या बंधाव के साथ वासोस्पास्म पैदा करने से बचने के लिए जाल और कोरोनरी धमनी के बीच एक प्रतिज्ञा रखें।
      4. DeBakey संदंश का प्रयोग, एक आयताकार PTFE प्रतिज्ञा (लगभग 7 मिमी x 3 मिमी) महसूस उठाओ. दो पॉलीप्रोपाइलीन फिलामेंट्स के बीच प्लेजेट रखें ताकि यह पृथक एलएडी धमनी और विनाइल ट्यूब के बीच सैंडविच हो जब जाल कड़ा हो जाए।
    5. LVDP का मापन:
      1. एलवी के शीर्ष में 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन यू-सिलाई रखें। एलवी शीर्ष में 11 ब्लेड के साथ एक छोटा 1 मिमी चीरा बनाएं।
      2. LV लुमेन में एक 3 फ्रेंच बैलून कैथेटर डालें। कैथेटर को एलवी को 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन यू-सिलाई सिवनी से बांधकर सुरक्षित करें।
      3. LVDP रिकॉर्ड करने के लिए कैथेटर को मॉनिटर से जुड़े ट्रांसड्यूसर से कनेक्ट करें। डेटा अधिग्रहण प्रणाली (नीचे वर्णित) का उपयोग करके LVDP रिकॉर्ड करें। हवा में तीन-तरफा पानी निकलने की टोंटी खोलकर और मॉनिटर पर शून्य करके हेमोडायनामिक चर रिकॉर्ड करने के लिए कैथेटर को शून्य करें।
    6. डेटा अधिग्रहण प्रणाली
      1. उपयोग किए जा रहे कंप्यूटर/लैपटॉप पर डेटा अधिग्रहण प्रणाली ( सामग्री की तालिकादेखें) शुरू करें। मॉनिटर से तार को कंप्यूटर/लैपटॉप से कनेक्ट करें।
      2. डेटा अधिग्रहण प्रणाली पर चैनल 1 का चयन करें, और इसे LVDP नाम दें। मॉनिटर का उपयोग करके ट्रांसड्यूसर को शून्य करें।
        नोट: यदि बीपी और एचआर को डेटा अधिग्रहण प्रणाली से जोड़ा जा रहा है, तो उसी प्रक्रिया का पालन करें: तार को लैपटॉप से कनेक्ट करें, चैनल चुनें, और बीपी को मापने पर शून्य चुनें।
  15. पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी फिलामेंट्स पर खींचते हुए विनाइल ट्यूब पर नीचे दबाकर जाल को कसकर कोरोनरी धमनी को रोकें। मच्छर क्लैंप के साथ वांछित जकड़न बनाए रखें सीधे ट्यूब को जकड़ कर और इसे जगह में ठीक करें।
  16. एपिकार्डियम के क्षेत्रीय सायनोसिस द्वारा नेत्रहीन मायोकार्डियल इस्किमिया की पुष्टि करें। एसटी सेगमेंट और टी लहर परिवर्तन की उपस्थिति के साथ ईसीजी पर क्षेत्रीय इस्किमिया की भी पुष्टि की जा सकती है।
  17. दृश्य पुष्टि के बाद, संज्ञाहरण के तहत 30 मिनट के लिए क्षेत्रीय ischemia प्रेरित.
    1. क्षेत्रीय इस्किमिया के दौरान 0 मिनट, 10 मिनट, 20 मिनट और 30 मिनट में, अस्तित्व और गैर-अस्तित्व दोनों मामलों के लिए 2 डी ईसीएचओ द्वारा एफएस का आकलन करें।
    2. एलवीडीपी और सोनोमाइक्रोमेट्री का लगातार पूर्व-इस्किमिया समय, मायोकार्डियल इस्किमिया समय और गैर-उत्तरजीविता मामलों के लिए इस्केमिक समय के दौरान लगातार आकलन करें।
    3. यदि आवश्यक हो, तो जगह में छोड़ दिया पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी सिलाई के साथ धमनी को फिर से लिगेट करके जोखिम वाले क्षेत्र को चित्रित करें। महाधमनी को क्रॉस-क्लैंप करें, और कार्डियोपलेजिया सुई का उपयोग करके महाधमनी के माध्यम से मोनास्ट्रल ब्लू वर्णक 98% (पीबीएस में पतला 1: 5) इंजेक्ट करें। मायोकार्डियम के सुगंधित क्षेत्र नीले रंग के दाग देंगे, और जोखिम वाला क्षेत्र बेदाग रहेगा।
    4. एचआर, बीपी और ओ2 संतृप्ति की लगातार निगरानी और रिकॉर्ड करें।
    5. पशु 2 घंटे (गैर अस्तित्व) या 28 दिनों (अस्तित्व) के लिए ठीक करने के लिए अनुमति दें.
      नोट: ईसीजी reperfusion की पुष्टि करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हालांकि इस अध्ययन में किए गए प्रयोग में नहीं देखा गया है, हाइपोकैलिमिया अक्सर reperfusion के दौरान हो सकता है और पोटेशियम नियंत्रण या एक उपयुक्त जलसेक के साथ ठीक किया जा सकता है।
  18. प्रक्रिया का निष्कर्ष
    1. उत्तरजीविता के मामले
      1. उत्तरजीविता के मामलों में, जाल के लिए उपयोग किए जाने वाले 3-0 पॉलीप्रोपाइलीन धागे को ट्रिम करें, सिरों को एक साथ बांधें, और इसे जगह पर छोड़ दें। 3-0 पॉलीप्रोपाइलीन धागे द्वारा जोखिम वाले क्षेत्र और रोधगलितांश क्षेत्र की पहचान करें।
      2. प्रक्रिया पूरी होने के बाद, चीरा को तीन परतों में बंद करें।
        1. पसलियों के चारों ओर दो 2-0 पॉलीग्लैक्टिन 910 फिगर-ऑफ-आठ टांके बांधकर पहली परत को बंद करें।
        2. एक चल रहे फैशन में एक 3-0 polydioxanone सिवनी के साथ मांसपेशियों और चमड़े के नीचे परतों को बंद करें.
        3. एक 5-0 monofilament सिवनी का उपयोग कर एक चमड़े के नीचे फैशन में त्वचा बंद करें. जानवर द्वारा महसूस की गई जलन को कम करने के लिए एक दफन चल सिवनी का उपयोग करें।
      3. एक सुई थोरैसेंटेसिस प्रदर्शन द्वारा फुफ्फुस हवा को खाली करें।
      4. पश्चात दर्द प्रबंधन की सुविधा के लिए 72 घंटे के लिए एक fentanyl ट्रांसडर्मल पैच लागू करें।
      5. एफएस में रुझानों का आकलन करने के लिए 1 सप्ताह और 2 सप्ताह के समय बिंदुओं पर ट्रांसथोरासिक इकोकार्डियोग्राफी पोस्टऑपरेटिव रूप से करें।
      6. पूर्व निर्धारित वसूली अवधि के बाद, ऊपर के रूप में जानवर को बेहोश करना, इंटुबेट करना और एनेस्थेटाइज करना। एक औसत स्टर्नोटॉमी करें। पेरिकार्डियल थैली को बेनकाब करें और खोलें। दिल एन ब्लॉक को हटाकर गहरी संज्ञाहरण के तहत खरगोश को इच्छामृत्यु दें, जिससे जानवर को विलुप्त होने की अनुमति मिलती है।
    2. गैर-जीवित मामले
      1. प्रयोग के बाद और गहरी संज्ञाहरण का आश्वासन दिया, पूरी तरह से दिल बेनकाब, और जैव रासायनिक और ऊतक विश्लेषण के लिए यह एन ब्लॉक को हटा दें। जानवर exsanguination द्वारा समाप्त हो जाता है।

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Representative Results

प्रोटोकॉल (चित्रा 1) के बाद, एपिकार्डियम के सायनोसिस के प्रत्यक्ष दृश्य द्वारा मायोकार्डियल इस्किमिया की तुरंत पुष्टि की गई थी।

मानक ईसीजी (तीन अंग लीड: मैं, द्वितीय, और तृतीय, और तीन गणना संवर्धित लीड: aVL, aVR, और aVF) लगातार पूर्व ischemia, इस्किमिया के दौरान, और reperfusion (चित्रा 2) पर दर्ज किए गए थे. ईसीजी टैचीकार्डिया, अतालता (यानी, वेंट्रिकुलर फाइब्रिलेशन), चालन प्रणाली दोष (यानी, बंडल शाखा ब्लॉक), इन्फर्क्ट-संबंधित क्यू तरंगों का विकास, और एसटी खंड विचलन23 प्रदर्शित करता है।

क्षेत्रीय ischemia के दौरान, क्षेत्रीय hypokinesia सीधे सभी दिलों में पूर्वकाल दीवार के मध्य गुहा में नग्न आंखों के साथ मनाया गया था, लाड धमनी छिड़काव क्षेत्र है कि लाड के अस्थायी snaring के साथ प्रवाह के प्रतिबंध द्वारा ischemic बनाया गया था के साथ संगत. अस्तित्व और गैर-उत्तरजीविता दोनों मामलों में, 2 डी ईसीएचओ रीडिंग प्री-इस्किमिया के दौरान प्राप्त की गई थी, क्षेत्रीय इस्किमिया को प्रेरित करने से पहले, और प्रयोग के दौरान अलग-अलग समय बिंदुओं पर: 5 मिनट, 10 मिनट, 15 मिनट, 30 मिनट, 60 मिनट, और 120 मिनट। बाएं वेंट्रिकुलर एंड-डायस्टोलिक (LVEDD) और बाएं वेंट्रिकुलर एंड-सिस्टोलिक आयाम (LVESD) को क्रमशः अधिकतम और न्यूनतम LV परिधि पर 2D-निर्देशित M-मोड ECHO के साथ मापा गया था। मायोकार्डियल इस्केमिक ज़ोन में क्षेत्रीय एलवी दीवार सिकुड़न का मूल्यांकन एम-मोड का उपयोग करते हुए एलवी के लघु-अक्ष दृश्यों से किया गया था, जिसमें शाप रेखा जोखिम वाले क्षेत्र पर निर्भर थी। भिन्नात्मक शॉर्टनिंग (FS) की गणना निम्न सूत्र के साथ की गई थी: FS = (LVEDD − LVESD)/LVEDD × 10024. परिणामों से पता चला कि पूर्व-इस्केमिक समय (चित्रा 3) की तुलना में इस्केमिक समय और पोस्ट-इस्केमिक समय के दौरान भिन्नात्मक शॉर्टिंग कम हो गई

मायोकार्डियल चोट की सीमा को निर्धारित करने के लिए, रोधगलितांश आकार को ट्राइफिनाइल टेट्राज़ोलियम क्लोराइड (टीटीसी) (सिग्मा केमिकल कं, सेंट लुइस, एमओ) धुंधला के साथ जैव रासायनिक रूप से मापा जा सकता है। इस काम में, जोखिम वाले क्षेत्र को जगह में छोड़े गए प्रोलीन सिलाई को बांधकर शामिल धमनी के पुन: बंधाव द्वारा चित्रित किया गया था। महाधमनी को क्रॉस-क्लैंप किया गया था, और मोनास्ट्रल ब्लू वर्णक (पीबीएस में पतला 1: 5) को कार्डियोपलेजिया सुई का उपयोग करके महाधमनी के माध्यम से वितरित किया गया था। सुगंधित मायोकार्डियम के क्षेत्रों को नीले रंग से सना हुआ था, और धमनी के बंधाव के कारण जोखिम वाला क्षेत्र बेदाग रहा।

दिल बाएं वेंट्रिकल की लंबी धुरी में कटा हुआ था, शीर्ष से आधार तक, 1 सेमी मोटी अनुप्रस्थ वर्गों में, कांच की प्लेटों के बीच रखा गया था, और बुलडॉग क्लैंप के साथ संकुचित किया गया था। प्रत्येक खंड के प्रत्येक पक्ष के लिए जोखिम वाले क्षेत्र को एक स्पष्ट एसीटेट शीट पर पता लगाया गया था। दिल वर्गों 20 मिनट के लिए 38 डिग्री सेल्सियस पर फॉस्फेट बफर (पीएच 7.4) में 1% टीटीसी के साथ एक अंधेरे कंटेनर में ऊष्मायन किया गया. दिल वर्गों तो रोधगलितांश क्षेत्र के दृश्य को बढ़ाने के लिए अंतिम माप से पहले 24 घंटे के लिए एक 10% formaldehyde समाधान में संग्रहीत किया गया. वर्गों को कांच की प्लेटों के बीच रखा गया था और बुलडॉग क्लैंप के साथ संकुचित किया गया था। मायोकार्डियल नेक्रोसिस को मायोकार्डियल ऊतक पर एक सफेद क्षेत्र द्वारा प्रमाणित किया गया था, और ईंट-लाल क्षेत्रों ने व्यवहार्य ऊतक दिखाया। (चित्र 4) प्रत्येक खंड के प्रत्येक पक्ष के लिए जोखिम वाले क्षेत्रों के भीतर रोधगलन क्षेत्रों (सफेद) को स्पष्ट एसीटेट शीट पर पता लगाया गया था। प्लैनिमेट्री का उपयोग जोखिम वाले क्षेत्र और रोधगलितांश क्षेत्र को मापने के लिए किया गया था। जोखिम और रोधगलन क्षेत्र में क्षेत्र की मात्रा टुकड़ा मोटाई से planimetered क्षेत्रों गुणा द्वारा गणना की गई. रोधगलितांश मात्रा प्रत्येक दिल25 के लिए कुल LV मात्रा का एक प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था. एलवी वजन के जोखिम वाले क्षेत्र के अनुपात की गणना की गई थी, और रोधगलितांश आकार को जोखिम वाले क्षेत्र के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था। हमारे पिछले काम से पता चला है कि, वसूली के 2 घंटे और 28 दिनों के बाद, जोखिम वाले क्षेत्र (यानी, एलवी द्रव्यमान के प्रतिशत के रूप में) क्रमशः माइटोकॉन्ड्रियल और नियंत्रण समूहों दोनों के लिए लगभग 29% और 27% थे, हालांकि, वसूली के 2 घंटे और 28 दिनों के बाद, माइटोकॉन्ड्रियल दिलों में रोधगलितांश आकार (यानी, रोधगलितांश आकार / जोखिम में क्षेत्र) 9.8% और 7.9% था, क्रमशः, नियंत्रण दिल26 में 37% और 34% की तुलना में। इसके अतिरिक्त, हमारे पिछले प्रयोगों में, आंशिक छोटा और LVDP नियंत्रण समूह में क्रमशः 50% -60% और 70% -80% तक कम हो गए थे, बेसलाइन की तुलना में.

Figure 1
चित्र 1: प्रोटोकॉल आरेख। प्रोटोकॉल या तो अस्तित्व या गैर अस्तित्व मामलों के लिए प्रयोग की जरूरतों के आधार पर समायोजित किया जा सकता है. गैर-उत्तरजीविता मामलों को मिडलाइन स्टर्नोटॉमी का उपयोग करके अधिक आक्रामक सर्जिकल दृष्टिकोण के साथ किया जा सकता है, इस प्रकार सोनोमाइक्रोमेट्री क्रिस्टल, एपिकार्डियल इकोकार्डियोग्राफी (ईसीएचओ), और भिन्नात्मक शॉर्टिंग और एलवीडीपी के माप के लिए एक एलवी कैथेटर के उपयोग की अनुमति मिलती है। जीवित रहने के मामलों के लिए, जिसके लिए चीरा उपचार और दर्द प्रबंधन पर विचार किया जाना चाहिए, एक बाएं मिनी-थोरैकोटॉमी का प्रदर्शन किया जा सकता है, और 2 डी ईसीएचओ का उपयोग करके लंबी अध्ययन अवधि के दौरान मायोकार्डियल फ़ंक्शन का मूल्यांकन अलग-अलग समय बिंदुओं पर किया जा सकता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: प्रतिनिधि इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (अंग द्वितीय और गणना संवर्धित नेतृत्व aVL) क्षेत्रीय ischemia प्रेरण से पहले, इस्केमिक समय के दौरान, और reperfusion के दौरान. मिलीवोल्ट और मिलीसेकंड स्केल बाईं ओर दिखाए गए हैं। समय बिंदु और बाएं पूर्वकाल अवरोही धमनी स्नैरिंग का क्षण नीचे दिखाया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: भिन्नात्मक शॉर्टिंग (एफएस) को मापने के द्वारा दिल का इकोकार्डियोग्राफिक मूल्यांकन। भिन्नात्मक छोटा क्रमशः अधिकतम और न्यूनतम एलवी परिधि पर 2 डी-निर्देशित एम-मोड के साथ बाएं वेंट्रिकुलर अंत-डायस्टोलिक दूरी और बाएं वेंट्रिकुलर अंत-सिस्टोलिक दूरी प्राप्त करके मापा गया था। भिन्नात्मक शॉर्टनिंग का मूल्यांकन (ए) बेसलाइन/प्री-इस्किमिया, (बी) बाएं पूर्वकाल अवरोही (एलएडी) धमनी के अस्थायी स्नेरिंग के दौरान किया गया था, जिसमें कर्सर लाइन जोखिम वाले क्षेत्र पर निर्भर थी, और (सी) एलएडी पर जाल जारी करने के बाद पुनरावृत्ति के दौरान। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: प्रेरित मायोकार्डियल क्षेत्रीय इस्किमिया के 30 मिनट के बाद 1% ट्राइफेनिल टेट्राज़ोलियम क्लोराइड के साथ दाग वाले दिल के लिए रोधगलितांश आकार की प्रतिनिधि छवियां। व्यवहार्य ऊतक को लाल रंग के रूप में देखा जाता है, जबकि रोधगलितांश को सफेद क्षेत्रों के रूप में देखा जाता है। स्केल बार = 1 मिमी. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

हमारा प्रोटोकॉल खरगोश में तीव्र क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया करने के लिए एक विश्वसनीय पद्धति को प्रदर्शित करता है। बाएं मिनी-थोरैकोटॉमी दृष्टिकोण जीवित रहने के मामलों के लिए आदर्श है, जिसके लिए चीरा और संबंधित दर्द को कम से कम किया जाना चाहिए। महत्वपूर्ण रूप से, मूत्रवर्धक चिकित्सा एक्सट्यूबेशन से पहले आवश्यक नहीं थी, और गैर-उत्तरजीविता समूह में या जीवित समूह में 4 सप्ताह के बाद कोई मृत्यु दर नहीं थी। जब प्रोटोकॉल के डिजाइन के लिए एक गैर-अस्तित्व मामले की आवश्यकता होती है, या जब वैश्विक और क्षेत्रीय मायोकार्डियल फ़ंक्शन की अधिक विस्तृत निगरानी की आवश्यकता होती है, तो एक मिडलाइन स्टर्नोटॉमी का उपयोग किया जा सकता है(चित्र 1)।

प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण कदम ध्यान से धमनी को नुकसान पहुंचाने या शिरापरक रक्तस्राव पैदा करने के बिना एक शंकु सुई के साथ लाड को घेरना है और जोखिम में एक सुसंगत क्षेत्र बनाने के लिए लाड को रोकना है।

वर्णित सर्जरी करते समय अनुभव की जा सकने वाली कुछ जटिलताएं उच्च ज्वारीय मात्रा के कारण यांत्रिक वेंटिलेशन के दौरान फेफड़ों की अधिकता हैं, एलएडी को नुकसान से रक्तस्राव, इंटरकोस्टल पोत की चोट के लिए माध्यमिक रक्तस्राव, जो आमतौर पर प्रवेश पर या रिट्रैक्टर हेरफेर से होता है, और / या कार्डियक अतालता (इंट्राऑपरेटिव वेंट्रिकुलर फाइब्रिलेशन) एलएडी बंधाव के साथ। अन्य पश्चात की जटिलताएं भी हो सकती हैं, जैसे सर्जिकल साइट संक्रमण, दर्द के कारण खराब पशु जुटाना, और / या अवशिष्ट मायोकार्डियल क्षेत्रीय हाइपोकाइनेसिस। इन जटिलताओं की घटनाओं के बहुत कम होने के बावजूद, अन्वेषक को उन्हें आसानी से और प्रभावी ढंग से संबोधित करने में सक्षम होना चाहिए।

खरगोश मायोकार्डियल अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट पशु मॉडल के रूप में मौजूद हैं। उनकी हृदय गति मानव हृदय गति के समान है, और उनका आकार पर्याप्त रूप से छोटा है लेकिन एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण की अनुमति देता है।

इस अध्ययन में एक सीमा को स्वीकार किया जाना चाहिए; विशेष रूप से, खरगोश का दिल सुअर जैसे अन्य बड़े पशु मॉडल के दिलों की तुलना में मानव हृदय की तुलना के लिए छोटा और चिकित्सकीय रूप से कम प्रासंगिक है।

हृदय रोग की घटनाओं और व्यापकता के कारण, एक पशु मॉडल होना जो क्षेत्रीय मायोकार्डियल इस्किमिया का अनुकरण करता है, सर्वोपरि है। इस पद्धति में कई अनुप्रयोग हो सकते हैं और संवहनी चोट, क्रोनिक मायोकार्डियल इस्किमिया, और मायोकार्डियल तेजस्वी 27,28,29,30,31 की छोटी अवधि के मॉडल में उपयोगी साबित हुआ है।

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Disclosures

लेखकों द्वारा वित्तीय या अन्यथा हितों का कोई टकराव घोषित नहीं किया जाता है।

Acknowledgments

मूल अध्ययन जिसमें इस प्रोटोकॉल का उपयोग किया गया था राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े, और रक्त संस्थान अनुदान एचएल -103642 और एचएल -088206 द्वारा समर्थित किया गया था

Materials

Name Company Catalog Number Comments
#10 blade Bard Parker 371210
#11 blade Fisher Scientific B3L
22 G PIV needle BD Insyte 381423
Acepromazine VETONE NDC 13985-587-50 0.5 mg/kg IM and IV
Aline pressure bag Infu-Stat 2139
Angiocath Becton Dickinson 382512
Arterial Catheter Teleflex MC-004912
Atropine Hikma Pharmaceuticals NDC 0641-6006-01  0.01 mg/kg IM
Betadine and 70% isopropyl alcohol McKesson NDC 68599-2302-6
Blood gas machine Siemens MRK0025
Bovie Valleylab E6008
Bulldog clamps World Precision Instruments 14119
Bupivacaine Auromedics NDC 55150-249-50  3 mg/kg IM
Butorphanol Roxane NDC 2054-3090-36 0.5 mg/kg IM
Clear acetate sheet Oxford Instruments ID 51-1625-0213
Clipers Andis AGC2
DeBakey forceps Integra P6280
Echocardiography machine Philips IE33 F1
Electrocardiography machine Meditech MD908B
Endotracheal tube Medline #922774
Fentanyl West-Ward NDC 0641-6030-01 1–4 µg/kg transdermal patch
Formaldehyde solution 10% Epredia 94001
Glass plates  United Scientific B01MUHX6MR
Heparin Sodium Sagent NDC 69-0058-02 1000U in 1 mL 3 mg/kg
Hot water blanket 3M 55577
Isoflurane Penn Veterinary Supply, INC NDC 50989-606-15 1%–3%
Ketamine Dechra NDC 42023-138-10 10 mg/kg IV
Lab Chart 7 Acquisition Software Adinstruments
Lactated Ringer's solution ICUmedical NDC 0990-7953-09 10 mL/kg/h
Laryngoscope Welch Allyn 68044
Left ventricule lumen catheter 3Fr McKesson 385764-EA
Lidocaine (1%) Pfizer 4276-01 1–1.5 mL/kg IV
LVDP transducer Edward PDP-ED
Marking pen Viscot 1451SR-100 Unsterile
Mayo scissors Mayo S7-1098
Medetomidine Entireoly Pets Pharmacy NDC 015914-005-01 0.25 mg/kg IM
Metzenbaum scissors Cole-Parmer UX-10821-05
Monastra. Blue pigment 98% Chemsavers MBTR1100G
Monocryl 5-0 Ethicon Y463G
Mosquito clamp Shioda 802N
PDS 3-0 Ethicon 42312201
Piezoelectric sonomicrometry crystals Sonometrics Small 2mm round
Plegets DeRoyal 32-363
Povuine Iodine Prep Solutions Medline MDS093940
Precision vaporized system face mask Yuwell B07PNH69BF
Prolene 3-0 Ethicon 8665G
Proline 5-0 Ethicon 8661G
Pulse oximetry probe Masimo 9216-U
Rib spreader Medline MDS5621025
S12 Pediatric Sector Probe Phillips 21380A
Sonomicrometer Sonometrics BZ10123724
Sterile gauze Medline 3.00802E+13
Sterile towels McKesson MON 277860EA
Sternal retractor Medline MDS5610321
Sutures for closure J&J Dental 8698G
Telemetriy monitor Meditech MD908B
Temperature probe Omega KHSS-116G-RSC-12
Triphenyl tetrazolium chloride (1%) Millipore MFCD00011963
Ventilator MedGroup MSLGA 11
Vicryl 2-0 Ethicon V635H
Vinyl tubing ABE DISW 3001

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Alemany, V. S., Recco, D. P., Emani, S. M., del Nido, P. J., McCully, J. D. Model of Ischemia and Reperfusion Injury in Rabbits. J. Vis. Exp. (201), e64752, doi:10.3791/64752 (2023).

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