Summary
Här beskriver vi ett allmänt protokoll och design som kan tillämpas för att identifiera spårmängder och mindre beståndsdelar i de komplexa naturproduktformuleringarna (matriserna) i tibetansk medicin.
Abstract
Tibetanska läkemedel är komplexa och innehåller många okända föreningar, vilket gör djupgående forskning om deras molekylära strukturer avgörande. Vätskekromatografi-elektrospray jonisering time-of-flight masspektrometri (LC-ESI-TOF-MS) används ofta för att extrahera tibetansk medicin; Men många oförutsägbara okända föreningar kvarstår efter användning av spektrumdatabasen. Den här artikeln utvecklade en universell metod för att identifiera komponenter i tibetansk medicin med hjälp av jonfälla masspektrometri (IT-MS). Metoden inkluderar standardiserade och programmerade protokoll för provberedning, MS-inställning, LC-förkörning, metodetablering, MS-förvärv, flerstegs MS-operation och manuell dataanalys. Två representativa föreningar i det tibetanska läkemedlet Abelmoschus manihot frön identifierades med hjälp av flerstegsfragmentering, med en detaljerad analys av typiska sammansatta strukturer. Dessutom diskuterar artikeln aspekter som val av jonläge, mobil fasjustering, optimering av skanningsområde, kollisionsenergikontroll, kollisionslägesomkopplare, fragmenteringsfaktorer och begränsningar av metoden. Den utvecklade standardiserade analysmetoden är universell och kan tillämpas på okända föreningar i tibetansk medicin.
Introduction
Den kvalitativa analysen av spårkomponenter i traditionell kinesisk medicin (TCM) har blivit ett avgörande ämne inom forskningen. På grund av det stora antalet föreningar i TCM är det svårt att isolera dem för kärnmagnetisk resonansspektrometer (NMR) eller röntgendiffraktometeranalys (XRD), vilket gör masspektrometri (MS) -baserade metoder som endast kräver låga provvolymer alltmer populära. Dessutom har vätskekromatografi (LC) i kombination med MS använts i stor utsträckning i TCM-forskning de senaste åren för förbättrad separation av komplexa prover och kvalitativ analys av kemiska föreningar1. En vanlig metod är vätskekromatografi-elektrospray jonisering time-of-flight masspektrometri (LC-ESI-TOF-MS), som används i stor utsträckning i kvalitativ forskning om tibetansk medicin2. Med denna metod anrikas och separeras komplexa komponenter i en LC-kolonn, och mass-till-laddningsförhållandet (m / z) för adduktjonerna observeras med hjälp av en MS-detektor. Att söka tandem MS (MS / MS eller MS2) databaser är för närvarande den snabbaste metoden för säkra sammansatta anteckningar i småmolekylanalys med hjälp av quadrupole time-of-flight (Q-TOF) MS och Orbitrap MS3. Den dåliga kvaliteten på databaser och närvaron av olika isomerer hindrar emellertid identifieringen av okända föreningar. Dessutom är informationen i MS/MS-databasen begränsad 4,5,6,7. Det är viktigt att undersöka de kemiska föreningarna i varje TCM med hjälp av ett allmänt protokoll som kan tillämpas allmänt på andra TCM.
IT-MS fångar ett brett spektrum av joner genom att applicera olika radiofrekvensspänningar (RF) på ringelektroderna8. IT-MS kan utföra tidsserier med flera steg MS-skanningar i olika kronologiska ordningar, vilket ger ingrediens flerstegs MS (MS n) fragmentering, därn är antalet produktjonsteg9. Linjär IT-MS anses vara den bästa för strukturidentifiering eftersom den kan användas för sekventiella MSn-experiment 10. Riktade joner kan isoleras och ackumuleras i linjär IT-MS1. MS n (n ≥ 3) i IT-MS ger mer fragmentinformation än MS/MS i Q-TOF-MS. Eftersom IT-MS inte kan låsa måljonen och dess fragmentjoner är det ett kraftfullt verktyg för strukturbelysning av okända föreningar, inklusive isomerer1. MSn-teknik har använts i stor utsträckning för strukturell analys av okända proteiner, peptider och polysackarider11,12. Överflödsnivån av fragmentjoner i MSn ger mer molekylär fragmentinformation om riktade föreningar i komplexa prover än MS / MS i Q-TOF-MS. Därför är det viktigt att tillämpa MSn-teknik på strukturell identifiering i TCM.
Tibetansk medicin är en viktig del av TCM13, och dessa läkemedel härrör främst från djur, växter och mineraler som finns i platåområdet14. Den tibetanska medicinen Abelmoschus manihot frön (AMS) är fröet till Abelmoschus manihot (linn.) medicus. AMS är ett traditionellt örtläkemedel som används för att behandla tillstånd som atopisk dermatit, reumatism och spetälska. Den innehåller chalkon, som har antibakteriella, svampdödande, anticancer, antioxidativa och antiinflammatoriska effekter15. I den aktuella studien förbättrades MS-procedurerna och en detaljerad metod utvecklades för att identifiera föreningsstrukturer i det tibetanska läkemedlet AMS med hjälp av IT-MS och MSn. Vissa MS-parametrar, inklusive jonläge, skanningsområde och kollisionsläge, optimerades för att övervinna problem med att identifiera spårföreningar. Denna studie syftar till att främja standardiserad strukturidentifiering av spårämnen i TCM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Beredning av prov
- Väg noggrant upp 1 g av AMS-provet och placera det i en E-kolv med 30 ml 80 % metanol. Överför blandningen till en ultraljudsbad sonicator för 30 min extraktion vid 25 ° C. Centrifugera provet vid 14 000 x g i 5 minuter.
OBS: Frekvensen av ultraljudsbadsondon är 40 KHz. - Bered en injektionsspruta och ett mikroporöst membranfilter (0,22 μm, endast organiskt). Filtrera supernatanten i en 2 ml provflaska.
2. MS-inställning
- Slå på vakuumpumpens strömbrytare. Öppna argoncylinderns huvudventil och partialtrycksventilen och justera trycket till cirka 0,3 MPa. Öppna kväveventilen.
OBS: Vänta minst 8 timmar för att säkerställa en tillräcklig vakuumgrad för experimentbetingelserna. Kontrollera att gastrycket för argon och kväve är tillräckligt högt före analys. - Starta MS-kontrollprogramvaran. Klicka på Uppvärmd SEI-källa i programvarupanelen och ange MS-parametrarna, inklusive värmetemperatur (350 °C), mantelgasflöde (35 arb), aux-gasflöde (15 arb), sprayspänning (3,8 KV för positivt läge, −2,5 KV för negativt läge) och kapillärtemperatur (275 °C). Klicka på knappen Apply för att aktivera jonkällan.
3. LC-förkörning, metodetablering och MS-förvärv
- Bered mobil fas A och mobil fas B med 0,1 % myrsyralösning respektive ren acetonitril. Degas dem i ett ultraljudsbad sonicator för minst 15 min. Anslut lösningarna till A- respektive B-vätskepassagerna (figur 1A). Förbered en metanol-vattenlösning (1: 9 v / v) och fyll den sedan i pumpens och injektorns rengöringsvätskeflaskor för hand.
OBS: Frekvensen av ultraljudsbadsondon är 40 KHz. - Starta LC-MS-kontrollprogramvaran.
- Klicka på knappen Direktstyrning för att öppna LC-kontrollpanelen. Öppna avluftningsventilen moturs på pumpmodulen (figur 1B).
- Klicka på knappen Mer alternativ för att öppna pumpinställningen och ställ in rensningsparametrarna på 5 mlmin−1 i 3 minuter. Klicka på rensningsknappen för att starta bubbelborttagningen. Stäng sedan rensningsventilen.
- Klicka på knapparna Prime Syringe, Wash Buffer Loop och Wash Needle External för att skölja sprutan i tre cykler, öglan i en cykel respektive nålen i en cykel. Placera provflaskan i provtagaren (figur 1C).
- Klicka på knappen Instrumentinställning för att öppna metodredigeringsfönstret. Klicka på knappen Ny för att skapa en ny LC-MS-instrumentmetod.
- Upprätta en total körtid för LC-metoden. Ange sedan värden för att ställa in tryckgräns, total flödeshastighet, flödesgradient, provtemperatur, kolonntemperatur och färdigtemperaturdelta i metodredigeringsfönstret.
OBS: Standardflödet för den mobila fasen är konstant vid 0,3 ml / min med 50% A och 50% B och utan kolonntemperatur i frånvaro av en kromatografisk kolonn. Standardvärdena för provtemperatur och färdigtemperaturdelta är 15 °C respektive 0,1 °C. Andra inställningar beror på vilken typ av vätskekromatografikolonn som används. - Välj experimenttypen Allmän MS eller MS n för MS-metoden. Ange värden för att konfigurera förvärvstid, polaritet, massintervall, vidarekopplingsvärdenummer och varaktighet för vidarekopplingsvärde. Klicka på knappen Spara för att konfigurera inställningarna som en instrumentmetod.
OBS: Standardinställningarna utan kromatografikolonn är följande: förvärvstid, 2 min; polaritet, positiv eller negativ; massområde, 100 till 1 200; avleda värdenummer, 2; och avleda värdets varaktighet, 1,99 min.
4. Användning av flerstegs masspektrometri
- Klicka på knappen Sekvensinställningar för att öppna sekvenstabellen.
- Ange följande information i tabellen: provtyp, filnamn, sökväg, prov-ID, instrumentmetod, position och injektionsvolym.
- Klicka på knappen Spara för att registrera sekvenstabellen och klicka sedan på knappen Starta analys för att implementera inställningarna och initiera MS-förvärvet.
Standardexempeltypen väljs som okänd. Instrumentmetoden är den metod som sparades i steg 3.6. Provflaskan placeras på sin unika plats i provrummet. RA1 är till exempel den första platsen i den första raden i det röda området i provrummet. Standardinjektionsvolymen är vanligtvis 2 μl, vilket beror på provets koncentration.
- Dubbelklicka på den råa filen i utforskaren för att ladda MS-data i databehandlingsprogramvaran. I bastoppkromatogrammet (BPI) väljer du området med maximal area under kurvan (AUC) genom att klicka och dra musen. Motsvarande MS-spektra visas i samma fönster.
- Välj en riktad jon för nästa MS/MS-analys.
- Öppna metodredigeringsfönstret igen. I tabellen MSn Setting anger du m/z för måljonen till en decimal i kolumnen Överordnad massa .
- Välj Kollisionsläge och ange kollisionsenergivärdet (CE). Ställ in MS/MS-skanningsintervallet. Klicka på knappen Spara för att spela in MS-metoden och ange ett nytt filnamn i sekvenstabellen. Klicka på Start-knappen för att initiera MS / MS-förvärvet.
OBS: MS/MS-skanningsintervallet var 40%-130% av den riktade moderjonen. Standardvärdet för CE i kollisionsinducerad dissociation (CID) är 35 %.
- Dubbelklicka på råfilen i utforskaren för att ladda MS / MS raw-filen i databehandlingsprogrammet.
- Identifiera den starkaste fragmentjonen i MS/MS-spektrumet och ange dess m/z-värde i MS n-metodlistan. I tabellen MS n Setting anger du MS 3-parametrarna, inklusive kollisionsläge, CE-värde och skanningsintervall.
- Klicka på knappen Spara för att spela in MS-metoden och ange ett nytt filnamn i sekvenstabellen. Klicka på Start-knappen för att initiera MS3-förvärvet .
- Dubbelklicka på råfilen i utforskaren för att ladda MS3 raw-filen i databehandlingsprogrammet. Upprepa steg 4.4 för att erhålla MS4-spektrumet .
- Slutför MSn-experimentet när inga stabila fragmentjoner observeras i spektrumet.
5. Manuell MSn dataanalys
- Dubbelklicka på råfilerna för att öppna alla masspektra från MS till MSn. Beräkna manuellt m / z-differensvärdena mellan jonen och motsvarande fragmentjoner.
Till exempel var m/z-differensvärdet mellan jonen (m/z 617,25) och motsvarande fragmentjoner (m/z 571,28) 45,97 i MS/MS, m/z-differensvärdet mellan jonen (m/z 571,28) och motsvarande fragmentjoner (m/z 525,38) var 45,90 i MS3 och m/z-differensvärdena mellan jonen (m/z 525,38) och motsvarande fragmentjoner (m/z 344,93 och 273,16) var 180,45 och 252,22 i MS4. - Rita manuellt "kärnstrukturen" enligt MS4-resultaten (den sista nivån av MSn). Härled manuellt den ursprungliga strukturen med hjälp av funktionella grupper eller molekylära segment baserat på m / z-differensvärdet. Rita manuellt de molekylära klyvningsbanorna enligt varje molekylstruktur i MSn. Exempel på manuell molekylär härledning beskrivs i avsnittet representativa resultat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Cellobios användes som modell för att verifiera genomförbarheten av MSn i positivt jonläge. Som visas i figur 2A producerade ESI-MS (positivt jonläge) av cellobios [C 12 H22O11] + den protonerade molekylen [M + H] + vid m / z 365. Produktjonskanningen (CID-MS/MS) av [M+H]+ vid m/z 365 resulterade i den andra fragmentjonen vid m/z 305 (figur 2B), som analyserades ytterligare med hjälp av MS3- och MS4-analyser (figur 2C,D). MS3-analys resulterade i den tredje fragmentjonen vid m/z 254, och MS4-analysen resulterade i den fjärde fragmentjonen vid m/z 185. MS/MS-analysen (figur 2E) avslöjade att den förlorade fragmentjonen vid m/z 60 indikerade en sekvens av jonfragmentering vid m/z 365, nämligen ringöppningshydrolys (markerad i blått), C-C-bindningsplyvning (markerad med rött) och dehydrering (markerad med grönt). På liknande sätt avslöjade MS3-analysen att den förlorade fragmentjonen vid m / z 60 indikerade C-C-bindningsklyvningen (markerad med rött) av en jon vid m / z 305. MS4-analysen visade att den förlorade fragmentjonen vid m/z 60 innebar hydrolys (markerad i blått) och dehydrering (markerad i grönt), vilket resulterade i klyvning av jonen med m/z 245 till en jon med m/z 185. Stegfrakturen i MSn-analysen indikerade att denna metod var möjlig för att undersöka kolhydraternas struktur.
Den preliminära kvalitativa analysen av AMS med LC-Q-TOF-MS avslöjade förekomsten av många okända föreningar. En av dessa, en jon vid m/z 617, valdes för MSn-analys i negativt läge. Produktjonskanningen (CID-MS/MS) av [M-H]− vid m/z 617 i AMS gav en andra fragmentjon vid m/z 571. MS3-analysen av denna fragmentjon gav en tredje fragmentjon vid m/z 525, och MS4-analysen gav fjärde fragmentjoner vid m/z 345 och 273 (figur 3A-D). MS3 av m/z 571 gav en fragmentjon vid m/z 525 genom förlust av CH2 OH-delen som metanol (−32Da) och OH-delen (−18 Da) som vatten. Dessa MS4-resultat användes för manuell identifiering av föreningens "kärnstruktur", och dess ursprungliga struktur bestämdes genom att jämföra jonens m / z-värden och dess fragmentjoner. Föreningens molekylära struktur vid m/z 617 och dess klyvningsvägar i MSn visas i figur 3E. En annan okänd förening vid m/z 365 analyserades i positivt läge med användning av MSn. Produktjonskanningen (CID-MS/MS) av [M+H]+-jonen vid m/z 365 i AMS gav andra fragmentjoner vid m/z 299, m/z 329 och m/z 347. MS3-analysen av dessa fragmentjoner gav en tredje fragmentjon vid m/z 231 (figur 4A-C). Föreningens molekylära struktur och klyvningsmekanism vid m/z 365 visas i figur 4E.
Figur 1: Identifiering av okända föreningsstrukturer i tibetansk medicin med hjälp av IT-MS och flerstegs masspektrometrianalys . (A) Den mobila fasen för vätskekromatografi. b) Vätskekromatografipumpen. (C) Provrummet. D) Jonkällan för MS. (E) Jonfällsmodulens inre struktur i MS. (F) MS4-spektrumet . g) Information om molekylstruktur från MS4-resultaten . Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Flerstegsfragmentering av cellobios via IT-MS i positivt jonläge. (A) Ursprungligt massspektrum av cellobios. b) Fragmentjoner i MS/MS-spektrumet. c) Fragmentjoner i MS 3-spektrumet. d) Fragmentjoner i MS 4-spektrumet. (E) Klyvningsmekanismen och molekylstrukturen hos cellobios. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Flerstegsfragmentering och strukturanalys av den okända AMS-sammansatta jonen vid m/z 617 via IT-MS i negativt jonläge. a) AMS partiella massspektrum. b) Fragmentjoner i MS/MS-spektrumet. c) Fragmentjoner i MS 3-spektrumet. d) Fragmentjoner i MS 4-spektrumet. E) Klyvningsmekanismen och molekylstrukturen hos AMS-föreningsjonen vid m/z 617. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Strukturell analys av flerstegsfragmentering av den okända AMS-sammansatta jonen vid m/z 365 via IT-MS i positivt jonläge. a) AMS partiella massspektrum. b) Fragmentjoner i MS/MS-spektrumet. c) Fragmentjoner i MS 3-spektrumet. d) Klyvningsmekanismen och den molekylära strukturen hos AMS-föreningsjonen vid m/z 365. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IT-MS och dess MSn-teknik erbjuder ett nytt tillvägagångssätt för att identifiera strukturen hos spår-TCM-föreningar. Till skillnad från Q-TOF-MS, som inte kunde identifiera fragmentjonerna djupt, utmärker sig IT-MS med MSn-teknik på grund av dess förmåga att isolera och ackumulera joner. Denna artikel beskriver en metod för att identifiera spårämnen i tibetansk medicin med hjälp av IT-MS och MSn-tekniken . Metoden använder n-värdet i MSn för att bestämma mängden fragmentjoninformation som tillhandahålls. De avgörande stegen i denna metod inkluderar att välja lämpligt skanningsområde och justera CE-värdet, vilket leder till identifiering av värdefulla fragment.
I allmänhet utförs MSn-analysen av sackarider bäst i positivt jonläge16, medan fenolsyror och alkaloider bäst analyseras i negativt jonläge. Reaktionen hos föreningen i ESI-källan kan förbättras genom att justera den mobila fasen med tillsatser såsom myrsyra, ättiksyra och ammoniumacetat17. En kemisk joniseringskälla med atmosfäriskt tryck kan övervägas för föreningar med svag polaritet. Att välja ett lämpligt skanningsområde kan öka intensiteten hos fragmentjonerna, vilket är fördelaktigt för nästa steg av MS n på grund av det oundvikliga energiförfallet i varje MSn. Fragmentjonens m/z bör placeras i den centrala delen av skanningsområdet för att uppnå bästa motsvarande intensitet. Om en jon har dubbla eller flera laddningar kan fragmentjoner med högre m / z-värden erhållas genom att minska laddningsnumret under fragmentering. I detta fall bör slutet m/z i skanningsområdet ställas in så att det blir större. CID-läget är lämpligt för de flesta föreningar i MSn-analys 18. Om fragmentjonens intensitet är otillräcklig kan CE-värdet ökas med 5% åt gången. När det finns flera, komplexa fragmentjoner i MSn behövs ett lägre CE-värde för att kontrollera jondissociationen. Det pulsade Q-kollisionsinducerade dissociationsläget, som är lämpligt för små molekyler, ger mer detaljerad information om fragmentjoner med låg molekylvikt än CID-läge19. ETD-modellen (electron transfer dissociation) är dominerande vid peptidfraktur och proteinidentifiering men används sällan för att identifiera TCM-komponenterna20. ETD-läget kan användas för att undersöka okända föreningar innehållande disulfidbindningar21.
Även omMS-metoden har många fördelar för strukturell identifiering jämfört med andra MS-tekniker, finns det fortfarande vissa begränsningar. För det första är inget av kollisionslägena lämpliga för alla TCM-föreningar. Ett rimligt val av kollisionsläge och manuell justering av kollisionsenergin kan förbättra fragmentjonerna. Dessutom är det med MSn-metoden svårt att skilja positionen för funktionella grupper i stora molekyler med komplexa isomerer. Att identifiera de funktionella gruppplatserna är en utmanande uppgift som kräver erfarna forskare. Manuell efteranalys och lång MSn databehandlingstid är också betydande hinder som avskräcker forskare från att använda denna teknik. Q-TOF-MS är populärt bland forskare på grund av dess höga mätnoggrannhet, upplösning och användarvänlighet med databaser. IT-MS är dock en bra lösning för oidentifierade joner och spårjoner på grund av dess förmåga att isolera och ackumulera joner och utföra flera analyssteg. Integrationen av Q-TOF och IT-MS kan ge en optimal lösning för fullständig kvalitativ analys av TCM-prover. MSn-teknik används ofta inom områden som mat, miljövetenskap och medicin, och dess popularitet och användning inom olika områden förväntas öka med förbättringen av IT-MS-instrumentering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar inte några konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Detta arbete finansierades av Xinglin Talent Program vid Chengdu University of TCM (nr 030058191), Nature Science Foundation of Sichuan (2022NSFSC1470) och National Natural Science Foundation of China (82204765).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile | Thermo Scientific | CAS 75-05-8 | LC-MS grade |
| Formic Acid | Knowles | CAS 64-18-6 | HPLC grade |
| Linear ion trap mass spectrometer | Thermo Scientific | LTQ XL | |
| liquid chromatograph | Thermo Scientific | U3000 | |
| LTQ Tune | Thermo Scientific | version 2.8.0 | MS control software |
| Methanol | Thermo Scientific | CAS 67-56-1 | LC-MS grade |
| Pure water | Thermo Scientific | CAS 7732-18-5 | LC-MS grade |
| Xcalibur | Thermo Scientific | version 2.0 | LC-IT-MS operational software |
References
- Chen, X. -F., Wu, H. -T., Tan, G. -G., Zhu, Z. -Y., Chai, Y. -F. Liquid chromatography coupled with time-of-flight and ion trap mass spectrometry for qualitative analysis of herbal medicines. Journal of Pharmaceutical Analysis. 1 (4), 235-245 (2011).
- Ou, C., et al. Systematically investigating the pharmacological mechanism of Dazhu Hongjingtian in the prevention and treatment of acute mountain sickness by integrating UPLC/Q-TOF-MS/MS analysis and network pharmacology. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 179, 113028 (2020).
- Kind, T., et al. Identification of small molecules using accurate mass MS/MS search. Mass Spectrometry Reviews. 37 (4), 513-532 (2018).
- Phetsanthad, A., Vu, N. Q., Li, L. Multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in Callinectes sapidus. Journal of Visualized Experiments. (183), e63322 (2022).
- Seetaloo, N., Phillips, J. J. Millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions. Journal of Visualized Experiments. (184), e64050 (2022).
- Karas, B. F., et al. Dose uptake of platinum-and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications. Journal of Visualized Experiments. (182), e6358 (2022).
- Chang, H. -L., et al. Uracil-DNA glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis. Journal of Visualized Experiments. (182), e63089 (2022).
- Wang, S., et al. Structural characterization and identification of major constituents in Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry. Molecules. 17 (9), 10470-10493 (2012).
- Pang, B., Zhu, Y., Lu, L., Gu, F., Chen, H. The applications and features of liquid chromatography-mass spectrometry in the analysis of traditional Chinese medicine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016, 3837270 (2016).
- Ichou, F., et al. Comparison of the activation time effects and the internal energy distributions for the CID, PQD and HCD excitation modes. Journal of Mass Spectrometry. 49 (6), 498-508 (2014).
- Fu, X., et al. Suppression of oligomer formation in glucose dehydration by CO2 and tetrahydrofuran. Green Chemistry. 19 (14), 3334-3343 (2017).
- Fu, X., et al. Solvent effects on degradative condensation side reactions of fructose in its initial conversion to 5-Hydroxymethylfurfural. ChemSusChem. 13 (3), 501-512 (2020).
- Yang, S., Wang, Z., Zhao, H., Ren, X.
- Shang, X., et al. Ethno-veterinary survey of medicinal plants in Ruoergai region, Sichuan province, China. Journal of Ethnopharmacology. 142 (2), Sichuan province, China. 390-400 (2012).
- Su, J., et al. Chalcone derivatives from Abelmoschus manihot seeds restrain NLRP3 inflammasome assembly by inhibiting ASC oligomerization. Frontiers in Pharmacology. 13, 932198 (2022).
- Fu, X., et al. Mapping out the reaction network of humin formation at the initial stage of fructose dehydration in water. Green Energy & Environment. , In Press (2022).
- Hua, Y., Jenke, D. Increasing the sensitivity of an LC-MS method for screening material extracts for organic extractables via mobile phase optimization. Journal of Chromatographic Science. 50 (3), 213-227 (2012).
- Kumar, S., Singh, A., Bajpai, V., Kumar, B. Identification characterization and distribution of monoterpene indole alkaloids in Rauwolfia species by Orbitrap Velos Pro mass spectrometer. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 118, 183-194 (2016).
- Bayat, P., Lesage, D., Cole, R. B. Tutorial: Ion activation in tandem mass spectrometry using ultra-high resolution instrumentation. Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 680-702 (2020).
- Wu, S. -L., et al. Mass spectrometric determination of disulfide linkages in recombinant therapeutic proteins using online LC−MS with electron-transfer dissociation. Analytical Chemistry. 81 (1), 112-122 (2009).
- Echterbille, J., Quinton, L., Gilles, N., De Pauw, E. Ion mobility mass spectrometry as a potential tool to assign disulfide bonds arrangements in peptides with multiple disulfide bridges. Analytical Chemistry. 85 (9), 4405-4413 (2013).
