Drosophila melanogaster Larvaların MSS diseksiyonu

Summary

Bu yazıda, merkezi sinir sistemi incelemek için nasıl üçüncü instar Drosophila larvaları göstermektedir.

Abstract

Drosophila larvaların merkezi sinir sistemi (MSS), karmaşık ve tam olarak anlaşılamamıştır. MSS araştırmak için bir yol, çeşitli roman ve marker proteinleri ifade incelemek için immünhistokimya kullanmaktır. Sert manikür beden boşluğunun içine nüfuz antikorlar engeller çünkü bütün larva boyama pratik değildir. Bu dokuların leke için sabitleme ve boyamadan önce hayvan incelemek için gereklidir. Bu yazıda, Drosophila larvaları MSS zarar vermeden nasıl incelemek göstermektedir. Ince forseps bir çift yarım larva yırtarak başlayın ve sonra MSS maruz kütikül "iç-dış" açmak. Diseksiyon dikkatli bir şekilde yapılırsa MSS manikür bağlı kalacaktır. Biz genellikle fiksasyon ve boyama adımları boyunca manikür bağlı MSS tutmak ve sadece cam slaytlar tamamen montaj örnekleri hemen önce manikür CNS kaldırmak. Ayrıca, Havva, MSS nöronların bir alt kümesi olarak ifade edilen bir transkripsiyon faktörü ile boyanmış bir larva MSS bazı temsili görüntü gösteriyor. Makalede, bu tekniği ve ortaya çıkabilecek olası zorlukları bazı pratik kullanımları ile ilgili bir tartışma ile sona erer.

Protocol

1. Manikür bağlı MSS bırakarak, ^3. instar larvaları parçalara ayır. 1.5 ml tüp yerleştirin.
2. Sallanan 40 dakika için% 2'lik formaldehit içeren PBS (1x) sabitleyin. Her 5-10 disseke MSS 250ul kullanın.
3. PBS +% 0.1 Triton X-100 (PBST) formaldehit kaldırın ve kısa bir süre ile 3 kere yıkayın. Doku kaybını önlemek için ince çekilmiş Pasteur pipet kullanın.
4. Non-spesifik protein bağlayıcı siteleri engelleme ve PBST doku 1-8 saat inkübe hücre zarları permeabilize +% 5 4 sallanan BSA, ° C
5. 4 ° C gecede PBST +% 5 BSA sallanan seyreltilmiş primer antikor inkübe edin. Optimal antikor seyreltme farklı antikorları için değişecektir.
6. 4 az iki 30dk yıkar ° C tarafından takip 3x PBST durulayın
7. PBST içinde seyreltilmesi ikincil antikor inkübe + 4 sallanan 1-3 saat için% 5 BSA ° C. 4 az iki 30dk yıkar ° C tarafından takip 3x PBST durulayın Ikincil bir ışığa duyarlı bileşik konjuge ise tüp, alüminyum folyo ile sarın.
8. Daha doku teşrih (gerekirse) ve slaytlar monte.

Discussion

Bu video üçüncü instar Drosophila larvaları CNS incelemek için nasıl gösteriyor. Diseksiyonu sonra, merkezi sinir sistemi, bir standart immünohistokimya protokolü kullanılarak boyandı. Şu anda, hala çok yetişkin sinir sisteminin nasıl saklar yanı sıra nasıl oluşturulur bilinmiyor ve bilgi iletir. Gelişmekte olan Drosophila larva MSS çalışmalar, sinir sistemi kablolama ve işlevi hakkındaki bilgimizi artırmak gerekir.

Drosophila larvaları gibi çevresel uyaranlara yanıt olarak stereotpyed davranışlar, bir dizi sergilerler. Bu davranışları nasıl öğrendim ve sinir sisteminde saklanır? Larva gelişimi sırasında sinir sisteminin çalışmalar bu soruyu cevaplamak için yardımcı olacaktır.

Drosophila gelişimi bu aşamada organizma pupa devresi sırasında meydana gelen büyük morfolojik değişikliklere hazırlanıyor. Bu süre zarfında, nöromüsküler sistemin büyük remodeling sürünerek kurtçuk yetişkin bir sinek organsim geçişler olarak ortaya çıkar. Aynı tip davranışlar daha yüksek hayvanların nöronlar görülebilir nöronların, bu gelişim aşamasında değişim ve nasıl belirlemek için ilginç olacak.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Forceps	fine tipped
9-well Watch glass
Plastic Petri dish