Drosophila Voksen Brain Dissektion: En metode i Fly Neurobiologi

- Udfør dissektionen i en skål med en bufferopløsning og under ensartet belysning. Overfør en flue, ventral side op, ind i skålen og hold præparatet nedsænket under hele proceduren. Mens du holder bunden af proboscis, skal du forsigtigt trække fluehovedet væk fra kroppen for at adskille de to. Hjernen er placeret bagpå eller kaudale side af fluens hoved. Derfor skal du holde fast i de forreste eller rostrale dele af neglebåndet under dissektionen for at undgå at beskadige orgelet.

For at isolere hjernen skal du holde den mediale kant af det ene øje og gribe og trække proboscis i den modsatte retning for at skabe en åbning i hovedkapslen. Mens du holder neglebåndet i det øje, skal du forstå neglebåndets mediale kant fra det andet øje og langsomt trække hovedkapslen lige fra hinanden for at afsløre hjernen. Hvis det er nødvendigt, fortsæt med at rydde resterende kutikula, vedhæftede luftsække eller luftrør. Præparater af høj kvalitet vil bevare strukturer som de optiske lobes, centralhjernen og SOG. I eksempelprotokollen vil vi se en detaljeret demonstration af en Drosophila voksen hjernedissektion. bruges til at studere svampekroppene.

- For at sætte op til dissektionen skal du placere de bedøvede fluer af interesse på en kold metalpude eller i en petriskål, der sidder på is. Alternativt kan du bruge en fluepude, der udsender kuldioxid. Placer derefter en lille mængde PTN i midten af dissektionsskålen for at skabe en boble af PTN. Derefter, under et stereomikroskop, skal du fylde synsfeltet med PTN-boblen under ensartet belysning. Nu manipulere fluer, så de er mave op, og overføre en ved maven ind i PTN. Helt nedsænke dyret i PTN og udføre hele dissektion nedsænket i PTN. Med maven i PTN. Helt nedsænke dyret i PTN og udføre hele dissektion nedsænket i PTN. Med PTN. Helt nedsænke dyret i PTN og udføre hele dissektion nedsænket i PTN. Med PTN. Helt nedsænke dyret i PTN og udføre hele dissektion nedsænket i PTN. Med PTN. Helt nedsænke dyret i PTN og udføre hele dissektion nedsænket i PTN. Med PTN. Helt nedsænke dyret i PTN og udføre hele dissektion nedsænket i PTN. Med et andet par pincet, tag fat i proboscis og træk hovedet af kroppen.

- Lejlighedsvis, proboscis vil blive fjernet, men hovedet vil forblive knyttet til kroppen.

- Kassér maven og brystkassen. Forbindelser fra den centrale hjerne til VNC kan tydeligvis ikke analyseres ved hjælp af denne metode. Næste, forstå mediale kanten af venstre nethinden på kanten af det centrale hul i neglebåndet, og langsomt trække pincet direkte fra hinanden for at forhindre rive af den optiske lap, som er den uigennemsigtige struktur, der er omfattet af hvid, trævlet luftrør. Som nethinden dissociates, vil der være et lille fald i spændingen.

- For at forhindre hjernen i at rive i stykker, er det afgørende vigtigt at forstå den mediale kant af hvert øje og meget langsomt trække pincet fra hinanden.

- Som vist her, forstå neglebånd med hvert par pincet og meget langsomt trække dem i modsatte retninger. Hvis det gøres korrekt, bør kutikula adskilles fra hjernevævet, forlader hjernen intakt. Meget skarpe pincet er nødvendige for dette trin. Næste, forsigtigt fjerne de omkringliggende kutikula stykke for stykke. Mens du fjerner stædigt fastgjort kutikula, kan det bidrage til at sikre hjernen ved at gribe de resterende VNC for at undgå at knuse hjernen. Endelig bruge en P200 pipette til at overføre de dissekerede hjerner i en brønd af en plade fyldt med PTN til fiksering og immunostaining.