Drosophila Yetişkin Beyin Diseksiyonu: Sinek Nörobiyolojisinde Bir Yöntem

- Diseksiyonu tampon çözeltili ve düzgün aydınlatmalı bir tabakta gerçekleştirin. Bir sineği, ventral tarafı tabağa aktarın ve hazırlığı prosedür boyunca su altında tutun. Hortumun tabanını tutarken, ikisini ayırmak için sinek başını vücuttan hafifçe çekin. Beyin, sinek başının arkasında veya kaudal tarafında bulunur. Bu nedenle, organa zarar vermemek için diseksiyon sırasında kütikülün ön kısmına veya rostral kısımlarına tutun.

Beyni izole etmek için, bir gözün medial kenarını tutun ve kafa kapsülüne bir açıklık oluşturmak için hortumu ters yönde kavrayın ve çekin. Kütikül o gözde tutarken, kütikülün medial kenarını diğer gözden kavrayın ve beyni ortaya çıkarmak için baş kapsülünü yavaşça düz bir şekilde çekin. Gerekirse, kalıntı kütikül, bağlı hava kesecikleri veya trakeayı temizlemeye devam edin. Yüksek kaliteli preparatlar optik loblar, merkezi beyin ve SOG gibi yapıları koruyacaktır. Örnek protokolde, drosophila yetişkin beyin diseksiyonunun ayrıntılı bir gösterimini göreceğiz. Mantar gövdelerini incelemek için kullanılır.

- Diseksiyonu ayarlamak için, uyuşturulmuş ilgi sineklerini soğuk metal bir ped üzerine veya buz üzerinde oturan bir Petri kabına yerleştirin. Alternatif olarak, karbondioksit yayan bir sineklik kullanın. Daha sonra, bir PTN kabarcığı oluşturmak için diseksiyon kabının ortasına az miktarda PTN yerleştirin. Sonra, bir stereomikroskop altında, görüş alanını tekdüze aydınlatma altında PTN kabarcığı ile doldurun. Şimdi, sinekleri göbek olacak şekilde manipüle edin ve karnının yanından PTN'ye aktarın. ikinci bir çift toparlama, hortumları kavrayın ve başı vücuttan çekin.

- Occassionally, hortum çıkarılır ancak kafa vücuda bağlı kalır. Bu durumda, bir retinanın medial kenarını tutun ve başı çıkarmak için yanal kuvvet uygulayın.

- Karın ve toraksı atın. Bu adım sırasında başı PTN'de tutmak önemlidir. Merkezi beyinden VNC'ye olan bağlantılar açıkça bu yöntem kullanılarak analiz edilemez.. Daha sonra, kütiküldeki merkezi deliğin kenarındaki sol retinanın medial kenarını kavrayın ve beyaz, telli trakea ile kaplı opak yapı olan optik lobun yırtılmasını önlemek için tokmakları yavaşça doğrudan birbirinden ayırın. Retina ayrıştıkça, gerginlikte hafif bir azalma olacaktır.

- Beynin yırtılmasını önlemek için, her gözün medial kenarını kavramak ve çok yavaşça tokaları ayırmak kritik öneme sahiptir. Çok hızlı hareket etmek beyin morfolojisinin değişmesine veya beyin dokusunun hasar görmesine neden olabilir.

- Burada gösterildiği gibi, kütikülleri her bir çift önseziyle kavrayın ve çok yavaşça ters yönlere çekin. Doğru yapılırsa, kütikül beyin dokusundan ayrılmalıdır, beyni sağlam bırakmak. Bu adım için çok keskin forseps gereklidir. Sonra, çevredeki kütikül parçasını dikkatlice parça parça çıkarın. İnatla bağlı kütikül çıkarırken, beyni ezmekten kaçınmak için kalan VNC'yi kavrayarak beyni sabitleme ve bağışıklık sistemi için PTN ile dolu bir tabağa aktarmak için bir P200 pipeti kullanın.