Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. אלגנים מתרחשים בשני מינים: הרמפרודיטים, אשר יש שני כרומוזומי X, וזכרים, אשר יש רק כרומוזום X אחד המכונה XO או X null.
הרמפרודיטים מייצרים גם ביציות וגם זרע ויכולים להתרבות על ידי הפריה עצמית. כמעט כל הגמטות שלהם נושאות כרומוזום X, כך שהצאצאים הנובעים מהפריה עצמית הם בעיקר הרמפרודיטים.
לעתים רחוקות, כרומוזום X הולך לאיבוד במהלך gametogenesis, וכתוצאה מכך צאצאים זכרים רק על 0.1 עד 0.2% מהזמן.
במקום זאת, אנו יכולים לעשות הרמפרודיט עם זכר וכתוצאה מכך כמחצית הצאצאים להיות זכר. בעת ביצוע הצלב הגנטי הזה, הקפד לכלול זכרים יותר הרמפרודיטים כדי להבטיח הזדווגות יעילה. בדוגמה הבאה, אנו להגדיר צלחת הזדווגות ולבודד תולעים זכריות כהכנה לאסוף וללמוד spermatids במבחנה.
- ראשית, להשיג מספר גדול של זכרים על ידי חציית חמישה זכרים ברטיפ אחד הרמפרודיט אחד על מדשאה קטנה של חיידקי E. coli OP50 זרעים במרכז מדיום צמיחה נמטודה או צלחת NGM. בערך 50% מהדור הבא יהיו זכרים wildtype.
כדי לאסוף זכרי שלב L4, לבחון מורפולוגיה שלב התפתחותי וזנב תחת מיקרוסקופ מנתח. תולעת שלב L4 הוא הרים מבוסס על מורפולוגיה זנב. תולעת זכר יש זנב מעוגל, בעוד הרמפרודיט יש זנב מחודד.
באמצעות חוט פלטינה, לבחור 7 עד 10 זכרים שלב L4 לכל ניסוי ולהעביר אותם צלחת NGM זרע עם OP50 ולתת להם לגדול במשך יום או יומיים. גדל זכרים מתנזרים בהיעדר הרמפרודיטים מונע אובדן זרע ולכן, מספר רב של spermatids יהיה זמין במהלך ההליך הניסיוני.
