Encyclopedia of Experiments: Biology
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- C. elegans se producen en dos sexos: hermafroditas, que tienen dos cromosomas X, y los machos, que tienen sólo un cromosoma X conocido como XO o X nulo.
Los hermafroditas producen ocitos y espermatozoides y pueden reproducirse por auto fertilización. Casi todos sus gametos llevan un cromosoma X, por lo que las crías que resultan de la auto fertilización son principalmente hermafroditas.
Rara vez, el cromosoma X se pierde durante la gametogénesis, resultando en descendencia masculina sólo alrededor de 0.1 a 0.2% del tiempo. Esta no es una manera práctica de recoger suficientes machos para cualquier experimento o cruz genética que los necesitemos.
En su lugar, podemos hacer un hermafrodita con un macho resultando en aproximadamente la mitad de la descendencia siendo macho. Al llevar a cabo esta cruz genética, asegúrese de incluir más machos que hermafroditas para asegurar un apareamiento eficiente. En el siguiente ejemplo, estableceremos una placa de apareamiento y aislaremos gusanos machos en preparación para recoger y estudiar espermatozoides in vitro.
- En primer lugar, obtener un gran número de machos cruzando cinco machos de tipo salvaje y un hermafrodita en un pequeño césped de la semilla de la bacteria E. coli OP50 en el centro de un medio de crecimiento de nematodos o placa de NGM. Aproximadamente el 50% de la próxima generación serán machos de tipo salvaje.
Para recoger machos en etapa L4, examine la morfología de la etapa del desarrollo y la cola bajo un microscopio diseccionador.
Usando un alambre de platino, elige machos de etapa de 7 a 10 L4 por experimento y transfiéralos a semillas de placa NGM con OP50 y déjalos crecer durante uno o dos días.
