Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit (Translated to Swedish)

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 107.22.127.92, User IP: 107.22.127.92, User IP Hex: 1796636508

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.

Cite this Article: Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Abstract: Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

Plasmid DNA-rening från E. coli är en central teknik för molekylär kloning. Småskalig rening (miniprep) från mindre än 5 ml bakteriekultur är ett snabbt sätt för klon verifiering eller isolering av DNA, följt av ytterligare enzymatiska reaktioner (polymeraskedjereaktion och restriktionsenzymanalys matsmältningen). Här har vi video-inspelade de allmänna förfarandena i miniprep genom QIAGEN är QIAprep 8 Miniprep Kit, som syftar till att införa detta mycket effektiv teknik för att den allmänna nybörjare för molekylärbiologisk teknik. Hela proceduren är baserad på alkalisk lys av E. coli-celler följt av adsorption av DNA på kisel i närvaro av höga salt. Den består av tre steg: 1) förberedelse och clearing av en bakteriell lysat, 2) adsorption av DNA på QIAprep membran, 3) tvättning och eluering av plasmid-DNA. Alla steg utförs utan användning av fenol, kloroform, CsCl, etidiumbromid och utan alkohol nederbörd. Det tar vanligtvis mindre än 2 timmar att slutföra hela förfarandet.

Disclosures: Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

Ask the Author: Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

5 Comments

A very helpful and clear demonstration. Thanks!

Posted by: AnonymousJanuary 22, 2008, 9:33 PM

With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?

Thank you

Posted by: sjNovember 4, 2008, 7:26 AM

Hello from QIAGEN,

There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column.

You can see the handbook for this kit online here if you would like:

http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000248

-QIAGEN Technical Service

http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

2.1

Posted by: QIAGEN Technical ServiceNovember 4, 2008, 8:18 AM

By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
Thank you very much.

Posted by: Soon Keat O.July 18, 2009, 10:51 AM

Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

Posted by: idrissaMarch 2, 2010, 10:40 AM

Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

Posted by: privateMarch 23, 2010, 5:02 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.

Information

Date Published

7/29/2007

JoVE Section

General

JoVE Issue

Comments

5 Comments

View Count

Loading... (Details…)

DOI

doi:10.3791/247

Automatic Translation

Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit