मूल्यांकन Burrowing, चूहे में नेस्ट का निर्माण, और होर्डिंग

Deacon, R. Assessing Burrowing, Nest Construction, and Hoarding in Mice. J. Vis. Exp. (59), e2607, doi:10.3791/2607 (2012).

1. बुरोइंग

1. उपकरण

विभिन्न कंटेनर डिजाइन की कोशिश की गई है (उदाहरण के लिए एक धातु सुराही है कि आसानी से साफ किया जा सकता है, लेकिन चूहों में प्रवेश करने के लिए अनिच्छुक थे). अंत में यह पाया गया कि प्लास्टिक downpipe की लंबाई (के रूप में घरों पर जुड़ा guttering) एक छोर पर थोड़ा ऊपर उठाया भोजन छर्रों का आकस्मिक (गैर जानबूझकर) विस्थापन को रोकने और दूसरे छोर पर बंद तंत्र की एक कुशल टुकड़ा था. बिल अब प्लास्टिक downpipe, 68 मिमी व्यास 20 सेमी लंबे लंबाई (चित्रा 1) में कटौती से बना रहे हैं. एक अंत 12 मिमी मध्यम घनत्व fibreboard (MDF) के एक प्लग के साथ बंद है. (श्वसन संरक्षण जब mdf के साथ काम करने के लिए सलाह दी जाती है). प्रयोजनों और waterproofing की सफाई के लिए, एक पनरोक चिपकने वाला गोंद यौगिक burrowing ट्यूब में यह गोंद के रूप में सेवारत mdf के अंदर और बाहर सतहों के रूप में अच्छी तरह से लागू किया जा सकता है. मशीन शिकंजा (5 सेमी लंबी) के दूसरे छोर ओ तरक्की के लिए उपयोग किया जाता हैच मंजिल दूर ट्यूब 3 सेमी. दो छेद burrowing ट्यूब के खुले अंत से 1 सेमी drilled 90 ° और screws डाला के एक कोण पर और ⁴ कड़ा.

बिलों का व्यास शायद महत्वपूर्ण है; स्च्मिद होम्स एट अल ¹⁹ ने कहा है कि जंगली में चूहों मुख्य रूप से आकार में हमारे कृत्रिम लोगों के लिए समान बिलों से "बिल साफ "..

चित्रा 1 एक burrowing ट्यूब में एक माउस.

2. प्रक्रिया

1. आदीपन
   Burrowing सामान्य सहज है, लेकिन वहाँ एक निश्चित सीखने तत्व है. सीखने की प्रक्रिया सामाजिक सरलीकरण द्वारा बढ़ाया है. इसलिए जो बाद में कर रहे हैं के लिए एक इलाज के साथ परीक्षण किया चूहों के समूह घर पिंजरे में एक पूर्ण बिल रातोंरात जगह है. प्रत्येक बिल खाना छर्रों सामान्य आहार के रूप में की आपूर्ति के 200 ग्राम के साथ भरा है. (यह टी करने के लिए संदर्भित करता हैवह आहार के घने संकुचित प्रकार, अगर एक "विस्तारित" आहार बिल का उपयोग कम से कम 200g पकड़ जाएगा). प्रयोगकर्ता विचार में इस तरह के कारकों में ले जब एक burrowing सब्सट्रेट का चयन करना चाहिए.
   
   यदि चूहों भोजन राशन (उदाहरण के लिए, उन्हें एक समवर्ती भूलभुलैया शिक्षण कार्य चलाने के लिए प्रेरित) पर कर रहे हैं गैर खाद्य पदार्थ उदाहरण मिट्टी गेंदों के लिए हो सकता है, इस्तेमाल किया जा सकता है, के रूप में इनडोर संयंत्र बर्तन में मिट्टी की सतह लाइन के लिए इस्तेमाल किया, मटर तख़्ती (छोटे पत्थरों ~ 1 सेमी व्यास) और रेत. मटर तख़्ती और रेत, तीन बार भोजन छर्रों से भारी जा रहा है, भोजन छर्रों के लिए उपयोगी विकल्प हैं अगर चूहों को बहुत सख्ती burrowing हैं, एक "छत प्रभाव" से बचने के.
2. Baselining
   भागो (अधिमानतः दो) आधारभूत परीक्षण burrowing 48 घंटे के अलावा उसी तरह के रूप में प्रस्तावित उपचार के बाद परीक्षण के लिए किया जाएगा. परीक्षण बेहतर 4 बजे के आसपास शुरू कर दिया है अगर चूहों एक 0700-1900 घंटे अंधेरे प्रकाश चक्र पर रखे जाते हैं. यह एक संवेदनशील समय हैपरीक्षण, के रूप में वे सामान्य रूप से जाग इस समय नहीं कर रहे हैं और अधिक अगर वे अंधेरे चरण में अच्छी तरह से थे की तुलना में में धीरे धीरे और फलस्वरूप बहुत सक्रिय burrowing शुरू होता है. शुरुआत के बाद दो घंटे, burrowed भोजन के वजन के एक "स्नैपशॉट" माप लिया जाता है, बिल एक tared कंटेनर में खाली है और तौला और छर्रों बिल जो पिंजरे में वापस डाल दिया है में बदल दिया. अगर माउस बिल में है, बस धीरे वजन कंटेनर में और यह सामग्री डालना और पिंजरे में माउस की जगह. दो घंटे में burrowed वजन तो मूल जी 200 से घटाव द्वारा गणना अंतिम पढ़ने अगली सुबह ले लिया है. समय महत्वपूर्ण के रूप में चूहों वापस चले गए हैं सो बिल में (अक्सर) और अब सक्रिय burrowing नहीं है. 2 घंटे माप दूसरा परीक्षण पर लिया आधारभूत प्रदर्शन के लिए संतुलित समूहों फार्म का उपयोग करें. ¹⁷ अभ्यास के साथ बढ़ जाती है burrowing के रूप में, baselining भी चूहों और अधिक स्थिर asymp तक पहुँचने के लिए मदद करता हैtotic प्रदर्शन जो उपचार के प्रभाव को बेहतर पता चलता है.
3. परीक्षण
   परीक्षण के लिए, उपचार के बाद प्रशासित रहे हैं चूहों burrowing परीक्षण वास्तव में baselining चरण में के रूप में एक ही दिया जाता है. यदि burrowing परीक्षण करने के लिए लंबे समय से इस्तेमाल किया जा रहा है, यह सिफारिश की है कि कम से कम 48 घंटे अलग परीक्षण प्रक्रिया के अधिक जोखिम के कारण प्रदर्शन में गिरावट को रोकने के लिए.
4. नोट
   बिल में पिंजरे फर्श पर burrowed भोजन की जगह नहीं है. यहां तक ​​कि अगर माउस कुछ भी नहीं burrowed है, वजन प्रक्रिया प्रदर्शन के रूप में आप अगर burrowing हुआ था, वजन द्वारा कारण अशांति व्यवहार को प्रोत्साहित करने के लिए, और चूहों जो पहले से ही सब्सट्रेट के कुछ burrowed है अक्सर के बाद नए उत्साह के साथ burrowing शुरू होगा जाता है प्रक्रिया वजन.

2. परिणाम की उम्मीद

C57 ~ बीएल / 6 चूहों पहले दो घंटे में 70 ग्राम के आसपास आम तौर पर बिल, और 200 ग्राम के निकटरातोंरात. Hippocampal lesioned चूहों अक्सर बिल कम से कम 5 ¹¹ g (चित्रा 2). Prion रोग ^1,2 burrowing रोकता है, के रूप में lipopolysaccharide ²⁰ प्रशासन करता है . Burrowing रोगग्रस्त मस्तिष्क homogenate के इंजेक्शन के बाद 10-12 सप्ताह में prion रोग (scrapie), का पता लगा सकते हैं जबकि नैदानिक ​​लक्षण केवल 22 ¹³ हफ्तों में दिखाई देते हैं. (चित्रा 3). Burrowing पोटेशियम आयन चैनल ¹⁰ सब यूनिटों के ¹⁵ और मतभेदों को नाक आउट तनाव संवेदनशील होना दिखाया गया है.

चित्रा 2 भोजन छर्रों (medians और अन्तःचतुर्थक पर्वतमाला) नियंत्रण और hippocampal lesioned चूहों से दो घंटे में burrowed का वजन. बाद काफी नियंत्रण से कम (पी .०,००१ =) burrowed.

चित्रा 3 का वजन.भोजन छर्रों (मतलब है) नियंत्रण और scrapie संक्रमित चूहों द्वारा रातोंरात burrowed. बढ़ जाती है Burrowing (अभ्यास के साथ) सप्ताह 7 से 10 के बाद इंजेक्शन दोनों समूहों में, लेकिन सप्ताह से scrapie समूह में 12 burrowing में गिरावट आती है और समूहों के बीच अंतर सांख्यिकीय महत्वपूर्ण मतलब के दो मानक त्रुटियों से अधिक हो जाता है.

3. चर्चा

चूहों, gerbils, hamsters और मिस्र के काँटेदार चूहों ⁸ - हम कृन्तकों के अन्य प्रजातियों में burrowing परीक्षण किया है. सभी लेकिन बाद बजरी या रेत जैसे स्थलीय substrates के बिल पर्याप्त मात्रा में प्रेरित किया जा सकता है, लेकिन भोजन छर्रों के burrowing स्थलीय सामग्री के साथ व्यापक अनुभव के बाद भी बहुत कम था,. चूहों से इस अंतर के लिए कारण ज्ञात नहीं है. के बाद यह काम किया गया था, यह पाया गया है कि वास्तव में मिस्र के काँटेदार चूहों जंगली में बिलों नहीं करते, वे बिलों gerbils के द्वारा बनाई गई, भी उनके प्राकृतिक हेक्टेयर की सतह पर कब्जाbitat अक्सर हार्ड रॉक है. नैरोबी में हाल ही के अवलोकन से पता चला है कि, जीनस Acomys के भीतर, विल्सन काँटेदार (Acomys wilsoni) माउस और पेर्सिवल काँटेदार माउस (Acomys percivali), जो जंगली में बिल करते हैं भी प्रयोगशाला में burrowed.

4. नेस्टिंग

1. उपकरण

इस परीक्षा में अलग - अलग पिंजरों में किया जाता है, उसी के रूप में बिल खोदने के लिए इस्तेमाल लोगों उपयुक्त हैं. सामान्य बिस्तर 0.5 सेमी की गहराई के लिए फर्श को कवर किया जाना चाहिए. (गहराई में भिन्नता है, और बहुत गहरे बिस्तर, घोंसला निर्माण को प्रभावित कर सकता है). प्रत्येक पिंजरे "Nestlet" दबाया कपास बल्लेबाजी (Ancare) के 5 सेमी वर्ग के साथ आपूर्ति की है.

2. प्रक्रिया

चूहे व्यक्तिगत एक घंटे के बारे में घोंसले के शिकार पिंजरों में रखा जाता है अंधेरे चरण से पहले, और परिणाम अगली सुबह का मूल्यांकन कर रहे हैं. Burrowing के साथ, और इसी तरह के कारणों के लिए, समय महत्वपूर्ण नहीं है.

3.स्कोरिंग

घोंसले पैमाने 5 बिंदु (आंकड़े 4-8) पर मूल्यांकन कर रहे हैं, और untorn Nestlet की राशि भी ⁵ तौला है.

1. Nestlet काफी हद तक अछूता है (> बरकरार 90%) है.
2. Nestlet आंशिक रूप से फाड़ा है (50-90 बरकरार शेष%).
3. Nestlet ज्यादातर कटा हुआ है, लेकिन अक्सर वहाँ कोई पहचान घोंसला साइट है: <Nestlet के 50% बरकरार है, लेकिन <90% पिंजरे फर्श क्षेत्र के एक चौथाई के भीतर है, यानी कपास लेकिन पिंजरे के आसपास घोंसला प्रसार में एकत्रित नहीं है . नोट: सामग्री कभी कभी एक मोटे तौर पर परिभाषित घोंसला क्षेत्र में हो सकता है लेकिन महत्वपूर्ण परिभाषा है कि 50-90% कटा हुआ किया गया है.
4. एक पहचान है, लेकिन फ्लैट घोंसला:> Nestlet के 90% फटे है, सामग्री एक घोंसला में पिंजरे फर्श क्षेत्र के एक चौथाई के भीतर एकत्र हुए है, लेकिन घोंसला के साथ फ्लैट है, माउस शरीर ऊंचाई की तुलना में उच्च (दीवारों पर curled अपनी परिधि के 50% से कम पर) की ओर.
5. (निकट) सही nस्था:> Nestlet के 90% फाड़ा है, घोंसला माउस अपनी परिधि के 50% से अधिक शरीर की ऊंचाई पर अधिक से अधिक दीवारों के साथ एक गड्ढा है.

मापदंड अंतर विभाजन कहाँ सहमत नहीं हूँ. उदाहरण के लिए एक unshredded 0.7g टुकड़ा के साथ एक परिपूर्ण घोंसला 4.5 स्कोर होगा.

चित्रा नेस्ट 4. 1 स्कोर

चित्रा 5. नेस्ट 2 स्कोर

चित्रा 6. नेस्ट 3 स्कोर

7 चित्रा नेस्ट स्कोर 4.

8 चित्रा नेस्ट SCOR.5 ई

4. परिणाम की उम्मीद

दोनों पुरुषों और महिलाओं घोंसले बनाने के लिए, के रूप में अपने उद्देश्य के रूप में के रूप में अच्छी तरह से तापमान प्रजनन के साथ संबद्ध किया जा रहा है. C57BL 6 / चूहों के लिए, पुरुषों और महिलाओं के लिए घोंसला स्कोर को एक ही श्रेणी में हैं, यद्यपि हम एक ही प्रयोग में एक नियंत्रित तुलना नहीं किया है. हाल C57BL 6 / चूहों घोंसला निर्माण पर 4-5 स्कोर, लेकिन जब हिप्पोकैम्पस lesioned औसत स्कोर 1-2 के आसपास होगी, 3 के एक स्कोर (चित्रा 9) पार की संभावना नहीं है. नेस्टिंग भी 10-12 ^1,2,16 सप्ताह के आसपास prion रोग के प्रति संवेदनशील साबित ^हुई .

9 चित्रा पृष्ठीय, वेंट्रल और पूरा हिप्पोकैम्पस के घावों के साथ नियंत्रण चूहों और चूहों के लिए नेस्ट स्कोर (medians और अन्तःचतुर्थक पर्वतमाला ). केवल पूरा lesioned चूहों के घोंसले के शिकार के निषेध दिखा, तो चयनात्मक पृष्ठीय और ventr के प्रभावअल क्षेत्रों के उप दहलीज लेकिन additive के दिखाई देते हैं.

5. जमाखोरी

1. उपकरण

"घर अड्डों" की एक श्रृंखला तार की जाली से बना ट्यूबों के लिए जुड़े हुए हैं, बाहर का अंत है जहां खाद्य छर्रों रखा जाता है और अस्थायी रूप से एक लकड़ी प्लग द्वारा प्रॉक्सिमल अंत में स्थायी रूप से सील कर दिया. यह ट्यूब में प्रवेश से पहले घर आधार करने के लिए अनुकूलन occurred7 है चूहों को रोकने के लिए प्रयोग किया जाता है.

तंत्र (10 चित्रा) विभिन्न तरीकों से बनाया जा सकता है, के रूप में लंबे समय के रूप में बुनियादी सिद्धांतों का पालन कर रहे हैं. हमारा 8 लकड़ी के बक्से की एक पंक्ति के होते हैं, प्रत्येक 30 x 13 x पारदर्शी Perspex lids के साथ 15 सेमी. हर एक पानी की बोतल के साथ आपूर्ति की है, और पीठ में एक छेद में जो होर्डिंग ट्यूब धक्का - सज्जित है. ट्यूबें काले प्लास्टिक, 10 सेमी लंबे, 40 मिमी व्यास के बने होते हैं, एक तार जाल ट्यूब, 45 सेमी लंबा, 4 सेमी व्यास के लिए शामिल हो गए, 50 सेमी की कुल लंबाई के रूप में. जाल 13 मिमी वर्ग के होते हैं,और meshes के छोटे जाल में छेद बनाने के लिए और भोजन के माध्यम से गिर छर्रों को रोकने गलत गठबंधन साथ एक डबल रोल है. यदि 6 मिमी वर्ग जाल उपलब्ध है यह एक बेहतर सामग्री के रूप में एक रोल के लिए पर्याप्त होगा. ट्यूब, जहां भोजन छर्रों रखा जाता है बाहर का अंत बंद है. प्रॉक्सिमल अंत में एक हटाने योग्य लकड़ी के प्लग के साथ बंद है.

होर्डिंग ट्यूबों में 10 चित्रा चूहे

2. प्रक्रिया

1. आमतौर पर, होर्डिंग बहुत चर पहली बार है और कुछ चूहों सब पर ढेर नहीं हो सकता है. होर्डिंग, burrowing तरह अभ्यास के साथ सुधार. इसलिए, जहां प्रयोगात्मक डिजाइन की अनुमति देता है, baselining सत्र सबसे पहले एक इलाज दिलाई है दिए जाते हैं. जाहिर है, यह व्यावहारिक अगर स्वतंत्र चर की सहज है एक माउस (गैर सशर्त) उत्परिवर्ती के साथ के रूप में या जब अलग माउस उपभेदों का परीक्षण नहीं है.
2. एक चूहे में डाल दिया हैप्रत्येक दिन में जल्दी बॉक्स यह आदत डालना. बॉक्स एक गत्ता सुरंग है जो वास्तविक समूह के घर पिंजरे में कम से कम एक रात के लिए किया गया है, भी गंदे बिस्तर के एक उदार भाग बनाने के लिए यह "घर" की तरह लग रहा है के साथ प्रदान की जाती है. होर्डिंग ट्यूब के लिए प्रवेश एक लकड़ी के डाट के साथ शाम तक रोका है. 100 ग्राम भोजन छर्रों (छोटे और बड़े का एक मिश्रण) होर्डिंग ट्यूब के बाहर अंत में रखा गया है (उन्हें गिरने में खड़ी आयोजित इस ट्यूब के साथ दूसरे छोर पर). सुनिश्चित करें कि माउस हल्का भूख से पहले परीक्षण शुरू होता है है, घर बॉक्स भोजन के साथ नहीं प्रदान की जाती है.
3. बस अंधेरे चरण के शुरू होने से पहले, लकड़ी के डाट हटाने के लिए माउस होर्डिंग ट्यूब के लिए उपयोग की अनुमति है. अगली सुबह (फिर, समय महत्वपूर्ण नहीं है) को इकट्ठा करने और सभी भोजन छर्रों जो घर आधार बॉक्स में hoarded है तौलना.

6. परिणाम की उम्मीद

महिला C57BL / 6 चूहों का प्रयोग, मंझला hoarded राशि के आसपास होगा50-70 जी Hippocampal घावों जोरदार hoarding11 दबाने, जबकि prefrontal प्रांतस्था घावों केवल एक कमजोर ¹² प्रभाव (11 चित्रा) है.

11 चित्रा खाना छर्रों का वजन नियंत्रण और औसत दर्जे का prefrontal प्रांतस्था lesioned चूहों (medians और अन्तःचतुर्थक पर्वतमाला) द्वारा hoarded. हालांकि medians काफी अलग है, नियंत्रण में उच्च परिवर्तनशीलता का मतलब परिणाम सांख्यिकीय महत्वपूर्ण से दूर है (= पी 0.3).

इन परीक्षणों अत्यंत को चलाने के लिए सरल कर रहे हैं, लेकिन प्रभाव आकार बहुत बड़े हैं, उन्हें बेहद उपचार, तनाव मतभेद, आदि वे रसेल और Burch ³ "रु 18 के" शोधन "पहलू के अनुरूप करने के लिए संवेदनशील बना. दरअसल, burrowing जैसे परीक्षणों पर अच्छा प्रदर्शन करने के लिए पशुओं में अच्छा सामान्य स्वास्थ्य का संकेत किया जा रहा है. इसलिए इस पशु कल्याण के मूल्यांकन के लिए एक अच्छा परीक्षण किया जा सकता है.

प्रयोगशाला कृन्तकों के लिए पर्यावरण संवर्धन के महत्व को अच्छी तरह से इन दिनों में मान्यता प्राप्त है. घोंसले के शिकार सामग्री का प्रावधान अब कई जानवर घरों में मानक अभ्यास है, और यह आसान नहीं है. उत्साह के साथ जो चूहों के बिल एक संभावित उत्कृष्ट संवर्धन, लेकिन दुर्भाग्य से एक "आत्म reloading के बिल" जो प्रदान यह अभी तक विकसित नहीं किया गया है की एक व्यावहारिक तरीका होगा burrowing बनाता है. चाहे चूहों पाते होर्डिंग समृद्ध अभी तक निर्धारित नहीं किया गया है.

तंत्र के माप थोड़ा पाठ में निर्दिष्ट उन लोगों के लिए अलग (संयुक्त राज्य अमेरिका प्रयोगकर्ताओं के लिए उपयोगी), लेकिन व्यापक मतभेद परहेज किया जाना चाहिए किया जा सकता है. हालांकि, कुछ मामलों में अन्य प्रयोगकर्ताओं विभिन्न निर्माण यहाँ वर्णित उन से बेहतर काम मिल सकता है.

सभी व्यवहार मापन के लिए के रूप में, चूहों को देखने के परीक्षण किया जाना चाहिए अगर अपनी गतिविधि का स्तर सामान्य हो रहे हैं, निष्क्रियता के रूप में स्पष्ट रूप से एक detrim होगाental प्रजातियों विशिष्ट व्यवहार पर प्रभाव. जब scrapie संक्रमित चूहों बिगड़ा burrowing और घोंसले के शिकार दिखा रहे थे, अपनी गतिविधि का स्तर सामान्य थे (एक खुले मैदान उपकरण में परीक्षण). दरअसल, सक्रियता की अवधि होती है लगभग 2-4 सप्ताह के बाद इन प्रजातियों ^ठेठ व्यवहार पहले 2 प्रभावित कर रहे हैं.

मजबूत burrowing पर hippocampal घावों द्वारा उत्पादित हानि, घोंसले के शिकार और होर्डिंग, जो सभी के प्रजातियों विशिष्ट व्यवहार कर रहे हैं, जो इन घावों के ऐसे अच्छी तरह से स्थापित इफेक्ट होते हैं स्थानिक सीखने और memory9 में impairments के पूरक. वे ¹⁴ ई. की विशेषता दैनिक जीवन की गतिविधियों में impairments के लिए बराबर होना दिखाई देते हैं .

इन प्रजातियों ठेठ परीक्षण को अच्छी तरह से अल्जाइमर और अन्य neurodegenerative ^{रोगों} 14 के लिए उपचार के लिए preclinical स्क्रीनिंग में महान उपयोग के साबित हो सकता है . कई मानव मस्तिष्क विकारों में एक हानि या कम करने की क्षमता सामान्य पूर्व संध्या प्रदर्शन करने के लिएryday कार्य के रूप में संज्ञानात्मक हानि की तरह रोग के अन्य सुविधाओं के रूप में महत्वपूर्ण है. विशेष रूप से, इस नुकसान देखभालकर्ताओं और महान सामाजिक आर्थिक बोझ है यह तो अक्सर लगाता की भागीदारी की जरूरत हो सकती है.

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय के लिए ओपन एक्सेस धन उपलब्ध कराने के लिए वेलकम ट्रस्ट. रॉबर्ट Deacon ऑक्सफोर्ड OXION समूह, वेलकम ट्रस्ट अनुदान WT084655MA द्वारा वित्त पोषित के एक सदस्य है.

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