Abstract
PTMScan ®-technologie van Cell Signaling Technology (CST) combineert de methodologieën voor antilichaam-gebaseerde peptide verrijking met vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS) om kwantitatief het profiel van post-translationele modificaties (PTMs) zoals fosforylering (PhosphoScan ®) , ubiquitinering (UbiScan ®) en acetylering (AcetylScan ®).
PTMScan ®-technologie maakt gebruik van CST ™ Motief Antilichamen tegen vooraf gedefinieerde groepen van post-translationeel gemodificeerde peptiden te scheiden van ongewijzigde peptiden in verteerd cel-extracten. Dit immuno-zuivering techniek wordt gecombineerd met LC-MS/MS te identificeren en te kwantificeren veranderingen in gemodificeerd peptide overvloed. Motif antilichamen zijn beschikbaar om specifiek te binden fosfo (Tyr, Ser, Thr)-peptiden, geacetyleerd peptiden, of ubiquitine-gelabelde peptiden, waardoor de kwantitatieve profilering van de fosforylering, acetylering, of ubiquitinatie de status van de cel.
MAPK, mTOR en de PI3K/AKT-banen verhindert zijn belangrijke signaalwegen stroomafwaarts van oncogene receptor tyrosine kinases (RTK's) geactiveerd. Al deze routes te activeren AGC kinase familie leden, waaronder Akt, RSK en p70 S6 kinasen, waarvan eiwitsubstraten worden gefosforyleerd op de RxRxxS / T-motief.
In een recente studie phosphoproteomic geschreven door wetenschappers van CST (Sci. Signal (2010) 24, 3 (136):. Ra64), werden meer dan 300 vermeende substraten voor deze AGC familie kinasen geïdentificeerd in drie cellijnen, elk aangedreven door een van beide EGFR, c-Met, of PDGFR. De experimentele aanpak in dienst PhosphoScan ®-technologie met behulp van de RxRxxS / T Motif antilichaam als een affiniteit reagens om selectief immunoprecipitaat gefosforyleerd substraten van Akt, RSK en p70 S6 kinases. Het gebruik van gerichte geneesmiddelen tegen kanker met remmers die specifiek zijn voor PI3K, mTOR, en MEK toegestaan voor in kaart brengen van het signaleringsnetwerk stroomafwaarts van deze RTK's. Ondergronden opgenomen eiwitten die betrokken zijn bij vele cellulaire functies, zoals steigers, eiwitstabiliteit, metabolisme, mensenhandel en beweeglijkheid.
