The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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This translation into Hindi was automatically generated through Google Translate.
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1Department of Molecular Genetics and Cell Biology, University of Chicago, 2Department of Human Genetics, University of Chicago
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Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos. J. Vis. Exp. (9), e408, doi:10.3791/408 (2007).
अंडे से निपटने
तैयार
Windowing
वैकल्पिक: न्यूरल ट्यूब कल्पना करने के लिए, भ्रूण के नीचे 26 गेज सुई (रक्त अंगूठी के बाहर से भ्रूण के तहत सुई सम्मिलित) के साथ स्याही समाधान इंजेक्षन. भारत स्याही 01:05 हैंक्स या तुलनीय बाँझ बफर समाधान के साथ पतला होना चाहिए.
इंजेक्शन और electroporation
नोट: टिप बड़ा तो न्यूरल ट्यूब व्यास नहीं है सावधान रहो. सामान्य में, आप अगर इष्टतम टिप आकार कितना आसान या मुश्किल यह केशिका में तरल खींच द्वारा हासिल किया गया है बताने के लिए सक्षम हो जाएगा. यदि वहाँ चरम प्रतिरोध है, खोलने शायद बहुत छोटा है और टिप फिर से टूट जाना चाहिए ऊपर. अगर वहाँ कम या कोई प्रतिरोध है, उद्घाटन बहुत बड़ी है और एक नई सुई का इस्तेमाल किया जाना चाहिए.
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इस प्रोटोकॉल HH10 लड़की भ्रूण की न्यूरल ट्यूब electroporation के लिए कदम गाइड द्वारा एक कदम प्रदान करता है. तकनीक दिखाने के अलावा, अंडे का भंडारण और हैंडलिंग के लिए दिशा निर्देश भी प्रदान की जाती है. इस तकनीक आनुवांशिक विश्लेषण के लिए आवेदनों की एक व्यापक रेंज है और प्रयोगों की आसानी और कम लागत उन्हें कई प्रयोगशालाओं के लिए संभव बनाता है.
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| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chicken egg incubator | humidified, set to 37.80°C (100F). | ||
| Pulse generator | Genetronics | BTX T820 | Square wave generator or comparable |
| Electrodes | our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart | ||
| Connecter cables | |||
| Micromanipulator | |||
| Dissecting scope | with large working distance | ||
| Glass capillaries | and capillary puller or commercial glass needles | ||
| Leibovitz’s L-15 media | |||
| chicken eggs | fertilized | ||
| Curved scissors | |||
| 10 ml syringe | |||
| Large bore needle | 16-18G | ||
| Mouth pipette | |||
| India ink | |||
| Insulin syringe/syringe | |||
| Plasmid DNA | 1Âμg/Âμl in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye |
1. Itasaki, N., Bel-Vialar, S. and Krumlauf, R. 'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression. Nat Cell Biol. 1, E203-7 (1999).
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ReplyPosted by: AnonymousNovember 29, 2007, 6:33 PM