كروماتوغرافيا طبقة رقيقة

المصدر: لارا الحريري وأحمد باسابرين من جامعة ماساتشوستس أمهيرست ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية

1. تأثيرات تكوين المرحلة المتنقلة على الفصل المركب< فئة الزر ="توسيع">توسيع

   في هذا القسم من المختبر ، ستستخدم TLC لمقارنة مدى قدرة الهكسان النقي ومزيج من 60٪ من الهكسان و 40٪ أسيتات الإيثيل على فصل الفينول وحمض البنزويك وأثير البوتيل فينيل عن طريق قياس المسافة التي قطعها المركب في كل مذيب.

   • قبل بدء المختبر ، ارتد معطف المختبر ونظارات السلامة وقفازات النتريل. ملحوظة: الهكسان وخلات الإيثيل كلاهما متطاير وسام وقابل للاشتعال ، لذا اعمل معهما دائما في غطاء الدخان. قم بتغيير القفازات إذا حصلت على مذيب عليها ، حيث يتخلل الهكسان وخلات الإيثيل قفازات النتريل في غضون دقائق.
   • الآن ، احصل على منشفة ورقية وضعها على سطح الطاولة. التقط بعناية لوحة TLC باستخدام ملاقط في نهاية اللوحة. ملاحظه: أمسك دائما ألواح TLC من الحواف أو في الأعلى باستخدام ملاقط لتجنب إتلاف هلام السيليكا أو تلويثه.
   • ابحث عن الرقائق أو الخدوش في هلام السيليكا واحصل على لوحة جديدة إذا لزم الأمر. لا بأس إذا كان هناك القليل من التقطيع في طرف واحد فقط ، حيث يمكن أن يكون هذا هو الأعلى.
   • ضع اللوحة على المنشفة الورقية في غطاء الدخان ، وضع مسطرة مترية بجانبها. استخدم قلم رصاص من الجرافيت لعمل علامة صغيرة برفق على هلام السيليكا ~ 1 سم من أعلى اللوحة. اكتب "100" على اللوحة فوق العلامة.
   • بعد ذلك ، ضع علامة برفق على اللوحة 1 سم فوق القاع على كلا الجانبين. تتبع بعناية خطا مستقيما بين العلامات السفلية لعمل خط البداية.
   • بعد ذلك ، أضف 3 علامات صغيرة متباعدة بشكل متساو إلى خط البداية مع وجود علامات خارجية على بعد 0.5 سم على الأقل من جوانب اللوحة. ملاحظه: من المهم أن يكون هلام السيليكا غير تالف هنا ، لذلك إذا خدشه بالقلم الرصاص ، فقم بإعداد طبق جديد.
   • الآن ، تتبع الخطوط العريضة للوحة TLC في دفتر ملاحظات المختبر الخاص بك وانسخ العلامات الموجودة على اللوحة بدقة. قم بتسمية العلامات الثلاث على أنها "الفينول" و "حمض البنزويك" و "إيثر بوتيل فينيل". قد ترغب أيضا في تسمية العلامات الموجودة على اللوحة نفسها.
   • قم بإعداد لوحة TLC ثانية تحمل علامة "60/40" بنفس الطريقة. الآن ، أحضر الألواح الملصقة إلى المقعد المشترك وحدد موقع محاليل 1 مجم / مل من الفينول وحمض البنزويك والأثير بوتيل فينيل في الإيثانول.
   • اغمس شعرية نظيفة في أحد الحلول الثلاثة. ربت على الشعيرات الدموية بشكل قصير وخفيف بشكل مباشر مقابل التقاطع بين خط البداية وعلامة هذا المركب. يجب أن تكتشف مرتين لكل مركب.
   • استخدم نفس الشعيرات الدموية لاكتشاف نفس الحل على لوحة TLC الثانية. يجب ألا يزيد قطر البقع عن 2 مم. ثم تخلص من الشعيرات الدموية وأغلق القارورة.
   • حدد الحلين الآخرين على الألواح ، بنفس الطريقة ، باستخدام الشعيرات الدموية النظيفة. احرص على عدم تلويث المحاليل بهم. ملحوظة: إذا كانت البقعة خفيفة جدا أو صغيرة جدا ، فانتظر حتى تجف ، ثم ضع نفس المحلول فوق البقعة الجافة. إذا كانت البقعة لا تزال رطبة ، فإن العمل الشعري يمكن أن يجعلها واسعة جدا ومخففة.
   • بمجرد عمل ثلاث نقاط على كل لوحة ، تخلص من الشعيرات الدموية وأعد الألواح إلى غطاء المحرك. حافظ على الألواح مسطحة أثناء تجفيفها.
   • الآن ، قم بتسمية جرة سعة 50 مل "هكسان 100٪" وأحضر البرطمان وغطاءه وأسطوانة متدرجة سعة 10 مل إلى غطاء المذيب.
   • قم بقياس 2-3 مل من الهكسان النقي باستخدام الأسطوانة المتدرجة واسكبه في البرطمان لملئه حتى عمق 0.62 - 0.7 سم. قم بتغطية الزجاجة والبرطمان والعودة إلى غطاء الدخان.
   • قم بتسمية جرة ثانية سعة 50 مل "60٪ هكسان ، 40٪ أسيتات إيثيل" وأحضرها وأسطوانة نظيفة متدرجة إلى غطاء المذيب. قم بقياس 2-3 مل من خليط 60/40 في البرطمان وأعده إلى غطاء الدخان.
   • ضع الألواح بجوار البرطمانات لمقارنة الموضع النسبي للمذيب والبقع. يجب أن يكون مستوى المذيب أقل من البقع لكل لوحة.
   • بعد ذلك ، احصل على ثلاث قطع من ورق الترشيح ، ضع ورق ترشيح في وضع مستقيم على الحائط في كل جرة ، ثم قم بتغطية البرطمانات بإحكام.
   • ضع كل لوحة أولية فوق العلامة حتى تتمكن من التعرف عليها لاحقا. تأكد من أن أوراق الترشيح في البرطمانات أصبحت مشبعة بالمذيبات وأن البقع الموجودة على الألواح جافة تماما.
   • الآن ، افتح جرة الهكسان بنسبة 100٪ واستخدم الملقط لوضع اللوحة 100 برفق في البرطمان ، مع الحفاظ على مستوى اللوحة مع سطح المذيب عند دخولها المذيب. أغلق البرطمان بإحكام ، مع الحرص على عدم تزخرف اللوحة.
   • اترك البرطمان ثابتا بينما ينتقل المذيب إلى أعلى اللوحة. عادة ما يستغرق التطوير في الهكسان النقي حوالي 7-10 دقائق. راقب اللوحة للتأكد من أن المذيب لا يصل إلى الأعلى.
   • عندما تكون واجهة مذيب الهكسان النقي على بعد حوالي 1 سم من أعلى اللوحة ، استرجعها باستخدام الملقط. ضعه على المنشفة الورقية بحيث يكون هلام السيليكا متجها لأعلى وقم بتمييز مقدمة المذيب بسرعة بخط وقلم رصاص عبر اللوحة. اترك اللوحة ملقاة بشكل مسطح مع تبخر المذيب.
   • ضع اللوحة الأخرى في مادة الطلاء 60/40 بنفس الطريقة. انتظر حتى يصبح الجزء الأمامي من المذيب للوحة 60/40 على بعد حوالي 1 سم من الأعلى ، ثم استرجعه وقم بتمييز مقدمة المذيب بسرعة بنفس الطريقة.
   • بمجرد أن تجف لوحة الهكسان بنسبة 100٪ تماما ، التقطها بالملاقط وأحضرها وقلم رصاص إلى مصباح الأشعة فوق البنفسجية على المقعد المشترك.
   • ضع اللوحة أسفل المصباح وقم بإضاءةها بالأشعة فوق البنفسجية. سوف تتوهج اللوحة باللون الأخضر بسبب علامة الفلورسنت في طبقة هلام السيليكا. البقع الداكنة هي المركبات.
   • حدد بعناية كل بقعة بالقلم الرصاص ، حتى لو لم تتحرك بعيدا.
   • ثم أطفئ المصباح وأحضر اللوحة إلى غطاء تطوير اليود. افتح حجرة اليود. استخدم الملقط لوضع اللوحة برفق في وضع مستقيم في حجرة اليود ، ثم قم بتغطية الغرفة مرة أخرى.
   • انتظر 3-4 دقائق حتى يبقى بخار اليود في البقع. ثم استرجع اللوحة بالملاقط ، وأغلق الغرفة ، وحدد النقاط البنية والصفراء على اللوحة. سوف تتلاشى هذه البقع ، لذا ضع علامة عليها بسرعة.
   • تصور اللوحة الجافة 60/40 تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية ثم باستخدام بخار اليود بنفس الطريقة. ملاحظه: لتجنب ردود الفعل الجانبية ، افحص دائما الألواح تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية قبل تعريضها لليود.
   • الآن ، انسخ البقع وواجهات المذيبات بدقة على الرسومات المقابلة للوحات في دفتر المختبر الخاص بك. لكل لوحة ، قم بقياس وتسجيل ارتفاع مقدمة المذيب بالنسبة لخط البداية.
   • أخيرا، قم بقياس المسافة بين مركز كل بقعة وخط البداية، وقم بتسجيلها في دفتر ملاحظات المختبر. يمكنك الآن الانتقال إلى الجزء التالي من المختبر.
2. تحديد مركب غير معروف<زر class="توسيع">توسيع

   في النصف الثاني من المختبر ، ستستخدم TLC لمعرفة ما يوجد في مسكن غير معروف. يمكن أن يحتوي على واحد أو أكثر من هذه المركبات: الأسبرين والكافيين والأسيتامينوفين. هذه المركبات شديدة القطبية ، لذلك ستستخدم خليطا معدا مسبقا من 90٪ أسيتات إيثيل و 10٪ هكسان كمزلئ.

   ستقوم بتشغيل المركبات المرجعية الثلاثة والمجهول كلها على نفس اللوحة. لاحقا، ستستخدم قيم الترددات اللاسلكية للمركبات المرجعية لتحديد المجهول. أولا ، تحقق جيدا من المواد غير المعروفة التي تم تعيينك لتحليلها قبل البدء.

   • الآن ، ضع منشفة ورقية نظيفة في غطاء المحرك واحصل على لوحة TLC جديدة. قم بإعداد العلامة العلوية وخط البداية بنفس الطريقة السابقة. اصنع أربعة علامات متباعدة بشكل متساو على اللوحة ، وتأكد من أن العلامات الخارجية على بعد 0.5 سم على الأقل من الحواف.
   • ارسم نسخة طبق الأصل من اللوحة في دفتر المختبر الخاص بك وقم بتسمية علامات القراد على أنها "أسبرين" و "أسيتامينوفين" و "كافيين" و "غير معروف".
   • الآن ، أحضر طبقك إلى المقعد المشترك. محاليل موضعية من الأسبرين والأسيتامينوفين والكافيين والمجهول الذي تم تعيينه لك على العلامات المناسبة باستخدام الشعيرات الدموية النظيفة لكل محلول. ملاحظه: عندما تكتشف المحلول غير المعروف ، لا تغمس الشعيرات الدموية بعيدا في قارورة المحلول لتجنب انسداد الشعيرات الدموية بمادة غير قابلة للذوبان من مادة غير معروفة.
   • تخلص من الشعيرات الدموية وأغلق القوارير قبل إعادة اللوحة إلى غطاء الدخان. ضع الطبق على منشفة ورقية لإنهاء التجفيف.
   • بعد ذلك ، قم بتسمية برطمان نظيف سعة 50 مل من اللولب "90٪ أسيتات إيثيل ، 10٪ هكسان" ، وأحضره في أسطوانة نظيفة متدرجة إلى غطاء المذيب.
   • ضع 2-3 مل من محلول 90/10 في البرطمان والعودة إلى غطاء الدخان. تأكد من أن مستوى المذيب سيكون أقل من البقع الموجودة على اللوحة. ثم ضع ورق ترشيح نظيف في وضع مستقيم في البرطمان وأغلقه بإحكام.
   • بمجرد أن تجف لوحة TLC وتشبع ورق الترشيح ، ضع اللوحة بعناية في المذيب. ملاحظه: من الضروري الحفاظ على مستوى اللوحة عند القيام بذلك. إذا كانت واجهة المذيب قطرية ، فستكون مسافة المذيب المقطوعة مختلفة لكل بقعة ، مما يجعل من المستحيل مقارنة المجهول بصريا بالبقع المرجعية.
   • انتظر حتى تصل مقدمة المذيب إلى 1 سم من أعلى اللوحة. بعد ذلك ، استرجع اللوحة ، وقم بتمييزها كمذيب في الأمام ، واتركها تجف أثناء الاستلقاء بشكل مسطح.
   • بمجرد أن تجف اللوحة ، قم بتخيلها باستخدام ضوء الأشعة فوق البنفسجية وفي غرفة اليود ، وحدد النقاط بالقلم الرصاص.
   • يمكن أن تكون المادة غير المعروفة مزيجا من المركبات ، لذا ابحث بعناية عن البقع التي تتماشى مع جميع النقاط المرجعية الثلاثة.
   • بعد ذلك ، انسخ البقع بدقة على رسم اللوحة في دفتر المختبر الخاص بك. قم بقياس وتسجيل ارتفاع مقدمة المذيب والبقع المتعلقة بخط البداية.
   • عند الانتهاء ، استرجع أوراق الترشيح المشبعة بالمذيبات من البرطمانات واتركها تجف في الغطاء.
   • صب المذيبات المتبقية في النفايات العضوية القياسية ، واغسل الأواني الزجاجية باتباع الطرق المعتادة في المختبر ، ووضع معدات المختبر الخاصة بك بعيدا.
   • تخلص من ألواح TLC المستخدمة في سلة مهملات المختبر أو مع النفايات الزجاجية ، اعتمادا على مادة الدعم.
   • أخيرا ، بمجرد أن تجف المرشحات ، تخلص منها مع أي سلة مهملات متبقية.
3. ResultsExpand
   • احسب قيم R_f للفينول وحمض البنزويك وإثير البوتيل فينيل المملوثة بالهكسان بنسبة 100٪. لكل مركب على لوحة TLC ، قم بقياس المسافة من خط البداية إلى مركز مكانه. ثم اقسم هذه القيمة على المسافة من خط البداية إلى مقدمة المذيب.
   • فقط بوتيل فينيل الأثير تحرك مسافة قابلة للقياس من خط البداية ، وهو ما يتوافق مع كونه الأقل قطبية. من أجل الفصل الفعال ، يجب أن تختلف قيم R_f بمقدار 0.3 - 0.7. وبالتالي ، يمكننا أن نستنتج أن الفينول وحمض البنزويك قطبيان جدا بحيث لا يمكن فصلهما بشكل فعال بواسطة مذيب لا قطبي مثل الهكسان النقي.
   • احسب قيم R_f للوحة التي قمت بتشغيلها في خليط 60/40 من الهكسان وخلات الإيثيل. أسيتات الإيثيل هو مذيب قطبي معتدل ، لذلك تنتقل المركبات إلى مسافة أبعد وتتباعد عن بعضها البعض على اللوحة.
   • يظهر ترتيب الفصل أن حمض البنزويك ، وهو المركب الأكثر قطبية ، كان له أعلى تقارب مع هلام السيليكا ، في حين أن إيثر البوتيل فينيل ، وهو المركب الأقل قطبية ، كان له أقل تقارب لهلام السيليكا. هذا يتوافق مع الافتراض القائل بأن المركبات القطبية الأقل تنتقل أبعد في المراحل القطبية الثابتة.
   • انظر إلى اللوحة الثالثة واحسب قيم R_f للأسبرين والأسيتامينوفين والكافيين. الكافيين ، المركب الأكثر قطبية من بين الثلاثة ، سافر على الأقل. سافر الأسيتامينوفين في المرتبة الثانية ، بينما سافر الأسبرين ، الأقل قطبية ، أكثر من غيره.
   • أخيرا ، حدد المركبات الموجودة في المادة غير المعروفة من خلال مقارنة بقعتها أو بقعها بالبقع المرجعية الثلاثة.