كروماتوغرافيا العمود هي تقنية تستخدم عمودا معبأا لفصل المركبات بناء على تفاعلاتها مع الطور الثابت ، والتي عادة ما تكون على شكل حبات مجهرية. تمتلئ الفراغات بين الخرزات بالمذيبات. يسمح فتح العمود للمذيب بالتدفق عبر المرحلة الثابتة. عندما يتم تطبيق خليط على الجزء العلوي من العمود المعبأ متبوعا بمزيد من المذيب ، ينتقل الخليط إلى المرحلة المتحركة ويتدفق عبر المرحلة الثابتة.
يتفاعل كل مكون من مكونات الخليط مع المرحلة الثابتة بطريقة مختلفة. بعض المكونات لها تفاعلات ضعيفة مع المرحلة الثابتة وبالتالي تتحرك بسرعة عبر العمود ، بينما يكون للآخرين تفاعلات قوية مع المرحلة الثابتة وبالتالي تتحرك بشكل أبطأ. هذا يفصل المركبات المختلفة إلى نطاقات يتم جمعها في أجزاء صغيرة. هذا يتيح تنقية كل مركب.
إذن ، ما نوع الخصائص التي يمكن استخدامها لفصل الخلائط؟ واحدة من أكثر الخصائص استخداما هي القطبية. لهذا الغرض ، غالبا ما يستخدم هلام السيليكا ، وهو شكل من أشكال ثاني أكسيد السيليكون ، كمرحلة ثابتة. يتفاعل هلام السيليكا مع المركبات عن طريق تفاعلات ثنائي القطب ثنائي القطب والترابط الهيدروجيني من خلال مجموعات -OH التي تتشكل على سطحه. وبالتالي ، ستتفاعل المركبات القطبية بقوة مع المرحلة الثابتة ، بينما تتفاعل المركبات غير القطبية بشكل ضعيف.
تشمل الخصائص الأخرى التي يمكن استغلالها للفصل الحجم والشحنة وكراهية الماء. الطريقة الشائعة لتحميل المرحلة الثابتة في العمود هي ملاط الطور الثابت والمذيب. بعد ذلك ، يتم تعبئة المرحلة الثابتة عن طريق تدفق المزيد من المذيبات عبر العمود لضغط الملاط. من الضروري أن تكون المرحلة الثابتة معبأة بشكل موحد بدون فقاعات هواء أو قنوات فارغة أو بقع جافة. يمكن أن تعطل هذه التدفق وتسبب اختلاط العصابات.
عند اختيار عمود ، يعتمد القطر على حجم العينة المراد فصلها. يجب أن تغطي العينة الجزء العلوي من العمود بطبقة رقيقة ومتساوية. تؤدي طبقة العينة السميكة إلى نطاقات أوسع. يعتمد طول العمود على مدى جودة انفصال المركبات في المرحلة الثابتة. تتطلب المركبات ذات الصلات المتشابهة للمرحلة الثابتة عمودا طويلا للفصل المناسب. ومع ذلك ، يمكن فصل مزيج من المركبات ذات الصلات المختلفة جدا للمرحلة الثابتة على عمود أقصر.
في هذا المختبر ، سوف تستكشف كروماتوغرافيا العمود عن طريق تعبئة عمود هلام السيليكا وإعداده أولا. بعد ذلك ، ستستخدم العمود الخاص بك لفصل المكونات الملونة في صبغة الطعام الخضراء.
At the end of this lab, students should know...
يتضمن كروماتوغرافيا العمود مرحلة متحركة ومرحلة ثابتة.
تنفصل المركبات بناء على تفاعلاتها مع المرحلة الثابتة.
تتفاعل المركبات بشكل ضعيف مع الطور الثابت أولا لأنها تتفاعل بشكل أقوى مع المرحلة المتحركة وبالتالي تنتقل عبر ال...
2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.