لطخة ساوثرن

النشاف الجنوبي هو تقنية يتم فيها تهجين مسبار الحمض النووي المسمى مع الحمض النووي المستهدف للكشف عن تسلسل معين داخل الجينوم.

سميت هذه التقنية على اسم إدوين ساوثرن ، عالم الأحياء البريطاني الذي طورها لأول مرة.

يتبع الإجراء خمس خطوات رئيسية: الرحلان الكهربائي ، والتمسخ ، ونقل الغشاء ، والتهجين ، والتصور.

أولا ، يتم هضم الحمض النووي الجيني بواسطة إنزيمات التقييد ، ويتم تحميل شظايا الحمض النووي الناتجة على هلام الاغاروز وفصلها باستخدام الرحلان الكهربائي للهلام.

لتمسخ أو فصل الحمض النووي المزدوج الشريطة إلى اثنين من الحمض النووي أحادي الشريطة ، أو ssDNA ، يتم نقع الجل في محلول هيدروكسيد الصوديوم.

ثم يوضع الجل على إسفنجة في محلول تحييد للحمض النووي يحتوي على كلوريد الصوديوم ومحلول تريس ، لإعادة ضبط درجة الحموضة إلى 7.0.

بعد ذلك ، يتم وضع غشاء من النايلون فوق الجل ويثقل بكومة من المناشف الورقية. ينتقل ssDNA إلى الغشاء من خلال العمل الشعري ، بينما يساعد تركيز الملح العالي في محلول المحايد الحمض النووي على الارتباط.

عند تعريضه للإشعاع بالأشعة فوق البنفسجية ، يصبح الحمض النووي مرتبطا تساهميا بالغشاء. هذا يمنع الانتشار ويشل حركة عصابات الحمض النووي.

ثم ينقع الغشاء في محلول من الحمض النووي للحيوانات المنوية السلمون المشوهة. يغلف المحلول الغشاء ويمنع أي ارتباط غير محدد بالحمض النووي للمسبار.

المجسات عبارة عن حمض نووي قصير أحادي الشريطة له تسلسل تكميلي لشظايا الحمض النووي المستهدفة. للتصور ، يتم تمييز المجسات إما بالفوسفور المشع - P-32 ، أو إنزيم يولد منتجا يمكن اكتشافه بسهولة.

عندما يتم نقع الغشاء في محلول عازل يحتوي على المجسات ويتم تسخينه عند 42 درجة مئوية ، فإن ssDNA المستهدف يتزاوج مع الحمض النووي للمسبار التكميلي لتشكيل حمض نووي هجين مزدوج الشريطة.

بعد التهجين بين عشية وضحاها ، يتم غسل الغشاء لإزالة المجسات غير المرتبطة.

بالنسبة للحمض النووي المسمى إشعاعيا ، يتعرض الغشاء لفيلم الأشعة السينية للكشف عنه.

يمكن اكتشاف المجسات المسماة بالإنزيم عن طريق إضافة ركيزة مناسبة وتصور العصابات مع تطور اللون أو اللمعان. نظرا لأن المجسات المسماة سترتبط فقط بتسلسل الحمض النووي محل الاهتمام ، فإن أي نطاق مرئي يشير إلى وجود الحمض النووي المستهدف.