4.5
النشاف الجنوبي هو تقنية يتم فيها تهجين مسبار الحمض النووي المسمى مع الحمض النووي المستهدف للكشف عن تسلسل معين داخل الجينوم.
سميت هذه التقنية على اسم إدوين ساوثرن ، عالم الأحياء البريطاني الذي طورها لأول مرة.
يتبع الإجراء خمس خطوات رئيسية: الرحلان الكهربائي ، والتمسخ ، ونقل الغشاء ، والتهجين ، والتصور.
أولا ، يتم هضم الحمض النووي الجيني بواسطة إنزيمات التقييد ، ويتم تحميل شظايا الحمض النووي الناتجة على هلام الاغاروز وفصلها باستخدام الرحلان الكهربائي للهلام.
لتمسخ أو فصل الحمض النووي المزدوج الشريطة إلى اثنين من الحمض النووي أحادي الشريطة ، أو ssDNA ، يتم نقع الجل في محلول هيدروكسيد الصوديوم.
ثم يوضع الجل على إسفنجة في محلول تحييد للحمض النووي يحتوي على كلوريد الصوديوم ومحلول تريس ، لإعادة ضبط درجة الحموضة إلى 7.0.
بعد ذلك ، يتم وضع غشاء من النايلون فوق الجل ويثقل بكومة من المناشف الورقية. ينتقل ssDNA إلى الغشاء من خلال العمل الشعري ، بينما يساعد تركيز الملح العالي في محلول المحايد الحمض النووي على الارتباط.
عند تعريضه للإشعاع بالأشعة فوق البنفسجية ، يصبح الحمض النووي مرتبطا تساهميا بالغشاء. هذا يمنع الانتشار ويشل حركة عصابات الحمض النووي.
ثم ينقع الغشاء في محلول من الحمض النووي للحيوانات المنوية السلمون المشوهة. يغلف المحلول الغشاء ويمنع أي ارتباط غير محدد بالحمض النووي للمسبار.
الم
يعتبر الفصل الكهربائي لجل الاغاروز مفيدًا جدًا في فصل شظايا الحمض النووي حسب الحجم. يساعد تشغيل سلم الحمض النووي الذي يحتوي على أجزاء ذات طول معروف إل…
حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.