مقالة منهجية

خلق الفئران التجريبية تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني مع إيلاستاز

DOI:

10.3791/1280

⸱

يوليو 23, 2009

 ,  ,  , 
1Department of Cardiovascular Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Vascular Surgery, Stanford University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الفيديو يبين كيف للحث على تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني (AAA) في الفئران عن طريق التسريب داخل اللمعة عابر إيلاستاز البنكرياس الخنازير في الجزء infrarenal من الشريان الأورطي البطني. نموذج لديه القدرة على رؤية واسعة إضافة إلى البيولوجيا المرضية من AAA نظرا لظهور العديد من الفئران المعدلة وراثيا خروج المغلوب الجينات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التسريب داخل اللمعة عابر إيلاستاز البنكرياس الخنازير في الجزء infrarenal من الشريان الأورطي البطني هو النموذج الحيواني الأكثر استخداما على نطاق واسع من الأبهر البطني (AAA) منذ ذلك الحين وصفت لأول مرة في الفئران عن طريق Anidjar والزملاء ، واستند (1) الأساس المنطقي لتنميتها على طبيعة متقطعة من الإيلاستين التي لوحظت في AAAS. وقد تم تعديل هذا النموذج الفئران لانتاج AAAS في المنطقة الأبهر infrarenal من الفئران. (2) نموذج لديه القدرة على رؤية واسعة إضافة إلى البيولوجيا المرضية من AAA نظرا لظهور العديد من الفئران المعدلة وراثيا خروج المغلوب الجينات. وعلاوة على ذلك ، بل هو منصة قابلة للاختبار وكلاء العلاجية المحتملة لAAA. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح إجراءات ضخ إيلاستاز AAA المستخدمة في المختبر لدينا.

يتم تخدير الفئران باستخدام 2.5 ٪ isoflurane ، ويتم تنفيذ عملية فتح البطن تحت ظروف معقمة. وaortais البطن المعزولة بمساعدة من stereomicroscope التشغيل (لايكا). بعد وضع الحروف المركبة مؤقتة حول الشريان الأورطي القريبة والبعيدة ، يتم إنشاء بضع الأبهر في التشعب مع غيض من إبرة عيار 30. وقدم قطعة للحرارة مدبب من أنابيب البولي اثيلين PE - 10 خلال بضع الأبهر والمضمون. هو perfused لاحقا لمعة الأبهر 5-15 دقائق في 100 ملم زئبق مع المياه المالحة التي تحتوي على نوع الأول الخنزيري إيلاستاز البنكرياس (4.5 U / مل ؛ سيغما كيميكال). بعد إزالة القسطرة التروية ، يتم إصلاح بضع الأبهر دون انقباض في التجويف.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. الفئران هي تخدير مع استنشاق isoflurane L. / 2.0 - 3.0ml
  2. وحلق البطن و تنظيفها بالكحول وbetadine.
  3. يتم وضع الماوس مستلق على الحقل المنطوق.
  4. يتم ارتداء قفازات معقمة من قبل الجراح ، وجرى تعقيم الأدوات المستخدمة معقمة مع حبة الساخنة.
  5. يتم إجراء شق البطن طويلة خط الوسط. وتراجع محتويات البطن خارج البطن مع شاش معقم لفضح الشريان الأورطي البطني.
  6. يتم عزل الشريان الأورطي البطني من مستوى الوريد الكلوي الأيسر إلى التشعب.
  7. يتعرض لها فروع الشريان الأورطي في البطن وligated مع 10-0 الغرز. و تربط جميع فروع داخل الأبهر 1.0cm من التشعب.
  8. توضع الأربطة الحريرية 6.0 مؤقتة حول أجزاء الدانية والقاصية من الشريان الأورطي
  9. يتم إنشاء بضع الأبهر في التشعب مع إبرة قياس 30.
  10. هو عرض للحرارة أنابيب البولي ايثيلين مدبب (PE - 10) خلال بضع الأبهر والمضمون مع ربطة عنق.
  11. باستخدام كيس معلق المالحة في ذروة من 136 سم الى 100 مم زئبق معايرة ، يتم تعبئة الأبهر مع المياه المالحة التي تحتوي على 4.5 U / مل نوع البنكرياس الخنزيري إيلاستاز أنا. الأورطى يتوسع عادة إلى 150-170 ٪ من حجمه الأصلي خلال نضح إيلاستاز 5-15 دقيقة.
  12. ثم تتم إزالة القسطرة ونضح بضع الأبهر مغلقة مع خياطة 10-0 لتجنب انقباض.
  13. بعد إغلاق بضع الأبهر ، تتم إزالة ربطة القاصي.
  14. إذا كان هناك نزيف ضئيلة أو معدومة من بضع الأبهر إصلاحه ، يتم إزالة ربطة القريبة. توسيع الشريان الأورطي يملأ مع دم على الفور.
  15. يتم إرجاع الأمعاء إلى البطن ، ويتم إغلاق الجرح في طبقتين مع خاط النايلون / البولي بروبلين 6-0.
  16. يتم وضع قطرات Bupivicaime 0.25 ٪ (appx قطرة واحدة لكل سنتيمتر من حجم الجرح) على الجرح وجرعة واحدة من Caprofen (5mg/kg) وتعطى تحت الجلد.
  17. يتم وضع الماوس على المنطقة الدافئة ويسترد عادة في غضون 15 دقيقة.

figure-protocol-1
الشكل 1. النتيجة ممثل إيلاستاز يسببها AAA.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد لاحظت دراسات سابقة هامة الكثير الكثير إلى التباين في التنمية من مختلف التحضيرات AAA إيلاستاز التجاري 3. وبالتالي ، فمن الأهمية بمكان رصد الكثير الإنتاج ، فضلا عن أن جماعات المراقبة المناسبة بغية توثيق القدرة على إعداد للحث على AAAS.

ومن المثير للاهتمام ، وقابلية للتنمية AAA في هذا النموذج يعتمد على سلالة تستخدم الماوس 3. الماوس المستخدمة في الفيديو الحالي هو من سلالة C57Bl / 6 الذي وضع ث...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضاربات مصالح للإفصاح عنها.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل منحة SCCOR "مرض AAA : آليات ، الطبقات ، والمعالجة" (P50 HL083800 - 03) من المعاهد الوطنية للصحة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
إيلاستاز البنكرياس الخنزيري من النوع IكاشفSigma-AldrichE1250
أنابيب البولي إيثيلين (PE-10)BD Biosciences427400
CHANGE-A-TIPBovie Medical Corporation18010-00 (FST)سكين كي
LEICA MZ6Leica Microsystemsمجهر ستيريو
LEICA DFC290HDLeica Microsystemsكاميرا USB
Image Pro Express الإصدار 6.0Media Cybernetics Inc.برنامج

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة