ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

الولبخية عدوى بكتيرية في ذبابة الفاكهة

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

اسمي فويا فريدمان، وأنا باحثة مشاركة في جامعة برينستون. وسأحدثكم اليوم عن بعض البروتوكولات التي قمت بتطويرها لنقل العدوى، وتحديداً لعزل الهيموليمف من الذباب المصاب، ومن ثم حقن هذا الهيموليمف في ذباب غير مصاب.بشكل أساسي، هذا بروتوكول بسيط للغاية لعزل الذكور فقط للأغراض الأساسية. وستستخدم هذا الجهاز من شركة mepo والذي يحتوي على مرشح يوضع فوق أنبوب E. لذا، تحتاج أساساً إلى البدء بحوالي 100 ذبابة. قم بتخدير الذباب، ثم ضعها في جهاز الترشيح، ويمكنك ببساطة استخدام قمع لإضافة الذباب بسهولة إلى هذا الجهاز وغسله بـ 70% ethanol.قم ببساطة بإزالة الإيثانول، حيث يمكنك التخلص منه، وبعد ثلاث مرات من الغسل، قم بإجراء الغسلة الأخيرة باستخدام ماء منقّى (molecular water) لتجنب بقاء آثار من الإيثانول مع البكتيريا. بعد ذلك، انقل المزيج إلى أنبوب جديد، ثم قم بالطرد المركزي باستخدام جهاز طرد مركزي دقيق (microcentrifuge) لمدة دقيقتين. ولاحقاً، يمكنك حقن ذلك، حيث يتم إطعام الذباب غير المتأثر فقط.لذا، قم ببساطة باستخدام شريط لاصق مزدوج الوجه، وعادةً ما يكون لهذه الأشرطة جانبان، أحدهما أكثر التصاقاً من الآخر. اترك الجانب الأكثر التصاقاً للأعلى لأنه الجانب الذي ستلصق عليه الذباب. وبشكل أساسي، في جهاز الغاز، إذا وضعت هذه الشريحة في الأعلى، فلن يكون هناك تدفق للغاز وسيبقى الذباب مستيقظاً إذا كان موجوداً فوق الشريحة.وبذلك يمكنك توجيه التدفق، وتشكيل غطاء صغير، أو حجرة صغيرة باستخدام شريط لاصق. ثم تقوم بتوجيه الغاز فوق الذباب. وبعد ذلك، تضع هذا الضوء هنا باستخدام الشريط اللاصق، وبذلك تكون قد جهزت الذباب.قم بلصق الذباب على الجزء العلوي من الشريط، مع توجيه جميع الذباب في الاتجاه نفسه، بحيث تكون رؤوسها متجهة نحو الاتجاه الذي ستدخل منه الإبرة. وذلك حتى تتمكن من تجاوز الجناح، وللتأكد من عدم طيران الذباب؛ فإذا استيقظت أثناء الإجراء، لن ترغب في أن تطير بعيداً.لذا تأكد من تسليط ضغط طفيف بطرف الأداة على أجنحة الذبابة عند الطرف الخلفي. ولا بأس إذا تعرضت الأجنحة للتلف، لأنه عند رفع الذباب بعد الحقن، فمن المرجح أن تفقد أجنحتها على أي حال، ومع ذلك ستظل على قيد الحياة.يمكن أن يكون ذلك مفيداً لأنك لن تفقد الذباب، لذا يضع زيتاً معدنياً على الميكرومتر للجزء الخلفي من الإبرة، ثم إبرة الحقن القطبية، وبعد ذلك، يمكنك ببساطة ضبط الضغط لجلب المادة إلى طرف الإبرة. لقد قمت بحقن كمية تتراوح بين 10 إلى 15 nanoliters، ولكن طالما كنت متسقاً في ذلك. حسناً، هناك تفصيل مهم واحد في هذه التجربة وهو أن الذبابة، بمجرد حقنها، كما رأيتم، يجب أن تدخل الإبرة لأقصى حد ممكن عبر الجزء العلوي من البطن.لأنك هنا، وبشكل أساسي عند اختراق الإبرة، يتوفر لديك مساحة أكبر للتحرك للأعلى والأسفل. وبشكل أساسي، إذا كانت الإبرة قريبة من الجليدة، يقل احتمال اختراق الأعضاء الحيوية في الذبابة. فمن غير المرجح جداً أن تحدث ثقباً في الأمعاء، على سبيل المثال، وهو الأمر الذي قد يؤدي إلى موت الذبابة التي تجري عليها الجراحة.اسمي فويا فريدمان، وباحثة مشاركة في جامعة برينستون في مختبر إريك هيلز. وأود اليوم أن أخبركم عن هذا البروتوكول الذي شاهدتموه للتو في العرض التوضيحي.لقد تم تنفيذ هذا البروتوكول لأننا أردنا إثبات قدرة UBA على اختراق الأنسجة. حيث يُعد UBA أحد أنجح الطفيليات داخل الخلوية على وجه الأرض، فهو يصيب من 20% إلى 70% من الحشرات والعديد من الجزيئات.كما أنه يكتسب أهمية كبيرة فيما يتعلق بالأمراض البشرية لأنه يصيب أيضاً النيماتودا التي تنقل أمراضاً مثل عمى النهر أو داء الفيلات. لذا، فإن CCA يعد متعايشاً داخلياً إجبارياً في هذه الديدان. وهناك اهتمام كبير باستخدام CCA أيضاً كوسيلة لمكافحة الأمراض الطفيلية التي ينقلها البعوض والقراد، والبعوض على وجه الخصوص مثل الملاريا وحمى الضنك.لقد تم تطوير هذا البروتوكول بشكل أساسي لإظهار أنه بمجرد وجود CCA داخل التجويف البطني للذبابة، يمكنها عبور الأنسجة والوصول إلى الخلايا الجرثومية. لذا، ما يمكنك رؤيته هنا هو مبيض Drosophila، وبمجرد وجودها في الهيموليمف، يمكنها عبور الغمد البريتوني الوردي المحيط بالمبيض.وبعد ذلك يعبرون طبقة عضلية. وفي الواقع، أحد أول الأماكن التي يدخلونها داخل المبيض هو صورة الخلية الجذعية الجسدية. ومن ثم يمكنهم الوصول إلى الخط الجرثومي.وتنتقل هذه البكتيريا بنفس الطريقة التي تنتقل بها الميتوكوندريا، وذلك عن طريق الأم، من خلال البلازمات السيتوبلازمية الموجودة في البويضة. لذا، من الطبيعي أن تكون موجودة في الخط الجرثومي، وهذا هو السبب في تطوير هذا البروتوكول.ويمكن أن يكون هذا البروتوكول مفيداً جداً، حيث إن الطريقة التقليدية التي كان يحاول بها الباحثون نقل العدوى إلى wbaa هي ببساطة أخذ wbaa وإدخال نوع جديد من الحشرات إليها، وكان ذلك يتم عن طريق إجراء حقن مجهري في الجنين، إلا أن تلك الطرق أكثر تعقيداً بكثير.ونحن هنا ببساطة نستفيد من بيولوجيا هذه الكائنات، بما أنها قادرة على عبور الأنسجة والانتقال إلى أنسجة الخلايا الجذعية، ومن ثم يمكنها الوصول إلى الخط الجرثومي. وهذا يسهل عملية أخذ UBA من أنواع معينة من الحشرات المصابة، حيث يمكن نقلها إلى أنواع غير مصابة. وأعتقد أن السبب يكمن في عملية الحقن نفسها.بشكل أساسي، يجب توخي الحذر لتثبيت الذبابة بأفضل شكل ممكن. نحن نستخدم شريطاً لاصقاً مزدوج الوجه، ويجب إدخال الإبرة بحيث تكون قريبة وموازية لجسم الذبابة قدر الإمكان لتجنب الدخول بعمق شديد، وبذلك يقل احتمال موت الذبابة بعد إجراء الجراحة.

الولبخية عدوى بكتيرية في ذبابة الفاكهة

في هذه المقالة

الإفصاحات

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم