مقالة منهجية

عزل الخلايا الليمفاوية T الإنسان والثقافة والتحليل للهجرة في المختبر

DOI:

10.3791/2017

⸱

يونيو 1, 2010

 , 
1Center for Vaccine Biology and Immunology, University of Rochester

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اللمفاويات T الهجرة يحدث أثناء صاروخ موجه إلى الأجهزة اللمفاوية ، والخروج من الأوعية الدموية ، والدخول في الأنسجة الطرفية. هنا ، نحن تصف وضع بروتوكول والتي يمكن استخدامها لتحليل الخلايا اللمفاوية تي الهجرة في المختبر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هجرة الخلايا اللمفية تي ينطوي على تفاعل لاصقة من integrins سطح الخلية مع يغاندس أعرب عن الخلايا الأخرى أو مع البروتينات المصفوفة خارج الخلية. تفعيل spatiotemporal دقيقة من integrins من حالة تقارب المنخفضة إلى حالة تقارب عالية عند حافة الخلية يؤدي مهمة لمفاوية T الهجرة

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. عزل الخلايا اللمفاوية T الإنسان

  1. الحصول على دم الإنسان من متبرع سليم. السماح لتبريد الدم إلى درجة حرارة الغرفة (~ 30 دقيقة) قبل الانتقال الى الخطوة التالية.
  2. ماصة بلطف 3 مل من درجة حرارة الغرفة وسائل الإعلام تعدد الأشكال التدرج الكثافة في أنبوب 8 مل البوليسترين جولة القاع. إضافة بلطف 3 مل من الدم الكامل على الجزء العلوي من تعدد الأشكال وسائل الاعلام. فمن الأهمية بمكان تجنب الخلط من الكواشف اثنين.
  3. أنابيب الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 45 دقي....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه التجربة ، ونحن نقدم تفاصيل عن نظام بسيط لتحليل حركية الأولية اللمفاويات التائية البشرية. المقايسات في المختبر الهجرة استخدمت لتشريح أدوار العديد من الجزيئات ومسارات إشارات تشارك في تحرك من مختلف أنواع الخلايا. بعض عناصر التحكم الحرجة أن نأخذ في الاعتبار عند تصميم التجربة الخاصة بك من بروتوكول لدينا ما يلي : 1) غير لاصقة أو غير إنتغرين الطلاء الركيزة لاصقة ، مثل زلال المصل البقري (BSA) أو بولي - L يسين (PLL) ، على التوالي ، 2 ) إنتغرين محددة حجب العلاج بالاجسام المض.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أيد هذا المشروع من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح HL087088 (MK) وHL18208 (MK).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
RPMI 1640GIBCO ، بواسطة Life Technologies11875
FBSThermo Fisher Scientific، Inc.SH300070.03
البنسلين الستربتومايسينجيبكو ، من Life Technologies15140
1-Step PolymorphsAccurate Chemical & amp المؤسسة العلميةAN221725
PHARemel ، Thermo Fisher ScientificR30852801
Rec. Human IL-2R& D Systems202-IL
Rec. الإنسان IL-15R & D Systems247-IL
Protein GSigma-Aldrich19459
Rec. ICAM-1 / FcR & D Systems720-IC
Rec. SDF-1 R& أنظمة D350-NS

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
  2. Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

ICAM 1 SDF 1 PHA

مقالات ذات صلة