فحص الاستجابة الحركية الضوئية: طريقة لقياس الاستجابة السلوكية ليرقات الزرد لتغيير مفاجئ في حالة الإضاءة

الملخص

المصدر: Steele, W. B., et al. بروتوكول تجريبي لفحص ملامح الاستجابة السلوكية في أسماك اليرقات: تطبيق على الكافيين المنشط العصبي. J. Vis. Exp.(2018).

يصف هذا الفيديو مقايسة الاستجابة الحركية الضوئية لأسماك الزرد ويرقات البلم السمينة باستخدام برنامج تتبع آلي. يقيس البروتوكول الاستجابة السلوكية لأسماك اليرقات بعد تغيير مفاجئ في حالة الإضاءة.

البروتوكول

1. معايرة معلمات تتبع الفيديو

1. قبل المقاييس السلوكية، قم بتعيين معلمات المراقبة والمعايرة في برنامج مسار الفيديو (انظر جدول المواد).
   1. ضع صفيحة بئر في غرفة التسجيل مع ما لا يقل عن 1 سمكة يرقات في بئر فردي. استخدم اللوحة والأسماك المرتبطة بها كتمثيلات لتعيين معلمات المعايرة.
   2. في برنامج مسار الفيديو ، انقر فوق "ملف | إنشاء بروتوكول" ، والذي سيفتح مربع حوار "معالج إنشاء البروتوكول". في حقل "عدد المواقع" ، أدخل عدد الآبار الفردية للوحة البئر ثم انقر فوق "موافق".
   3. في الجزء العلوي من الشاشة ، انقر فوق "عرض | ملء الشاشة", والتي ستطالب النظام بعرض عرض الكاميرا العلوية للوحة البئر.
   4. انقر فوق رمز "رسم المناطق" ، والذي يظهر كثلاثة أشكال متعددة الألوان. على يمين منطقة عرض لوحة البئر ، حدد رمز الدائرة في الحقل المسمى "المناطق".
   5. استخدم المؤشر لتحديد منطقة تتبع الفيديو الدائرية في البئر العلوي الأيسر من لوحة البئر. حدد "العلامة العلوية اليمنى" ثم حدد منطقة العرض في أعلى اليمين جيدا. ثم حدد "العلامة السفلية" لتحديد الجزء السفلي الأيمن.
      ملاحظة: بعد رسم المخطط الدائري ، من المحتمل أن يحتاج موضعه إلى التعديل. لضبط موضع المخطط التفصيلي ، انقر فوق "تحديد" ثم استخدم المؤشر لتحريك المنطقة المحددة. أيضا ، يمكن نسخ الخطوط العريضة بالنقر فوق "نسخ" ثم "لصق".
   6. بعد تحديد مناطق تتبع الآبار في أعلى اليسار وأعلى اليمين وأسفل اليمين ، انقر فوق "إنشاء" لمطالبة البرنامج بتحديد مناطق المشاهدة تلقائيا للآبار المتبقية.
   7. في المنطقة المسماة "معايرة" ، انقر فوق "رسم مقياس". استخدم المؤشر لرسم خط أفقي عبر اللوحة. بمجرد رسم الخط، سيظهر مربع حوار بعنوان "قياس المعايرة". أدخل طول لوحة البئر وانقر على "موافق".
   8. اخرج من مدير الرسم بالنقر فوق أيقونة "رسم المناطق".
   9. انقر فوق رمز "المربعات". باستخدام المؤشر، قم بتمييز جميع المربعات التي تظهر على شاشة العرض بحيث يكون كل مربع أخضر.
      ملاحظة: تظهر أيقونة المربعات كمجموعة من ستة مربعات صغيرة فردية
   10. "انقر فوق عرض | ملء الشاشة". على يمين منطقة عرض اللوحة ، انقر فوق "Bkg" في المربع المسمى "عتبة الكشف". استخدم شريط ضبط الحد لتعيين حد اكتشاف البكسل. بمجرد تحديد حد اكتشاف البكسل المناسب ، انقر فوق "تطبيق على المجموعة".
       ملاحظة: يحدد هذا البروتوكول عتبة الكشف عند 13 في الوضع الأسود لملاحظات أسماك الزرد وعند 110 في الوضع الشفاف لملاحظات أسماك الزرد السمينة.
   11. في المربع المسمى "عتبة الحركة" ، أدخل معلمات تتبع سرعة الحركة المطلوبة. بمجرد تعيين معلمات السرعة ، انقر فوق "تطبيق على المجموعة".
       ملاحظة: يحدد هذا البروتوكول الحركات الصغيرة/الكبيرة بمعدل 20 مم/ثانية والحركات غير النشطة/الصغيرة بمعدل 5 مم/ثانية. تقوم هذه التحديدات ببرمجة البرنامج لتتبع حركة أسماك اليرقات بثلاثة مستويات مختلفة للسرعة: غير نشط (تجميد) = <5 مم / ثانية ، صغير (إبحر) = 5-20 مم / ثانية ، وكبير (انفجار) = >20 مم / ثانية.
   12. انقر فوق "المعلمات | معلمات البروتوكول" من القائمة المنسدلة. في مربع الحوار ، حدد علامة التبويب "الوقت". أدخل وقت الملاحظة ووقت التكامل. بعد إدخال المعلمات ، انقر فوق "موافق".
   13. لضبط أوقات الفترة الضوئية الفاتحة / الداكنة وشدة الضوء لكل فترة ضوئية ، افتح مربع حوار إعدادات السائق الخفيف عن طريق تحديد "القيادة الخفيفة" من القائمة المنسدلة "المعلمات".
       ملاحظة: انظر فيديو البروتوكول لتعيين فترات ضوئية متعددة للضوء والظلام.
   14. بعد تعيين معلمات تتبع الفيديو، احفظ بروتوكول الملاحظة.
       ملاحظة: يلاحظ هذا البروتوكول سلوك الأسماك على مدى 50 دقيقة تتضمن مرحلة تأقلم مدتها 10 دقائق تليها 4 مراحل متغيرة للضوء / الظلام تتكون من فترتين ضوئيتين لمدة 10 دقائق وفترتين مظلمتين لمدة 10 دقائق. يتم تعيين وقت التكامل لقياس السلوك لكل دقيقة من التجربة السلوكية التي تبلغ مدتها 50 دقيقة.

< ص الفئة = "jove_title" >2. مراقبة الحركة الحركية والحركة الضوئية للأسماك اليرقات

1. ضع صفيحة البئر التي تحتوي على أسماك تجريبية في غرفة التسجيل السلوكي.
2. في برنامج تتبع الفيديو ، افتح بروتوكول التتبع الذي تم تطويره في الخطوة التالية.
3. في عارض تتبع الفيديو ، تحقق للتأكد من أن جميع اليرقات مرئية على شاشة الكمبيوتر ، وأن يرقة واحدة فقط موجودة في كل بئر ، وأن الآبار الفردية محاذاة داخل مناطق المراقبة التي تم تحديدها في الخطوتين 1.1.5 و 1.1.6.
4. انقر فوق "تجربة | تنفيذ".
   ملاحظة: سيطالب النظام المستخدم بتقديم اسم وموقع لحفظ بيانات المراقبة.
5. بمجرد تحديد اسم بيانات المراقبة وموقعها المحفوظ، انقر فوق أيقونة "عدة صور حية" لتمييز جميع مناطق المشاهدة المحددة مسبقا
   ملاحظة: توجد هذه الأيقونة في الجزء العلوي من شاشة الكمبيوتر وتظهر كمربع مقسم إلى أربعة مربعات أصغر. سيؤدي النقر فوق هذا الرمز إلى تمييز جميع مناطق العرض المحددة مسبقا.
6. أغلق لوحة غرفة التسجيل وانقر على "الخلفية | ابدأ" على شاشة الكمبيوتر.

المواد