مقايسة استجابة الهروب: طريقة لدراسة استجابة يرقات الزرد لمحفزات اللمس

الملخص

المصدر: Sztal, T.E., et al. باستخدام فحوصات الاستجابة والحركة التي يتم استثارتها باللمس لتقييم أداء العضلات ووظيفتها في أسماك الزرد. J. Vis. Exp.(2016)

يصف هذا الفيديو مقايسة استجابة الاستحضار باللمس ، والتي تقيس استجابة يرقة الزرد للمس المحفزات.

البروتوكول

1. مقايسة الاستجابة التي يتم استثارها باللمس

1. تحضير 2 dpf أجنة لفحص الاستجابة باللمس
   1. تأكد من أن الوقت من اليوم الذي يتم فيه إجراء الاختبار متسق بين التجارب لأن النشاط يمكن أن يختلف بشكل كبير على مدار اليوم.
      ملاحظة: يجب إجراء التجربة بشكل أعمى وترتيب الاختبار بشكل عشوائي لتقليل القطع الأثرية التجريبية.
   2. قم بتعيين رقم لسلالات الأسماك ، وهو غير معروف للفرد الذي يقوم بالتجربة. بعد ذلك ، يؤدي استخدام الأدوات المتاحة مجانا عبر الإنترنت إلى إنشاء قائمة عشوائية تملي ترتيب الاختبار.
   3. قبل ساعة واحدة على الأقل من الاختبار ، قم بإزالة الأجنة عن طريق تمزيق ثقب في المشيمة وسحب المشيمة برفق باستخدام زوج من الملقط الدقيق. قم بإزالة أي حطام من طبق بتري قبل العودة إلى الحاضنة 28 درجة مئوية.
2. إجراء فحص الاستجابة باللمس
   1. درجة الحرارة إلى 28 درجة مئوية قبل 15 دقيقة على الأقل من بدء الاختبار.
      ملاحظة: يتم التحكم في درجة حرارة هذه المرحلة وستبقى عند 28 درجة مئوية طوال مدة الاختبار. ستؤثر درجة الحرارة على النشاط ، وبالتالي من المهم الحفاظ على درجة حرارة ثابتة. إذا لم تكن المرحلة الساخنة متوفرة ، فيجب مراقبة درجة حرارة الماء وإجراء جميع التجارب في نفس درجة الحرارة.
   2. ضع طبق بتري مملوء بوسط الجنين (5 ملي كلوريد الصوديوم ، 0.17 ملي كلوريد كلوريد ، 0.33 ملي كلوريد_{الكنيوم 2} ، 0.33 ملي ملي MgSO₄ في الماء) على مسرح مضيء وقم بتركيب الكاميرا عالية السرعة فوق طبق بتري.
   3. قم بتشغيل برنامج تسجيل كاميرا الفيديو (مثل Stream Pix 5 ، الموضح هنا) وضمن علامة التبويب "مساحة العمل" حدد 1,000 إطار في الثانية (1,000 إطارا في الثانية) كسرعة التقاط لضمان تسجيل حركة السباحة السريعة للأسماك.
   4. من خلال العمل مع جنين واحد في كل مرة ، ضع الجنين في منتصف طبق بتري مع رؤية الزرد بوضوح في مجال الرؤية.
      ملاحظة: إذا سبح الجنين بعيدا قبل بدء التجربة ، فاستبدله بآخر ، لأن استعادة الجنين ووضعه قد يؤدي إلى عدم حساسيته للتحفيز وقد تؤدي استجابات الانفجار المتكررة إلى ضعف العضلات في بعض نماذج الأمراض.
   5. ابدأ التسجيل بالنقر فوق الزر "تسجيل" ، وقم بتوصيل الحافز الحسي الميكانيكي إلى الجنين عن طريق لمسه برفق بإبرة حادة في الجزء العلوي من الرأس.
   6. أوقف التسجيل بعد أن يسبح الجنين خارج مجال الرؤية أو يعود إلى الراحة.
      ملاحظة: يبلغ التسارع ذروته خلال أول 0.2 ثانية من استجابة هروب الانفجار بعد التحفيز الميكانيكي. لذلك ، تأكد من أن السمكة في مجال الرؤية خلال أول 0.2 ثانية على الأقل من تسجيل استجابة الهروب باستخدام برنامج Stream Pix 5 ، سيتم حفظ البيانات تلقائيا كملف فيديو .avi. يمكن أيضا استخدام برامج التقاط الفيديو البديلة مثل Free Video Capture أو Softonic ، وكلاهما متاح مجانا للتنزيل.
   7. أعد الجنين إلى طبق بتري جديد واختر جنينا آخر للاختبار. قم بإجراء الاختبار على ما لا يقل عن 15 سمكة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أطباق بتري 90 مم منتجات مختبر المحيط الهادئ بي تي S90001 ملاقط ، نمط 8 بروسكيتك تي 04-821 حاضنه ثيرمولين علمي TEI-43L كاميرا عالية السرعة بومر إتش إكس سي 20 ستريم بيكس5 نوربيكس الخطوة 1.2.3 وحدة التحكم في درجة الحرارة وجهه نظر http://www.randomization.com غير متاح الخطوات 1.1.2