اختبار تفضيل الضوء والظلام: طريقة لدراسة السلوك المرتبط بالقلق في أسماك الزرد

الملخص

المصدر: Holcombe, A., et al. طريقة جديدة لإعطاء الأدوية لأسماك الزرد المتعددة (Danio rerio) والتقدير الكمي للانسحاب. J. Vis. Exp.(2014)

يصف الفيديو مقايسة تفضيل الضوء والظلام لدراسة السلوك المرتبط بالقلق في أسماك الزرد بعد التعرض للإيثانول.

البروتوكول

1. الاختبار السلوكي

1. احصل على ساحة فاتحة / مظلمة بعرض 9.5 سم وطول 55 سم وعمق 9.5 سم مع أرضية بيضاء مقاومة للماء (الشكل 1 ب). قم بلصق ورق أبيض وأسود مقاوم للماء غير عاكس على الجدران الداخلية للساحة باستخدام الفيلكرو ، مع تغطية نصف الساحة باللون الأبيض والنصف الآخر مغطى باللون الأسود. املأ الساحة حتى عمق 5 سم بمياه الموائل عند درجة حرارة 25-28 درجة مئوية. حافظ على درجة الحرارة هذه طوال الاختبار.
2. قم بتقليل المحفزات البصرية الخارجية عن طريق إنشاء حاوية بيضاء ثلاثية الجوانب للساحة المراد وضعها فيها. تأكد من أن منطقة الاختبار بها إضاءة علوية منتشرة لا تسبب انعكاسات على سطح الماء ، ولكنها ساطعة بما يكفي لبرنامج تتبع الحركة ، أو القياس الكمي اليدوي اللاحق من صور الفيديو.
3. ضع الساحة في العلبة وقم بتعيين معلمات التسجيل وتحليل الحركة لبرنامج تتبع السلوك. اضبط مدة التجربة على 5-15 دقيقة ، اعتمادا على سؤال البحث.
   ملاحظة: هنا ، استخدمنا 5 دقائق.
4. انقل مجموعة الأسماك المراد اختبارها إلى منطقة البحث في خزان الموائل ووضعها خارج حاوية الساحة. تأقلم السمك لمدة 10 دقائق.
5. قم بشبكة سمكة برفق من المجموعة المناسبة وضعها في وسط الساحة الفاتحة / المظلمة ، مع التأكد من إطلاق السمكة عندما يتم وضعها بالتوازي مع المحور الطويل للساحة لتجنب انحياز السمكة إلى المنطقة الفاتحة أو المظلمة.
6. ابدأ في تسجيل السلوك فور إطلاق سراح. راقب أي مشاكل في البرامج في تتبع الأسماك أو قفز الأسماك أو تجميدها. قم بتدوير الساحة بزاوية 180 درجة بعد اختبار نصف الأشخاص لمنع أي ارتباك بسبب التحيزات الناتجة عن توجيه نهاية الساحة نحو الطرف المفتوح للعلبة.
7. بعد انتهاء التجربة ، قم بشبكة الأسماك برفق وإزالتها من الساحة إلى خزان احتجاز أو خزان موائل.

< p class = "jove_title" >2. التحليل

1. افحص الوقت الذي تقضيه في المناطق الفاتحة مقابل المناطق المظلمة. لكل مجموعة وكل سمكة ، احصل على الوقت النسبي الذي تقضيه في المناطق الفاتحة والمظلمة وقم بتحليله باستخدام اختبار t لعينة واحدة (أو اختبار رتبة Wilcoxon الموقع للبيانات غير المعلمية ؛ الفرق من (نصف إجمالي وقت التجربة) 150 ثانية) لتحديد ما إذا كانت المجموعات تفضل منطقة واحدة بشكل كبير على الأخرى.
2. لمقارنة التفضيلات، احسب مؤشر التفضيلات عن طريق طرح الوقت الذي تقضيه في المنطقة الفاتحة من الوقت الذي تقضيه في المنطقة المظلمة وقارن الاختلافات بين المجموعات. يمكن استخدام اختبارات t لمقارنة مجموعتين. قارن مجموعات متعددة بتحليل أحادي الاتجاه للتباين باستخدام اختبار Tukey HSD اللاحق عند الضرورة (أو اختبار Kruskal-Wallis مع اختبار Dunn للمقارنة المتعددة للبيانات غير المعلمية).
3. قارن السرعة وعدد انتقالات المنطقة والتعرج والجمود عبر المجموعات. استخدم تحليلا أحادي الاتجاه للتباين باستخدام اختبار Tukey HSD اللاحق عند الضرورة (أو اختبار Kruskal-Wallis مع اختبار Dunn للمقارنة المتعددة للبيانات غير المعلمية).

النتائج

الشكل 1: إجراء النقل وساحة الضوء / الظلام. توضح هذه الصور إجراء النقل. (أ) أولا ، توجد الأسماك في خزان النقل (على اليسار). يتم تصوير خزان الجرعات الذي يحتوي على الإيثانول (يمين). (B-C) يتطلب نقل الأسماك من خزان النقل إلى محلول الإيثانول من الباحث رفع ملحق التفريخ من خزان النقل إلى خزان محلول الإيثانول. (د) يبلغ عرض الساحة الفاتحة / المظلمة كما هو موضح 9.5 سم وعمقها 9.5 س...

المواد