تجنب أسماك الزرد ومقايسة Thigmotaxis: طريقة عالية الإنتاجية لفحص سلوك اليرقات استجابة للتحفيز البصري البغيض

Abstract

المصدر: Richendrfer, H., et al. التحليلات السلوكية الآلية عالية الإنتاجية في يرقات أسماك الزرد. J. Vis. Exp.(2013)

يصف الفيديو مقايسة التجنب والانجذاب الزنبقي ليرقات الزرد. يفحص الفيديو سلوك يرقات الزرد استجابة للتحفيز البصري المكروه.

Protocol

< p class = "jove_title" > 1. التقاط الصور

1. يمكن وضع ما يصل إلى 20 يرقة في كل حارة من الألواح. عادة ما يتم استخدام 5 يرقات لكل حارة لتسهيل التتبع الأكثر دقة لسرعة السباحة وتقليل عدد اليرقات اللازمة لكل تجربة. يمكن ملء الممرات بماء البيض مع أو بدون الأدوية أو المواد السامة حسب التجربة. ومع ذلك ، لا ينبغي ملء الممرات بالكامل حتى يتم وضعها في خزانات التصوير. هذا سيمنع الفائض. من أجل الاتساق ، يجب أن يكون لليرقات فترة تأقلم مدتها عشر دقائق بعد وضعها في قوالب الاغاروز ووضعها أعلى شاشة الكمبيوتر المحمول. سيساعد نقل اليرقات بكفاءة من طبق بتري إلى ممر الاغاروز على تقليل إجهاد اليرقات. يكون هذا أسهل عندما يتم وضع اليرقات في خزانات ضحلة أو أطباق بتري.
2. تشتمل خزانات التصوير على كاميرا رقمية من Canon تستخدم للتصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني وجهاز كمبيوتر محمول. يجب وضع الكاميرا في الجزء العلوي من الخزانة وتوجيهها نحو الجزء السفلي من الخزانة حيث يجب وضع كمبيوتر محمول بشاشة مقاس 15.6 بوصة مع توجيه الشاشة لأعلى (الشكل 1). يجب وضع أربع لوحات يدويا مباشرة أعلى شاشة الكمبيوتر المحمول. في هذا الوقت ، يمكن تغطية الممرات بماء البيض أو المعالجة الكيميائية بحيث تكون مستوية مع الجزء العلوي من الممر (للتخلص من الظلال على حواف الممرات في الصور).
3. يستخدم عرض PowerPoint التقديمي كمحفز مكروهة لليرقات. في الماضي ، تم عرض الكرات الحمراء المتحركة على يرقات الزرد في 6 أو 12 صفيحة متعددة الآبار. يبدأ PowerPoint الحالي بخلفية بيضاء فارغة لمدة 15 دقيقة ، متبوعة ب 15 دقيقة من شريط أحمر متحرك في النصف العلوي من اللوحة (الشكل 2). من أجل القضاء على ارتفاع درجة حرارة اليرقات ، من الأفضل شراء جهاز كمبيوتر محمول بدرجة حرارة شاشة لا تزيد عن 28 درجة مئوية. لتجنب تبخر السائل داخل ممرات الاغاروز ، يجب الحفاظ على الحد الأقصى لوقت التصوير أقل من ساعة واحدة.
4. يجب برمجة الكاميرا الرقمية للتصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني ، والتقاط الصور كل 6 ثوان ليصبح المجموع 300 صورة لكل تجربة. ومع ذلك ، يمكن تعديل التردد والطول اعتمادا على التجربة والقياس الكمي السلوكي. في الماضي ، تم استخدام أوقات التصوير الممتدة باستخدام فترات أطول بين كل صورة. يمكن ضبط الكاميرا بدقة أقل للتصوير بسرعة الفيديو (30 إطارا في الثانية). في حين أن الدقة المنخفضة تحد من التسجيلات إلى لوحة واحدة متعددة الآبار ، فإن تسجيلات الفيديو مناسبة لتصوير أحداث السباحة السريعة.

Results

الشكل 1. خزائن التصوير. تم بناء خزانات التصوير خصيصا في مختبرنا واستخدمت في التحليلات السلوكية عالية الإنتاجية. تم توصيل كاميرا رقمية بدقة 15 ميجابكسل بالجزء العلوي من الخزانة متجهة لأسفل من أجل جمع صور الفاصل الزمني لليرقات في لوحات متعددة المسارات موضوعة أعلى شاشة الكمبيوتر المحمول. يوجد بين الألواح والشاشة ناشر بلاستيكي يستخدم لمنع أنماط التموج في الصور التي تم جمعها.

< p class = "jove_content" >

Materials