تشريح عدسة العين: تقنية لمراقبة مورفولوجيا عدسات الزرد

الملخص

المصدر: Vorontsova I. et al ، تقييم توطين نواة عدسة الزرد وسلامة الخياطة. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو البروتوكول الذي تم تطويره لتشريح عدسات الزرد البالغة واليرقات لتحليل مورفولوجيا العدسة القشرية والسلامة الهيكلية لخيوط العدسة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تشريح عدسات اليرقات وأسماك الزرد البالغة

1. قم بتخدير الأسماك من 6 يرقات dpf إلى مرحلة البلوغ باستخدام التريكيين حتى لا تستجيب للمس ولكن لا تزال تظهر نبضات قلب قوية. قم بقياس الطول القياسي للأسماك وفقا ل Schilling (2002) للتدريج.
2. استئصال العينين على الفور باستخدام مقص التشريح الدقيق وضعه في طبق تشريح في PBS (الشكل 1 موضح لعيون البالغين).
   1. اصنع طبقا مخصصا مقاس 35 مم مملوءا بالسيليكون لتشريح العدسات. بمجرد أن يتماسك السيليكون ، قم باستئصال فتحة قطرها حوالي 2-3 مم وعمق 0.5 مم لتثبيت عيون / عدسات البالغين أثناء التشريح.
3. تشريح عدسات الزرد البالغة
   1. ضع عين بالغة في الجانب الخلفي لأعلى المليء ببرنامج تلفزيوني. شل حركة العين عن طريق إدخال ملقط بزاوية <45 درجة عبر القرص البصري. احرص على عدم قطع العدسة أو ضغطها. قم بعمل شقين أو ثلاثة شقوق شعاعية من خلال شبكية العين والصلبة من القرص البصري إلى المنطقة الهدبية باستخدام مقص التسلخ.
   2. قشر الشبكية والصلبة مثل بتلات الزهور واقلب العين ، وجانب القرنية لأعلى. قم بتثبيت العدسة بشكل غير مباشر عن طريق التلاعب بالصلبة والقرنية بالجانب المسطح من المقص ، مع سحب شبكية العين والأنسجة المرفقة بالملقط. قم بقص الأنسجة الزائدة بعناية من العدسة.
      ملاحظه: من الضروري التشريح بعناية للحصول على عدسات صحية باستمرار.
4. تشريح عدسات يرقات الزرد
   1. ضع الجانب الخلفي للعين اليرقية لأعلى على الجزء المسطح من طبق السيليكون المملوء ب PBS واستخدم إبرة تنجستن حادة لعمل قطع شعاعية عبر شبكية العين والصلبة أثناء شل حركة العين بإبرة تنجستن أخرى أو ملقط><. ملاحظه: احرص على عدم إتلاف العدسة.
      1. شحذ طرف سلك التنغستن بطول 2 سم 0.1 مم كهربائيا عن طريق تعليق طرف السلك إلى 10٪ (وزن / حجم) هيدروكسيد الصوديوم وتطبيق تيار متناوب منخفض الجهد14. قم بتأمين الإبرة في ماصة باستور عن طريق إذابة الطرف الزجاجي باستخدام موقد بنسن.
         ملاحظه: يمكن أيضا استخدام أدوات تشريح دقيقة بديلة .
         أنذر: هيدروكسيد الصوديوم مادة للتآكل.
   2. استخرج العدسة برفق من العين المنفصلة بجانب غير حاد من الإبرة ، واسحب الأنسجة المرفقة بعناية.

النتائج

الشكل 1: تشريح عدسة الزرد. (أ) يتم تشريح العيون من الأسماك المخدرة ووضعها في الجانب الخلفي لأعلى (ب). (ج) يتم تثبيت العينين بالملقط عبر القرص البصري (OD) ويتم إجراء شقين إلى ثلاثة شقوق شعاعية في شبكية العين والصلبة من القرص البصري إلى المناطق. (د) قم بطي اللوحات للخارج لتكشف عن العدسة. (ه) قم بتدوير العين لمواجهة القرنية لأعلى ، وقم بتثبيت العدسة بشكل غير مباشر عبر القرنية واسحب الصلبة وشبكية العين. (و) قم بقص الشبكية الم...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) فيشر ساينتيك ص399 طبق ميكروويل ذو قاع زجاجي (طبق بتري 35 مم ، ميكروويل 14 مم ، غطاء زجاجي # 1.5) شركة ماتتك P35G-1.5-14-C ملقط دومون # 5 دومون آند فيلس حافظ على شحذ الملقط مقص التشريح الدقيق Vannas شركة تيد بيلا 1346 أطراف مستقيمة حادة / حادة مجهر متحد البؤر نيكون كسوف Ti-E حبات هيدروكسيد الصوديوم فيشر ساينتيك S612-3 تحذير - تآكل / مزعج للعينين والجلد ، العضو المستهدف - مجلة التجارب المرئية www.jove.com حقوق الطبع والنشر © 2019 مجلة التجارب المرئية الصفحة 2 من 2 الجهاز التنفسي ، تآكل للمعادن ماصات زجاجية باستور يمكن التخلص منها فيشربراند 13-678-20 أ