الفيزيولوجيا الكهربية لأسماك الزرد البالغة: طريقة لقياس النشاط الكهربائي خارج الخلية للخلايا العصبية في الجسم الحي

الملخص

المصدر: Johnston, L., et al. التسجيل الفيزيولوجي الكهربي في دماغ أسماك الزرد البالغة السليمة. J. Vis. Exp. (2013)

يصف البروتوكول إجراء إجراء الفيزيولوجيا الكهربية في أسماك الزرد البالغة. يمكن استخدام هذه الطريقة لقياس النشاط العصبي في الجسم الحي.

البروتوكول

< ص الفئة = "jove_title" >1. الفيزيولوجيا الكهربية

1. أغلق قضيب إيقاف التنبيب وافصل بسرعة قفل Luer الذي يربط قاعدة التنبيب بالتنقيط ثلاثي الكنائين.
   1. انقل إعداد التنبيب السليم إلى مجهر الفيزيولوجيا الكهربية وقم بتوصيله بنظام التروية.
   2. قم بتشغيل مياه الموائل وقم بتسخينها بمعدل 1 مل / دقيقة لمدة ~ 1 ساعة ، من أجل غسل التريكيين.
2. باستخدام معالج دقيق تحت التحكم البصري ، ضع القطب الثانوي بحيث يمكن إدخال طرف القطب الكهربائي في فتحة أنف أو في الغمس خلف الفك العلوي.
3. أدخل إبرة القطب الكهربائي الأساسي في فتحة حج القحف. أدخل الإبرة في الأنسجة ، بحيث يتم وضع الطرف بشكل سطحي إلى حد ما داخل التكتوم البصري.
   1. إذا كان القطب عميقا جدا ، فقد تكون الإشارة الكهربائية صغيرة.
4. جمع وتحليل الفرق الكهربائي المسجل بين الأقطاب المرجعية الأولية والثانوية. ستسمح هذه العملية بالحصول على تسجيلات خارج الخلية.
   1. اجمع البيانات في الوضع الخالي من الفجوات بمعدل عينة 5 كيلو هرتز ، مع مرشح تمرير منخفض يبلغ 0.1 كيلو هرتز ومرشح تمرير عالي يبلغ 1 هرتز.
   2. لا تبدأ في تسجيل النشاط الفيزيولوجي الكهربي حتى تتدفق مياه الموائل لمدة 45 دقيقة على الأقل.
   3. سجل خط الأساس للنشاط الأصلي لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إضافة الأدوية التجريبية. ابدأ التروية بالأدوية التجريبية التي تختارها وسجلها لمقدار الوقت المطلوب. في الاستعدادات الصحية ، من الممكن تسجيل النشاط العصبي لمدة 2-3 ساعات.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مياه الموائل الرقم الهيدروجيني 7.0-7.4 ، الموصلية 400-450 ميكرو ثانية ؛ < / > يتم صيانتها بواسطة Instant Ocean و
بيكربونات الصوديوم 0.4٪ Tricaine Buffered Tricaine سيجما ألدريتش [إ10521] درجة الحموضة 7.2-7.4 ؛ مخزنة عند -20 درجة مئوية 60 مل أنابيب حقنة قفل لور بيكتون وديكنسون وشركاه 309653 3-way Stopcocks مع وصلات Luer 0.010 في الأسلاك الفضية شركة إيه إم سيستمز حامل قطب كهربائي من سلسلة Q طبق بتري من فيشربراند 100 مم × 15 مم فيشر ساينتيك NC9299146 34 جرام إبرة مشطوفة شركة World Precision Instruments، Inc. NF34BV 37 سم × 42 سم كيمويب كيمبرلي كلارك بروفيشنال TW31KEM 1/8 في أنبوب القطر أنبوب قطره 1 مم مجهر (Leica MZ APO) يمكن استخدام مجهر آخر