في الجسم الحي التثقيب الكهربائي: طريقة خاصة بالموقع لنقل أسماك الزرد

الملخص

المصدر: Durovic, T., et al. طريقة التثقيب الكهربائي لتوصيل الحمض النووي البلازميد في الجسم الحي في الدماغ الزرد البالغ. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو التثقيب الكهربائي في الجسم الحي ، وهي تقنية لتوصيل الحمض النووي إلى الخلايا البطانية الدبقية في أسماك الزرد البالغة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. التثقيب الكهربائي

1. قم بإزالة السمك من إعداد الحقن مع الاستمرار في الاحتفاظ به في الإسفنجة.
2. اغمر الجانب الداخلي من طرف الأقطاب الكهربائية في هلام الموجات فوق الصوتية.
3. قم بتغطية telencephalon السمكة بكمية صغيرة من هلام الموجات فوق الصوتية.
4. ضع رأس السمكة بين الأقطاب الكهربائية ، مع وضع القطب الموجب على الجانب البطني من رأس السمكة والقطب السالب على الجانب الظهري (الشكل 1 ج) ، مع الاستمرار في إمساك جسم السمكة في الإسفنجة. هذا يحدد اتجاه تدفق التيار الضروري للتثقيب الكهربائي للبسط العظمي الموجود في المنطقة تحت البطينية.
5. اضغط على الأقطاب الكهربائية برفق وبدقة ضد telencephalon (الشكل 1 C). إدارة التيار بدواسة القدم. أمسك الأقطاب الكهربائية في مكانها حتى تنتهي النبضات الخمسة.

النتائج

الشكل 1: تمثيل تخطيطي للقسم الإكليلي لسمك الزرد المقطوع. (أ) مخطط القسم الإكليلي من الدماغ البطاني الزرد ، مع تسليط الضوء على موضع الخلايا البطانية الدبقية ، والتي تبطن سطح البطين وتبني جدار البطين البطني. تربط الطبقة البطانية الظهرية بين نصفي الكرة الأرضية وتغطي البطين (V) ، الموجود بين طبقتين من الخلايا: البطاني الدبقي والعصاني العصبي. (ب) على اليسار ، صورة لرأس الزرد مأخوذة من الأعلى ،...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات جل الموجات فوق الصوتية SignaGel ، باركر مختبرات INC 15-60 هلام القطب الكهربائي BTX ملاقط كهربائية ملاقط بلاتينية، BTX هارفارد جهاز 45-0486 قطر 1 مم جهاز التثقيب الكهربائي نظام التثقيب الكهربائي للموجة المربعة BTX ECM830 ، جهاز BTX Harvard 45-0662