الحقن داخل الصفاق: طريقة لتوصيل المحلول إلى تجويف البطن لأسماك الزرد البالغة

الملخص

المصدر: Luukinen, H., et al. نمذجة السل في المتفطرة مارينوم مصابة بأسماك الزرد البالغة. J. Vis. Exp. (2018).

يصف هذا الفيديو تقنية الحقن داخل الصفاق ، وهي طريقة لتوصيل المحاليل إلى تجويف البطن لأسماك الزرد البالغة.

البروتوكول

< ص الفئة = "jove_title" >1. عدوى M. marinum التجريبية بالحقن داخل الصفاق

1. ماصة قطرة 5 ميكرولتر من المحلول البكتيري المخفف على قطعة من فيلم البارافيلم واسحب القطرة إلى إبرة أنسولين 30 جم.
2. استخدم أسماك برية عمرها 5-8 أشهر وأسماك متحولة من نوع rag1 − / − hu1999 للتجربة. قم بتخدير أسماك الزرد البالغة في مياه الخزان باستخدام 0.02٪ 3-أمينوبنزويك حمض إيثيل إستر (درجة الحموضة 7.0). ضع الجانب البطني للسمكة لأعلى في شق على بلاستيك رغوي رطب.
   ملاحظة: الأسماك الطافرة غير قادرة على الخضوع لإعادة التركيب الجسدي وإنتاج خلايا T و B وظيفية.
3. حقن الإبرة بين زعانف الحوض بزاوية 45 درجة تقريبا. حافظ على فتح الإبرة لأعلى لملاحظة أن الفتحة بأكملها داخل تجويف البطن. قم بحقن المعلق البكتيري ببطء وقم بإزالة الإبرة بعناية.
   ملاحظه: في حالة تسرب المتتبع الأحمر من الأسماك عند الحقن ، استبعد الأسماك من التجربة.
4. مباشرة بعد الحقن ، انقل الأسماك إلى خزان الاسترداد بمياه الخزان العذبة.
5. خذ عينات من المعلق البكتيري على ألواح 7H10 كل 15 دقيقة من البكتيريا المستخدمة واحتضان البكتيريا عند 29 درجة مئوية لمدة 5 أيام وتحقق من جرعة العدوى عن طريق عد المستعمرات على الألواح.
6. تحقق من صحة الأسماك بانتظام وقتل أي سمكة تظهر عليها أعراض العدوى بتركيز يزيد عن 0.02٪ من 3-أمينوبنزويك حمض إيثيل إستر (درجة الحموضة 7.0).
   ملاحظه: ما يقرب من 7٪ من أسماك الزرد البالغة المصابة ب 34 ± 15 CFU و 30٪ من أسماك الزرد المصابة ب 2029 ± 709 CFU سيكون لديهم أعراض بحلول 8 أسابيع. قد تشمل الأعراض السباحة غير الطبيعية أو عدم الاستجابة للمس أو اللهاث أو الوذمة أو الهزال الملحوظ.
7. الحفاظ على سمك الزرد وفقا للمعايير المشتركة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات المتفطرة مارينوم مجموعة ثقافة النوع الأمريكي ATCC 927 الفينول الأحمر سيجما ألدريتش ص 3532 أقراص ملحية مخزنة بالفوسفات (PBS) سيجما ألدريتش P4417-50TAB ميدلبروك 7H10 أجار BD ، ثيرمو فيشر العلمي 11799042 3-حمض أمينوبنزويك إستر الإيثيل (درجة الحموضة 7.0) سيجما ألدريتش أ 5040 إبرة أنسولين أومنيكان 100 30 جرام براون 9151133 1 مل حقنة هينكي ساس وولف 4010.200 فولت 0