الطعم الزينوغرافي المشتق من المريض (zPDX): نموذج السرطان

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Wang L. et al. ، نموذج Xenograft غير المتجانس المشتق من المريض لسرطان البنكرياس باستخدام يرقات الزرد كمضيفين لتقييم الأدوية المقارن. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو تقنية إنشاء نموذج xenograft مشتق من مريض الزرد. في بروتوكول العينة ، نقوم بتقييم كفاءة أدوية Gemcitabine و Navitoclax على نموذج xenograft لورم البنكرياس.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. حقن معلق الخلايا المختلطة في أسماك الزرد

1. أضف محلول ثلاثي الكيان 10x إلى ماء E3 لتخدير يرقات الزرد ونقل اليرقات (من الخطوة 2.3) إلى لوحة الحقن المملوءة ب E3 المعدل (E3 مع 1 جم / لتر جلوكوز و 5 مليمول / لتر L-جلوتامين).
2. املأ 25 ميكرولتر من تعليق الخلايا المختلطة في إبرة الشعيرات الدموية الدقيقة وأدخل الإبرة في مناور الحقن الدقيق.
3. اضبط ضغط الحقن والوقت. حقن 50-80 خلية (~ 8 نانولتر) في كيس صفار 48 أسماك الزرد الحامية.

< p class = "jove_title" >2. استزراع أسماك الزرد المطعمة (نموذج zPDX)

1. انقل يرقات سمك الزرد بعد التطعيم الخارجي إلى 40 مل من محلول المزيج (محلول E3 مع 1 جم / لتر جلوكوز و 5 مليمول / لتر L-glutamine) عند 32 درجة مئوية.

< ص الفئة = "jove_title" >3. إدارة الأدوية على أسماك الزرد المطعمة وتقييم الخلايا السرطانية / الخلايا الليفية القابلة

للحياة

1. تحديد التركيز الأمثل للجيمسيتابين / نافيتوكلاكاس.
   1. ضع 10 أجنة من أسماك الزرد البرية بقوة 48 حصانا في كل بئر من صفيحة 12 بئرا.
   2. أضف تركيزات مختلفة من الجيمسيتابين أو نافيتوكلاكس في كل بئر واحتضن عند 32 درجة مئوية لمدة يومين.
   3. بعد يومين ، احسب جرعة التحمل القصوى (MTD) من gemcitabine و navitoclax حيث لا تظهر يرقات الزرد تشوهات كبيرة وسلوكا غير طبيعي ، ويتم تعيين تركيزات العمل أسفل MTD.
2. علاج نماذج zPDX بالجيمسيتابين / نافيتوكلاكس.
   1. ضع 10 يرقات مطعمة في كل بئر من 12 بئر.
   2. قسم اليرقات إلى أربع مجموعات ، وعالج المجموعة الضابطة في E3 التي تحتوي على 0.1٪ DMSO ، وعالج المجموعات الأخرى ب 5 ميكروغرام / مل جيمسيتابين و / أو 50 ميكرومتر نافيتوكلاكس ، واحتضانها عند 32 درجة مئوية لمدة يومين.
3. تقييم صلاحية الخلية والتركيب الخلوي في نماذج zPDX.
   1. قم بتخدير اليرقات المطعمة بعد العلاج وضعها في 3٪ ميثيل سليلوز.
   قم
   2. بتصوير اليرقات من المنظر الجانبي باستخدام مجهر مضان أو مجهر متحد البؤر.
   3. حدد كثافة إشارات التألق الأحمر والأخضر باستخدام برنامج ImageJ و GraphPad.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ل-جلوتامين جيبكو 21051024 جيمسيتابين جمزان ميثيل السليلوز سيغما M0262 نافيتوكلاكس (ABT-263) سيليك S1001 مثبط Bcl-xL معدات حاقن دقيق ناريشيجي مجهر متحد البؤر لايكا SP8 0.00