$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. قياس الأسماك والتشريح
- ضع سمكة مفردة في طبق بتري نصف مليء ب PBS الطازج وضعها على جانبها الأيمن.
- قم بقياس طول الأسماك من الخطم إلى قاعدة الذيل (السويقة الذيلية) ، ولا تشمل زعانف الذيل ، باستخدام الفرجار الرقمي مم (الشكل 1). هذا هو الطول القياسي (SL).
- يمكن تعيين مجموعة أرقام / حرف لكل سمكة للسماح بتتبع سمكة فردية والقلب المقطوع الناتج لتحليلها لاحقا. تم إدخال البيانات ، بما في ذلك رقم مخزون الوالدين ، والعمر عند التثبيت ، وقياسات SL ، في جدول بيانات وتنظيمها بناء على هذه الملصقات.
- قبل التشريح ، قم بتسمية شرائط أنبوب PCR برقم تتبع مخصص وتعبئتها ب PBT أو أي حل آخر مناسب لمزيد من التحليل.
- قم بتوجيه الجانب البطني للسمك لأعلى في طبق بتري مع تثبيت الجسم باستخدام ملقط يمسك الرأس بين العينين والخياشيم (الشكل 1).
< p class = "jove_title" >
الأسماك الصغيرة (أصغر من 12 مم SL):
- a) باستخدام ملقط حاد ، أو إبرة دقيقة في حامل الدبوس ، قم بإزالة العضلات الصدرية والزعانف من الجسم للكشف عن القلب. يمكن أن تتسبب الحركة المستمرة للملقط أثناء التشريح في حدوث تيارات في PBT تحرك السمكة. هذا يمثل مشكلة خاصة بالنسبة للأسماك الصغيرة ، وبالتالي يمكن استخدام إبرة دقيقة لإزالة العضلات الصدرية والزعانف وفتح تجويف الجسم.
- أ) استخدم الملقط برفق لإخراج القلب من التجويف من تحت الأذين. بالتناوب ، في بعض الأسماك ، قد تتمكن من إزالة القلب عن طريق سحب المنتفخ برفق وسيتبعه باقي القلب. كن حذرا من موقع الأذين إذا كنت تستخدم هذه التقنية حيث يمكن أن تتلف بسهولة. إذا كان هناك نسيج إضافي يأتي مع القلب ، فلا بأس بذلك ويمكن إزالته بعد ذلك.
- أ) إذا كانت السمكة تحتوي على علامة قلبية فلورية مثل Tg (myl7: GFP) twu34 ، فاستخدم منظار الفلورسنت للتشريح وتحقق من إزالة القلب عن طريق الإزهار (الشكل 2).
- أ) بمجرد إزالة القلب من التجويف ، استخدم الملقط لتثبيت القلب وإبرة دقيقة لإزالة الأنسجة الإضافية غير القلبية وبطانة النخابية من خارج القلب.
< p class = "jove_title" >
سمكة أكبر (أكبر من 12 مم SL):
- ب) باستخدام مقص صغير ذو مقبض زنبركي ، قم بعمل ثلاثة شقوق يقل عمقها عن 1 مم: 1- قطع عرضي من خلال الخياشيم 2- قطع عرضي في البطن الأمامي 3- قطع سهمي على الجانب البطني يربط كلا القطعتين (الشكل 3).
- ب) باستخدام ملقط حاد ، قم بإزالة عضلات الصدر والزعانف من الجسم لفتح تجويف الجسم والكشف عن الأنسجة الفضية للتامور (الشكل 4 أ). قم بإزالة هذا النسيج التامور وسيصبح القلب مرئيا (الشكل 4 ب).
- ب) استخدم المقص الدقيق لقطع الشريان المتصل بالشرايين المنتفخة ، الموجود فوق القلب. بمجرد قطع هذا الشريان ، ضع أطراف الملقط تحت الأذين ، واستخدم الملقط لإخراج القلب من التجويف. إذا كان هناك نسيج إضافي يأتي مع القلب ، فلا بأس بذلك ويمكن إزالته لاحقا.
- ب) بمجرد إزالة القلب من التجويف ، استخدم الملقطين لتثبيت القلب وإزالة الأنسجة الزائدة ، أو زوج واحد من الملقط لتثبيت القلب وإبرة دقيقة لإزالة الأنسجة الإضافية غير القلبية. يمكن إزالة البطانة النخابية ، التي يتضح من خلال تصبغها الأسود ، من خارج القلب إذا رغبت في ذلك عن طريق كشط الأنسجة برفق.
