تشريح دماغ أسماك الزرد: تقنية علم الأعصاب للأسماك

الملخص

المصدر: Lopez-Ramirez M. A. et al. ، عزل وثقافة المجالات العصبية المشتقة من الدماغ البالغ. J. Vis. Exp. (2016).

يصف هذا الفيديو تقنية التشريح الدقيق للدماغ من سمكة الزرد البالغة. تساعد هذه الطريقة في الحصول على غلاف داخلي مشتق من الدماغ بالكامل يمكن دراسته بشكل أكبر.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تشريح دماغ الزرد البالغ

1. قم بإعداد سرير تشريح عن طريق ملء طبق بتري مقاس 100 مم × 15 مم بكياسات ثلج هلامية. ثم ضع الغطاء على طبق بتري واحتضنه عند -20 درجة مئوية حتى يتجمد الجل. في الجزء العلوي من الغطاء ، ضع مربعا من ورق الترشيح النظيف ولف ورق الترشيح وطبق بتري بغشاء بلاستيكي.
2. قم بتنظيف وتعقيم جميع أدوات التشريح الدقيق بنسبة 70٪ من الإيثانول أو الحرارة قبل كل استخدام. ضع جميع أدوات التشريح المعقمة بالقرب من مجهر التشريح ، وقبل القتل الرحيم مباشرة ، ضع سرير التشريح تحت المجهر بإضاءة الألياف الضوئية.
3. اجمع 2 من أسماك الزرد البالغة لتحضير الغلاف العصبي للدماغ بالكامل ؛ و 3 إلى 4 أسماك زرد لتوليد المجالات العصبية من مناطق الدماغ التشريح.
4. القتل الرحيم لسمك الزرد البالغ (8-12 شهرا) باستخدام بروتوكول معتمد من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه. بعد ذلك ، اغمر السمكة في 75٪ من الإيثانول لمدة 5-10 ثوان وضعها بسرعة في سرير التشريح متبوعا بقطع الرأس على مستوى الخياشيم باستخدام شفرة جراحية.
   1. للقتل الرحيم للحيوانات، قم بإعطاء جرعة زائدة (300 ملغم/لتر) من ميثان سلفونات التريكايين حتى تتباطأ ضربات قلب تدريجيا وتتوقف الدورة الدموية، ثم اغمرها في الماء المثلج.
5. اقلب الجانب الظهري للرأس لأسفل ، واستخدم المقص قم بعمل قطع طولي من الجانب المقطوع إلى الفم. باستخدام الملقط ، كشف قاعدة الجمجمة وإزالة جميع الأنسجة المجاورة. قطع الجدران الجانبية للجمجمة من بداية الحبل الشوكي باتجاه التكتوم.
6. باستخدام المقص ، قم بقص وإزالة الأعصاب البصرية ثم قم بإزالة جانبي الجزء الجانبي من الجمجمة على مستوى التكتم. اقلب الجانب البطني للرأس لأعلى. باستخدام الملقط ، انزع باقي الجزء القمي من الجمجمة.
7. انقل الدماغ مع الجزء المتبقي من الجمجمة إلى طبق جديد بوسط التشريح (DMEM / F12 مع البنسلين / الستربتومايسين). نظف أنسجة المخ في وسط التشريح باستخدام المقبض البلاستيكي للسكين الصغير ، مع الحفاظ على جميع هياكل الدماغ سليمة.
8. من هذه النقطة ، استمر في البروتوكول باستخدام دماغ الزرد بالكامل.
   1. بدلا من ذلك ، قم بتكييف هذا البروتوكول مع مناطق معينة من الدماغ لتوليد مجالات عصبية من دماغ السمك الزرد الكامل أو من الدماغ أو الدماغ / الدماغ أو المخيخ الذي تم تشريحه بمشرط جديد. استخدم خطا عصبيا معدلا وراثيا لسمك الزرد الفلوري العصبي لتشريح منطقة الدماغ ذات الاهتمام وفقا للشكل 1.

النتائج

الشكل 1: تمايز المجالات العصبية المشتقة من الدماغ من أسماك الزرد.(A-C ، E) صور تباين الطور للمناطق العصبية المشتقة من الدماغ بالكامل المزروعة في وسط التمايز Z خلال 1 (A ، DiVd1) و 3 (B ، DiVd3) و 4 (C و D ، DiVd4) أيام. (ه) منظر ظهري للدماغ كله لأسماك زرد Tg (GFAP: DsRed) البالغة من العمر...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات DMEM / F12 1x تقنيات الحياة 11330-032 البنسلين - ستربتومايسين تقنيات الحياة 15140-122 التريكايين MS-222 سيغما أ 5040 محلول مخزون 4 مجم / مل