$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تحضير عينات الأنسجة السرطانية
- قم بإصلاح أنسجة الورم في الفورمالين المخزن المحايد بنسبة 10٪ (NBF) في كاسيت.
ملاحظه: يتم الحصول على الأنسجة الورمية من أورام الرئة القريبة بشكل عام عن طريق تنظير القصبات ، الذي يتم إجراؤه تحت التخدير المعتدل من قبل أخصائي أمراض الرئة أو أخصائي الرئة. بالنسبة للآفات الطرفية وأمراض الرئة المنتشرة ، يشار إلى خزعة عبر الشعب الهوائية أو الإبرة. عادة ما تتم هذه الإجراءات في غرفة الجراحة أو وحدة العناية المركزة.
- قم بتضمين الكاسيت في البارافين.
ملاحظه: يمكن تحقيق التثبيت عن طريق التروية أو الغمر مباشرة بعد التشريح ، وعادة ما يتطلب 8-10 ساعات. يجب أن يكون حجم التثبيت أعلى بمقدار 15-20 مرة من حجم العينة. لا ينصح بإصلاح أنسجة الخزعة لأكثر من 10 ساعات ، لأن الإفراط في التثبيت يمكن أن يتسبب في إخفاء المستضد. تبلغ سرعة التثبيت حوالي 1 مم / ساعة في درجة حرارة الغرفة.
- تسلل إلى عينة الأنسجة الثابتة بالشمع في معالج الأنسجة (انظر جدول المواد).
ملاحظه: يتم إجراء الجفاف في ثلاثة حمامات كحولية بتركيزات متزايدة 70٪ و 85٪ و 90٪. تتم إزالة الماء أخيرا بثلاثة حمامات كحولية مطلقة نهائية. يتم إجراء المقاصة في ثلاثة حمامات تولوين ، وتسلل الشمع في حمامات الشمع الساخن (44-60 درجة مئوية).
- قم بتضمين الأنسجة داخل قالب مملوء بالبارافين المنصهر (انظر جدول المواد) وانتظر التصلب.
- قسم الأنسجة المضمنة في البارافين بسمك 3 ميكرومتر على ميكروتوم.
- انقل شريط البارافين إلى شريحة زجاجية مجهرية موجبة الشحنة (انظر جدول المواد).
- جفف الشريحة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية
ملاحظة: قم بتخزين أقسام الأنسجة في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية (يفضل) أو في درجة حرارة الغرفة حتى 25 درجة مئوية للحفاظ على المستجد ، والبقعة في غضون 15 يوما من التقسيم.
< p class = "jove_title" >2. تحضير عينات علم الخلايا
- اجمع غسول الشعب الهوائية في محلول حافظ (انظر جدول المواد).
ملاحظه: لهذا ، يتم استخدام تقنية تنظير القصبات القياسية.
- غسل توزيع الشعب الهوائية المراد أخذ عينات منها. اجمع الغسيل في وعاء نظيف. قم بتسمية الحاوية بالاسم الأول والأخير للمريض وتاريخ الميلاد ومصدر العينة.
- انقل غسول الشعب الهوائية إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مل وأضف 2 جم من مسحوق DL-Dithiothreitol (انظر جدول المواد) ، وقم بتدوير الأنبوب لمدة 30 دقيقة ، ثم قم بجهاز الطرد المركزي عند 250 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- قم بإزالة المادة الطافية وأضف 10 مل من محلول حال للبلغم (انظر جدول المواد).
- رج العينة لمدة 20 دقيقة بسرعة متوسطة (المستوى 9) وقم بطردها على حرارة 250 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- قم بإزالة المادة الطافية وقم بإيداع حبيبات الخلية في أنابيب تجميع تحتوي على 10٪ NBF.
- أضف 4 قطرات من كاشف تحضير كتلة الخلية (انظر جدول المواد) إلى حبيبات الخلية.
- انقل حبيبات الخلية إلى كاسيت ، وثبتها في 10٪ NBF ، وقم بتضمينها في البارافين لإعداد كتلة الخلية وتقسيمها (انظر الخطوات 1.1-1.7).