$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تقطير الرئة
- حدد قنية وريدية تجارية بطول بوصة واحدة 20 جم لاستخدامها في التنبيب.
- قم بتعديل طرف القسطرة مع ثنيه يدويا لتوليد انحناء طفيف عند الحافة كما هو موضح في الشكل 1.
- تخدير الفأر بمزيج من الكيتامين (100 مجم / كجم) والزيلازين (15 مجم / كغ) حقن IP ، وتأكيد التخدير من خلال غياب الحركة الانعكاسية. ضع مرهما بيطري على العينين مباشرة بعد التخدير. مباشرة بعد التخدير ، ضع مرهما بيطري على العينين وأعط الكاربروفين (5-10 مجم / كجم مربع) لتسكين الألم بعد الجراحة والتقطير.
- ضع الفأر ضعيفا على منصة مائلة. كما هو موضح في الشكل 2 ، فإن الموثق المكتبي الكبير مع حلقات خياطة مسجلة يعمل بشكل جيد تماما.
- احلق الجزء البطني من الرقبة ونظف وقم بتطهير منطقة الرقبة بنسبة 70٪ كحول. باستخدام قفازات جديدة خالية من اللاتكس والبودرة ، استخدم الأدوات الجراحية المطهرة بالكحول بنسبة 70٪.
- باستخدام مقص حاد ، قم بعمل شق جراحي صغير في الرقبة حوالي 12 مم تحت الجزء السفلي.
- باستخدام ملقط ، اسحب الجلد في الرقبة برفق ذيليا حتى يمكن رؤية الجدار البطني للقصبة الهوائية.
- اسحب اللسان برفق وأدخل القنية مع إمالة الطرف المنحني نحو السطح البطني للماوس. كما في 1.4 ، اسحب برفق على الجلد في الرقبة ، وأدخل القنية في القصبة الهوائية.
ملاحظه: مع القليل من الممارسة ، ستكون القسطرة مرئية وهي تتحرك أسفل القصبة الهوائية. إذا دخلت المريء ، فلن يكون هناك رؤية بصرية لحركة القسطرة. لا يتم إجراء شقوق في القصبة الهوائية.
- بمجرد رؤية القسطرة في القصبة الهوائية في الرقبة ، قم بتقدمها بحوالي 5 مم ليتم تمريرها بشكل موثوق من الحبال الصوتية ولكن لا تزال أعلى بكثير من الكارينا.
- استعد لغرس ما يصل إلى 50 ميكرولتر من السائل عن طريق الحقن من خلال القسطرة بطرف ماصة تحميل الهلام. ضع الطرف في محور اللور ، ولكن قبل الحقن ، انظر بعناية لمراقبة حركة السائل في الطرف المتزامن مع تنفس الماوس. ثم حقن التقطير.
- باستخدام حقنة سعة 1 مل ، قم على الفور بعمل نفخ سريع نسبيا يبلغ 0.6 مل من الهواء في الرئتين من خلال القسطرة للمساعدة في توزيع السائل في عمق الرئتين. قم بإزالة القنية.
- قم بإزالة القنية.
- استخدم كمية صغيرة من مادة لاصقة cyanoacrylate لإغلاق الجرح الجراحي الصغير وفقا لتعليمات إدراج العبوة ل VetBond. ضع الفئران في أقفاص فردية وراقبها بصريا حتى تستيقظ وتتصرف بشكل طبيعي دون أي مؤشر على عدم الراحة.
< p class = "jove_title" >
2. قياس حجم الرئة الثابت
- قم بقياس حجم الرئة باستخدام مبدأ أرخميدس كما هو موضح في الشكل 3. قم بإزالة الرئة الثابتة من الفورمالديهايد وتشريح القلب وأي أنسجة أخرى غير رئوية.
- استخدم جهاز دعم سلكي بسيط محلي الصنع تم إنشاؤه مسبقا يستخدم لإبقاء الرئتين تحت الماء بالكامل.
ملاحظه: يجب أن يكون هذا الجهاز متوافقا مع أي ميزان يتم استخدامه. يتكون الجهاز النموذجي الموضح في الشكل 4 من ماصات بلاستيكية وأسلاك رفيعة (20 جم). يعمل هذا النظام بشكل جيد مع الميزان المستخدم في الفيديو، ولكن يمكن تكييفه بسهولة مع معظم موازين المختبر.
- ضع دقابا به ≈200 مل من الماء على الميزان وفارغه مع وضع القفص الداعم في مكانه في الماء. انظر الشكل 5. قم بإزالة القفص المعدني ضع الرئة على سطح الماء واضغط تحت الماء بالقفص.
- سجل الوزن على الميزان. يعكس هذا الرقم حجم الماء النازح وبالتالي فهو مقياس مباشر لحجم الرئة. احرص على التأكد من أن الرئة أو الخيط أو أي جزء من القفص السلكي لا يلمس جوانب أو أسفل الدورق
- للدقة ، كرر هذا القياس. أخرج الرئة من الماء وجففها على منديل ورقي. قم بتنظيف الدورق مع وضع القفص في مكانه مرة أخرى وكرر قياس حجم الرئة. يجب بعد ذلك حساب متوسط قياسي الحجم.
ملاحظه: إذا تركت الرئتان في الفورمالين لأكثر من أسبوع تقريبا ، إذابة الهواء في الرئتين في السائل. عندما يحدث هذا ، ستغرق الرئة ، لذلك لم يعد من الضروري استخدام أي جهاز كما في الشكل 4 لإبقاء الرئة مغمورة. في مثل هذه الحالة ، يمكن قياس الحجم ببساطة عن طريق إمساك الرئة بأحد سلاسل الخياطة حتى يتم غمرها بالكامل كما هو موضح في الشكل 3.
