التثقيب الكهربائي الذي لا رجعة فيه: تقنية لإزالة ورم البنكرياس في الفأر

الملخص

المصدر: Shankara Narayanan, J. S., et al. نموذج فأر سرطان البنكرياس المتزاوي لدراسة آثار التثقيب الكهربائي الذي لا رجعة فيه. J. Vis. Exp. (2018).

يصف هذا الفيديو إجراء إجراء التثقيب الكهربائي الذي لا رجعة فيه (IRE) للاستئصال غير الحراري لأورام البنكرياس في الفئران. يمكن علاج كل من الأورام تحت الجلد (SQ) وأورام تقويم العظام بنجاح باستخدام IRE في بيئة شديدة التحكم ، مما يسهل العديد من الدراسات بعد العملية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية في جوف.

< p class = "jove_title" >1. IRE من أورام SQ

1. قم بإعداد المواد المطلوبة: المثقب الكهربائي للموجة المربعة ، ومفتاح قدم الأمان ، والأقطاب الكهربائية (مجموعة الإبرة مقابل الملقط) ، والمحولات. احتفظ بالغرز المعقمة (غير القابلة للامتصاص 4-0) ، ومسحات الكحول ، ومقصات الشعر ، وكريم إزالة الشعر ، ومواد تشحيم العين ، والشاش القطني ، والبوبرينورفين ، ومواد التخدير في مكان قريب أيضا.
2. تعقيم أقطاب الملقط أو مصفوفة الإبرة باستخدام التعقيم بالغاز. لا ينصح بالتعقيم. استخدم معقم الخرز الزجاجي لتعقيم الأقطاب الكهربائية بين.
3. اتبع الخطوات لإحداث التخدير بنجاح في الفئران بمجرد أن يصل قطر غرسة الورم SQ إلى 5 مم. باختصار ، قم بإعطاء الفأر المتلقي 0.05 - 1 مجم / كجم مسكن بوبرينورفين SQ ، قبل 30 دقيقة من الجراحة. بعد ذلك ، قم بتخدير الفئران المتلقية ب 2-3٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين (2 لتر / دقيقة) باستخدام مبخر دقيق (أو عوامل تخدير أخرى). احتفظ بالفئران على وسادة تسخين 37 درجة مئوية طوال العملية. ضع مادة التشحيم على العينين لمنع الجفاف. اختبر عمق التخدير من خلال عدم وجود منعكس مذهل في البداية ، وتأكد من التخدير الجراحي من خلال عدم وجود منعكس دواسة لقرصة إصبع القدم اللطيفة. حافظ على التخدير خلال العملية الجراحية بأكملها.
4. ضع الفأر المخدر على جانبه للوصول إلى ورم SQ على الجانب. قم بإزالة الشعر باستخدام المقصات وتنظيف البشرة باستخدام مسحة كحولية.
5. بالنسبة لأورام SQ ، استخدم أقطاب كهربائية ذات إبرتين. ارفع الجلد مباشرة تحت موقع الورم باستخدام الملقط وأدخل الأقطاب الكهربائية عبر الجلد الموازي للجسم مع التأكد من أنها لا تخترق التجويف البريتوني. بمجرد المرور عبر الجلد ، ضع الأقطاب الكهربائية بحيث تضع الورم بين قوسين.
6. قم ببرمجة المثقور الكهربائي لتوصيل نبضات 100 ميكرو ثانية بتردد 1 هرتز عند 1,500 فولت / سم ليصبح المجموع 150 نبضة. قم بتوصيل النبضات باستخدام دواسة القدم. افصل كل مجموعة من 10 نبضات بمقدار 10 ثوان ، للسماح بتبديد الحرارة وتأكيد الموضع الصحيح للأقطاب الكهربائية.
   ملاحظه: بدون استخدام عوامل الشلل ، ستعاني الفئران من تقلصات عضلية مع IRE يمكن أن تسبب إزاحة الأقطاب الكهربائية ما لم يتم تأمينها يدويا.
7. قم بإزالة الأقطاب الكهربائية بعد الجرعات الكاملة ، والتي يجب ألا تتجاوز 200 ثانية. اسمح للفئران بالتعافي بعد IRE في قفصها المنزلي مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. ضع القفص على وسادة تدفئة لتسهيل الشفاء. مراقبة العلامات الحيوية مثل التنفس والتروية وما إلى ذلك أثناء عملية الشفاء. تأكد من علامات رد الفعل الصحيح بمجرد تعافي الماوس ، ثم أعد علبة القفص إلى السكن العادي. يجب تطبيق البوبرينورفين 0.05 - 0.1 ملغم/كغ بعد 8 - 12 ساعة من الجراحة، وكل 8 - 12 ساعة بعد العملية حسب الحاجة لعلامات الألم.

< p class = "jove_title" >2. IRE من أورام تقويم العظام

ملاحظة: يتضمن IRE لأورام تقويم العظام جراحة بقاء ثانية على نفس الفأر ، مما يتطلب موافقة خاصة من IACUC المحلي قبل البدء.

1. تحضير المواد المطلوبة: الأوتوكلاف الأدوات الجراحية مثل المقص والمشارط ومحركات الإبر والملقط المدبب والملقط ذو الرؤوس المسطحة. احتفظ بما يلي في مكان قريب أيضا: خيوط معقمة (قابلة للامتصاص 6-0 وغير قابلة للامتصاص 4-0) ، مسحات كحولية ، مقصات شعر ، كريم مزيل شعر ، زيوت تشحيم للعين ، شاش قطني ، محلول يود بوفيدون 10٪ ، ستائر جراحية ، وسادات تسخين ، مثقب كهربائي بموجة مربعة ، مفتاح قدم أمان ، أقطاب كهربائية ومحولاتها ، بوبرينورفين ، ومخدر.
2. تقييم الفئران لنمو الورم التقويمي عن طريق التصوير الحيوي في الجسم الحي. متابعة نمو الورم عن طريق التصوير بدءا من اليوم 4 بعد زرع تقويم العظام ، وإجراء التصوير مرتين في الأسبوع. في يوم التصوير ، يتم تطبيق (الحقن داخل الصفاق) 30 مجم / كجم D-luciferin إلى فأر متلقي مخدر (2 - 3٪ isoflurane في الأكسجين (2 لتر / دقيقة)) قبل 10 دقائق من التصوير. صورة لنشاط لوسيفيراز باستخدام إعداد اللمعان دون أي مرشحات انبعاث لمدة 5 ثوان على الأقل في جهاز تصوير التلألؤ مع مرحلة تسخين خالية من التألق التلقائي مع الحفاظ على التخدير للفئران.
   ملاحظه: تعتبر أورام تقويم العظام مثالية لعلاج IRE بعد 8 إلى 10 أيام من الزرع عندما تكون الأورام مرئية بوضوح ولا تزال محصورة في البنكرياس كما يمكن رؤيته في صور تلألؤ لوسيفيراز
3. اتبع الخطوات لتحديد موقع الورم المزروع. باختصار ، قم بإعطاء الفأر المتلقي 0.05 - 1 مجم / كجم مسكن بوبرينورفين SQ ، قبل 30 دقيقة من الجراحة. تخدير الفئران المتلقية ب 2-3٪ إيزوفلوران في الأكسجين (2 لتر / دقيقة) باستخدام مبخر دقيق (أو عوامل تخدير أخرى). احتفظ بالفئران على وسادة تسخين 37 درجة مئوية طوال العملية. ضع مادة التشحيم على العينين لمنع الجفاف. اختبر عمق التخدير من خلال عدم وجود منعكس مذهل في البداية ، وتأكد من التخدير الجراحي من خلال عدم وجود منعكس دواسة لقرصة إصبع القدم اللطيفة. حافظ على التخدير خلال العملية الجراحية بأكملها. ضع الماوس على ظهره وقم بتدويره برفق إلى جانبه الأيمن حتى ينكشف الجانب الأيسر من البطن. قم بإزالة شعر البطن من الفأر باستخدام كريم مزيل الشعر ونظفه بالشاش لضمان عدم دخول الشعر الحر إلى البطن بعد الشق. جهز البطن الأيسر للجراحة باستخدام 3 دورات من 10٪ من بوفيدون اليود متبوعة بمناديل كحولية لتطهير الجلد. باستخدام مشرط معقم ، قم بعمل شق عرضي أو مائل بطول 1.5 سم في الجلد ، 1 سم على يسار خط الوسط ، أسفل القفص الصدري ، وسطي قليلا للطحال. بعد ذلك ، قم بتمديد الشق عبر عضلات البطن ، مما يعكس الشق السطحي العلوي. حدد موقع الطحال باستخدام ملقط مسطح وقم بإخراجه برفق من تجويف البطن. اسحب الطحال باستخدام قضيب قطني معقم ، وابحث عن ذيل البنكرياس متصل بأسفل الطحال. باستخدام ملقط مسطح الرؤوس ، اسحب ذيل البنكرياس بشكل جانبي. إذا لم يكن من السهل تحديد موقع الورم ، فاستخدم ملقطا غير حاد لتحريك المعدة والطحال برفق لتحديد الورم.
4. قم بإخراج الورم باستخدام ملقط الأنف الحاد والتقط الورم بإحكام باستخدام الأقطاب الكهربائية البلاتينية للملقط. قم بتوصيل نبضات التثقيب الكهربائي كما هو مبرمج في الخطوة 1.7 باستخدام المسام الكهربائي للموجة المربعة في مجموعات من 10 نبضات يتم التحكم فيها بواسطة مفتاح القدم.
5. حافظ على الورم خارجيا لمدة 60 ثانية على الأقل بعد IRE لمراقبة أي علامات للنزيف. أدخل الورم مرة أخرى في تجويف البطن وأغلق الشق كما هو موضح. باختصار ، أغلق عضلات البطن باستخدام خياطة قابلة للامتصاص 6-0 إما بغرزة مستمرة أو متقطعة ، وأغلق الجلد المغطى باستخدام خياطة متقطعة غير قابلة للامتصاص من 3-0 إلى 6-0. توقف عن التخدير في هذه المرحلة. اسمح للماوس بالتعافي كما هو موضح في 1.7. راقب الماوس حتى يتعافى.
6. مراقبة تأثيرات IRE على نمو الورم باستخدام التصوير في الجسم الحي لوسيفيراز وفقا للخطوة 2.2.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ECM 830 الموجة الكهربائية جهاز هارفارد BTX # 45-0002 ( 58018-004 ) 2 قطب مصفوفة إبرة جهاز هارفارد 45-0167 مفتاح قدم الأمان جهاز هارفارد 45-0211 ملاقط بلاتينية جهاز هارفارد 45-0486 إيزوفلوران شركة سيجما ألدريتش 792632 لاكريلوب فيشر ساينتيك 19090646 بوبرينورفين فيشر ساينتيك NC1292810 د-لوسيفيرين بيركين إلمر 122799 نظام التصوير IVIS Spectrum In Vivo بيركين إلمر 124262 سلالة الماوس C57BL / 6J مختبر جاكسون 000664 / أسود 6 إبر حقنة BD Precisionglide شركة سيجما ألدريتش Z192406 مسحة الكحول (70٪ كحول الأيزوبروبيل) دينار بحريني 326895 مشارط يمكن التخلص منها ، معقمة VWR هاتف 21909 أدوات تطبيق قطنية VWR 89198 إبرة خياطة، 45 سم، مقاس 6-0 جهاز هارفارد 72-3308 إبرة خياطة، 45 سم، مقاس 4-0 جهاز هارفارد 72-3314 بوفيدون اليود 10٪ دينار بحريني 29900-404 وسادة الاحترار القابل للتصرف شركة كينت العلمية تي بي -3 إي ماكينة قص الشعر بالماوس شركة كينت العلمية CL8787 الستارة الجراحية جهاز هارفارد 59-7421