تقييم بؤر تلف الحمض النووي: لتحديد بؤر تلف الحمض النووي الناجم عن الإشعاع في خط الخلايا السرطانية باستخدام تلطيخ التألق المناعي

الملخص

المصدر: Maliszewska-Olejniczak et al. تصوير التألق المناعي لتلف الحمض النووي وبؤر الإصلاح في خلايا سرطان القولون البشري. J. Vis. Exp. (2020).

يصف هذا الفيديو بروتوكولا للكشف عن بؤر إصلاح الحمض النووي الناجم عن الإشعاع في خطوط خلايا سرطان القولون باستخدام تلطيخ التألق المناعي. يتم تنشيط بروتينات إصلاح الحمض النووي في موقع تلف الحمض النووي. لذلك ، يمكننا اكتشافها باستخدام أجسام مضادة محددة وتصورها تحت المجهر الفلوري.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تحضير زراعة الخلايا والإعداد التجريبي

1. الحفاظ على خلايا سرطان القولون البشري ، HCT-116 على النحو الموصى به من قبل المورد ، في طبقات أحادية في قوارير استزراع 75 سم² تحتوي على 10 مل من McCoy's 5a Medium Modified ، مكمل بنسبة 10٪ مصل بقري للجنين و 1٪ محلول مضاد للفطريات مضاد للمضادات الحيوية.
2. تنمو الخلايا في بيئة رطبة بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكربون_عند 37 درجة مئوية حتى التقاء 70٪ مع تجديد متوسط كل 2 إلى 3 أيام.
3. للحصول على شعاع BNCT (على سبيل المثال ، شعاع النيوترونات بالإضافة إلى BPA) وتأثير BNCT لقتل الخلايا السرطانية كجزيئات ثقيلة وترسيب معظم طاقتها داخل الخلايا السرطانية المحتوي....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أغطية 12 مم VWR 89015-725 أطباق بتري 35 ملم سارستيدت 7.183.390.000 4-بورونو إل فينيل ألانين سيجما ألدريتش 17755 مضاد حيوي مضاد للفطريات (100X) جيبكو 15240062 الجسم المضاد المضاد للحمض النووي PKcs (phospho S2056) - درجة ChIP أبكام AB18192 مضاد للفأر IgG (جزيء كامل) - جسم مضاد FITC المنتج في الماعز سيجما ألدريتش F0257 مضاد الفوسفو هيستون H2A. X (Ser139) الجسم المضاد ، استنساخ JBW301 ميرك ميليبور 05-636 الجسم المضاد ل RAD52 أبكام AB117097 مصل الأبقار الألبومين الجزئي الخامس (BSA) روش BSAV-RO DAPI (4 '، 6-Diamidino-2- فينيليندول ، ثنائي هيدروكلوريد) ثيرموفيشر العلمية د1306 مصل الأبقار الجنينية (معطل حراريا) سيجما ألدريتش F9665 الماعز المضاد للأرانب IgG H & L (أليكسا فلور 488) أبكام AB150077 خط خلية HCT-116 ATCC سي سي إل -247™ إيمج جيه المعهد الوطني للصحة (NIH) https://imagej.nih.gov/ij/ صورة برو علم التحكم الآلي لوسائل الإعلام https://www.mediacy.com/imagepro شرائح المجهر ثيرموفيشر العلمية ب -1198 محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) معهد هيرسفيلد لعلم المناعة والعلاج التجريبي ، PAS 20.59.52.0 تريتون X-100 سيجما ألدريتش X100 تريبان بلو ستين، 0.4٪ لوغوز بيوأنظمة تي 13001 محلول التربسين EDTA 0.25٪ سيجما ألدريتش تي 4049