$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. زراعة خطوط الخلايا
- تنمو خلايا هونج كونج في وسط RPMI-1640 كامل مكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ ، و 2 نانومتر من الجلوتامين ، و 100 وحدة / مل بنسلين G ، و 100 مجم / مل من الستربتومايسين عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطب بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكربون2.
ملاحظه: خلايا هونج كونج هي خلايا شجيرية مسابية بشرية طبيعية ويمكن زراعتها وتوسيعها لمدة ≤ 15 مقطعا في المختبر.
< p class = "jove_title" >
2. وضع علامات وإثراء الأورام المسماة لوسيفيراز
- زرع الأورام مباشرة في الجناحين الأيسر والأيمن من إناث الفئران NOD / SCID التي تتراوح أعمارها بين 6-8 أسابيع.
- قم بقياس نمو الورم كل أسبوعين باستخدام الفرجار الرقمي.
- بقطر 1 سم ، قم بتحويل الورم. حقن جرعة واحدة مباشرة في الورم جرعة واحدة من بروتين الفلورسنت الأحمر لوك / بروتين الفلورسنت الأحمر (RFP) - فيروس العدسات (50 ميكرولتر / ورم ، تخفيف 1:30 من مخزون فيروس العدسات عالي العيار المركز) باستخدام حقنة 1 سم مكعب مع إبرة 27 جرا><م.
ملاحظه: يصل قطر ورم المريض عادة إلى 1 سم في غضون 1-2 أشهر. ومع ذلك ، فإن معدل النمو متغير للغاية ويعتمد على عدد من العوامل ، بما في ذلك درجة الورم ونوعه.
< p class = "jove_title" >
3. نموذج ماوس CRC
- تخدير فأر ذكر NOD / SCID يبلغ من العمر ستة إلى ثمانية أسابيع باستخدام الأيزوفلوران (2.5٪ في 100٪ أكسجين ، 1 لتر / دقيقة) في غرفة الحث. تأكد من التخدير بقرص إصبع القدم.
- ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف تحت مجهر تشريح ، مع التأكد من تثبيت أنفه على مخروط أنف الأيزوفلوران وأطرافه الأمامية بشريط لاصق لتحقيق الاستقرار.
ملاحظه: يمكن استخدام العدسات بدلا من مجهر التشريح. يمكن استخدام جسم صغير لتحسين الرؤية والزاوية عند وضعه تحت قاعدة الذيل ، مما يؤدي إلى رفع فتحة الشرج. عادة ، يتم لف أجزاء صغيرة من الشاش على شكل أسطوانة قطرها 1 بوصة.
- قم بتوسيع القناة الشرجية باستخدام ملقط منحني مشحم ذو رؤوس حادة لفضح الغشاء المخاطي الشرجي والمستقيمي البعيد. إزالة البراز.
- استخدم إبرة معقمة قابلة للإزالة 30 جم على حقنة زجاجية سعة 50 ميكرولتر لحقن 10 ميكرولتر من الخلايا السرطانية الموسومة بلوسيفيراز وخلايا هونج كونج (أعد تعليق 10 ميكرولتر من الخلايا السرطانية لكل فأر لنموذج CRC في وسائط RPMI كاملة) في تحت الغشاء المخاطي الخلفي للمستقيم البعيد ، من 1 إلى 2 مم فوق القناة الشرجية. يجب تغطية شطبة الإبرة بالغشاء المخاطي. احرص على عدم المرور إلى تجويف الحوض.
- قم بإزالة الماوس من مخروط أنف الأيزوفلوران. راقبه لمدة 1 ساعة بعد العملية. ابحث عن علامات الضيق ، أي انحني الظهر ، وصعوبة التنفس ، وما إلى ذلك.
فئة
4. التصوير الحيوي
- مراقبة العبء النقيلي الأساسي للورم والكبد والرئة أسبوعيا باستخدام نظام تصوير حيوي لنشاط لوسيفيراز.
- احصل على تجربة CRC للفأر ووزنها. حقن 150 ملغم / كجم لوسيفيرين داخل الصفاق وانتظر 5 دقائق حتى تدور الركيزة في جسم الفأر.
- قم بتخدير الفأر بنسبة 2.5٪ من الأيزوفلوران في 100٪ أكسجين ، 1 لتر / دقيقة في غرفة الحث.
- ضع الماوس في جهاز تصوير BLI مع تثبيت الأنف في مخروط الأنف. عند التعريض للصورة ، تأكد من أن منطقة الاهتمام تواجه الكاميرا. بالنسبة لحقن CRC ، يجب أن يواجه الجانب البطني الكاميرا لكل صورة. صور الماوس في وضع ضعيف.