العلاج المناعي الإشعاعي الموجه مسبقا: طريقة للتوصيل المستهدف للنويدات المشعة العلاجية للأورام

الملخص

المصدر: Membreno، R.، et al. العلاج المناعي الإشعاعي الموجه مسبقا بناء على تفاعل Diels-Alder العكسي للطلب الإلكتروني. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو تقنية العلاج المناعي الإشعاعي الموجه مسبقا أو PRIT ، حيث يتم إعطاء المترافقات المناعية متبوعة بالروابط الإشعاعية لعلاج الأورام. يقلل هذا العلاج المناعي الإشعاعي من جرعات الإشعاع إلى الأنسجة السليمة ويستخدم النويدات المشعة ذات عمر النصف المنخفض للغاية غير المتوافق مع النواقل القائمة على الأجسام المضادة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. إعداد huA33-TCO

ملاحظة: تم الإبلاغ سابقا عن توليف huA33-TCO. ومع ذلك ، لسهولة القارئ ، يتم تكراره هنا مع تعديلات للظروف المثلى.

1. في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.7 مل ، قم بإعداد محلول 125 ميكرولتر من كربونات (E) -cyclooct-4-enyl 2،5-dioxo-1-pyrrolidinyl (TCO-NHS) في ثنائي ميثيل فورماميد الجاف (DMF) بتركيز 40 مجم / مل (0.15 م). يمكن اقتباس هذا المحلول وتجميده عند -80 درجة مئوية لاستخدامه في التجارب المستقبلية.
2. في أنبوب منفصل للطرد المركزي الدقيق سعة 1.7 مل ، قم بإعداد محلول 5 مجم / مل من huA33 في 1 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS ؛ 2.7 ملي كلوريد البوتاسيوم ، 137 ملي كلوريد الصوديوم ، و 11.9 ملي فوسفات البوتاسيوم ، الرقم الهيدروجيني 7.4).
3. باستخدام حصص صغيرة (<5 ميكرولتر) من 0.1 M Na₂CO₃ ، اضبط درجة الحموضة لمحلول الجسم المضاد من الخطوة 1.2 إلى 8.8-9.0. استخدم إما ورق الأس الهيدروجيني أو مقياس الأس الهيدروجيني مع قطب كهربائي دقيق لمراقبة الأس الهيدروجيني وممارسة الحرص على ألا يتجاوز الرقم الهيدروجيني 9.0.
4. إلى محلول الجسم المضاد الموصوف في الخطوة 1.3 ، أضف ببطء حجما يعادل 40 مكافئا مولاريا من TCO-NHS بالنسبة لكمية الجسم المضاد. على سبيل المثال ، إذا كان 5 مجم (30 نانومول) من huA33 في المحلول ، أضف 9.0 ميكرولتر (1.20 ميكرومول) من محلول 40 مجم / مل (0.15 م) من TCO-NHS.
   ملاحظه: TCO-NHS كاره للماء. عند إضافته إلى محلول الجسم المضاد ، أضفه ببطء مع التحريك لمنع هطول الأمطار. لا تتجاوز 10٪ DMF من حيث الحجم في محلول التفاعل النهائي.
5. اسمح للتفاعل بالتحضين عند 25 درجة مئوية على خلاط حراري لمدة ساعة واحدة مع تحريك خفيف (500 دورة في الدقيقة).
6. بعد 1 ساعة ، قم بتنقية الاقتران المناعي huA33-TCO باستخدام عمود تحلية للاستبعاد الحجم المعبأ مسبقا.
   1. قم بموازنة عمود استبعاد الحجم كما هو موضح من قبل المورد لإزالة أي مواد حافظة موجودة في العمود أثناء التخزين. يتضمن الإجراء النموذجي غسل العمود 5x بحجم PBS يتوافق مع حجم العمود: 5 × 2.5 مل من PBS.
   2. أضف خليط التفاعل إلى عمود استبعاد الحجم مع ملاحظة حجم خليط التفاعل.
   3. بعد دخول خليط التفاعل إلى العمود ، أضف كمية مناسبة من PBS ليصل الحجم الكلي للمحلول المضاف إلى العمود إلى 2.5 مل. على سبيل المثال ، إذا نتج عن تفاعل الاقتران حجم إجمالي قدره 1.3 مل ، فأضف 1.2 مل من PBS إضافي إلى العمود.
   4. اجمع المنتج باستخدام 2 مل من PBS كمادة مزوية.
      ملاحظه: ستنتج هذه الخطوة البناء النهائي huA33-TCO في 2 مل من PBS ، الرقم الهيدروجيني 7.4.
7. قم بقياس تركيز huA33-TCO باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis الذي يراقب الطول الموجي 280 نانومتر. معامل الانقراض المولي لمعظم IgGs (ε₂₈₀) هو 210,000 ^{M-1 cm-1}.
8. إذا كان هناك رغبة في محلول يحتوي على تركيز أعلى من المقترن المناعي ، فقم بتركيز محلول huA33-TCO باستخدام وحدة مرشح الطرد المركزي مع قطع الوزن الجزيئي 50,000 باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
   ملاحظه: من المعروف أن العديد من الأجسام المضادة تتجمع أو تترسب أثناء التركيز. عند محاولة هذا الإجراء بجسم مضاد جديد ، يجب على الباحثين الإذعان للأدبيات أو تجربتهم الخاصة في التعامل مع الجسم المضاد المعني.
9. قم بتخزين المقترن المناعي المكتمل huA33-TCO عند 4 درجات مئوية في الظلام إذا لزم الأمر على الفور. إذا كان سيتم استخدامه لأكثر من 4 أيام في المستقبل ، فقم بتخزينه عند -80 درجة مئوية في الظلام.
   ملاحظه: هذه نقطة توقف مقبولة في الإجراء. يجب أن يكون المقترن المناعي المكتمل huA33-TCO مستقرا لمدة 6 أشهر على الأقل عند -80 درجة مئوية في الظلام.

فئة

2. توليف Tz-PEG 7-NHBoc

1. في أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 1.7 مل ، قم بإذابة 5 مجم من إستر التيترازين N-hydroxysuccinimidyl (Tz-NHS ؛ 12.6 ميكرومول) في 0.15 مل من ثنائي ميثيل سلفوكسيد اللامائي (DMSO).
2. في أنبوب منفصل للطرد المركزي الدقيق سعة 1.7 مل ، قم بإذابة 8 مجم من بوليمر PEG الأميني المحمي ب Boc ، O- (2-Aminoethyl) -O'- [2- (Boc-amino) ethyl] hexaethylene glycol (NHBoc-PEG7-NH₂ ؛ 17.1 ميكرومول) في 0.15 مل من DMSO اللامائي
3. إلى محلول Tz-NHS ، أضف 3 ميكرولتر (21.3 ميكرومول ، 1.7 مكافئ مولاري) من ثلاثي إيثيل أمين (TEA) واخلطه جيدا.
4. أضف محلول التيترازين الوردي إلى محلول NHBoc-PEG_{7-NH 2} من الخطوة 2.2 واحتضان خليط التفاعل لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) مع تحريك خفيف.
5. بعد 30 دقيقة ، قم بتخفيف خليط التفاعل 1: 1 في H₂O وتنقيته باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء C₁₈ ذات الطور المعكوس (HPLC) لفصل أي Tz-NHS غير متفاعل عن Tz-PEG 7-NHBoc. استخدم المذيبات الخالية من الحمض لمنع الإزالة المبكرة لمجموعة حماية Boc. راقب كل من Tz-PEG 7-NHBoc و Tz-NHS بطول موجي 525 نانومتر
   ملاحظه: تعتمد أوقات الاستبقاء بشكل كبير على معدات HPLC لكل مختبر (المضخات والأعمدة والأنابيب وما إلى ذلك) ، ويجب تشغيل الضوابط المناسبة قبل التنقية. ومع ذلك ، لتقديم مثال ، إذا تم استخدام تدرج 5:95 MeCN / H₂O (كلاهما بدون أي مادة مضافة) إلى 95: 5 MeCN / H₂O على مدى 30 دقيقة ، ومعدل تدفق 1 مل / دقيقة ، وعمود تحليلي 4.6 مم × 250 مم C₁₈ ، فإن أوقات الاحتفاظ ب Tz-NHS و Tz-PEG 7-NHBoc حوالي 16 دقيقة و 18 دقيقة ، على التوالي.
6. قم بتجميد مادة HPLC المجمعة باستخدام النيتروجين السائل ولف أنبوب التجميع المجمد الآن بورق الألمنيوم. ضع أنبوب التجميع المجمد على مجفف التجفيد طوال الليل لإزالة مرحلة HPLC المتنقلة. سيكون المنتج صلبا ورديا زاهيا مميزا.
   ملاحظه: إذا لم يكن النيتروجين السائل متوفرا ، فقم بتجميد مادة HPLC المجمعة في الثلج الجاف أو طوال الليل في فريزر -80 درجة مئوية.

< p class = "jove_title" >3. توليف Tz-PEG_{7-NH 2}

1. إلى المنتج من الخطوة 2.6 ، Tz-PEG 7-NHBoc ، أضف 1.5 مل من ثنائي كلورو الميثان (DCM) وانقل هذا المحلول إلى قارورة صغيرة مستديرة القاع.
2. أضف 0.25 مل من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (TFA) بالتنقيط إلى المحلول الوردي من الخطوة 3.1.
3. اترك التفاعل يحتضن لمدة 30 دقيقة في RT مع تحريض خفيف.
4. بعد 30 دقيقة ، تبخر المذيب عن طريق التبخر الدوار. لا تتجاوز درجة حرارة الحمام المائي البالغة 37 درجة مئوية.
5. أعد تكوين المنتج اللزج الوردي في 0.5 مل من الماء.
قم
6. بتنقية المنتج باستخدام المرحلة العكسية C₁₈ HPLC لفصل Tz-PEG_{7-NH 2} عن السلائف المحمية ب Boc. راقب كل من Tz-PEG 7-NHBoc و Tz-PEG_{7-NH 2} بطول موجي 525 نانومتر
   ملاحظه: تعتمد أوقات الاستبقاء بشكل كبير على معدات HPLC لكل مختبر (المضخات والأعمدة والأنابيب وما إلى ذلك) ، ويجب تشغيل الضوابط المناسبة قبل التنقية. ومع ذلك ، لتقديم مثال ، إذا تم استخدام تدرج 5: 95 MeCN / H₂O (كلاهما مع 0.1٪ TFA) إلى 95: 5 MeCN / H₂O على مدى 30 دقيقة ، ومعدل تدفق 1 مل / دقيقة ، وعمود تحليلي 4.6 مم × 250 مم C₁₈ ، فإن أوقات الاحتفاظ ب Tz-PEG 7-NHBoc و Tz-PEG_{7-NH 2} حوالي 18 دقيقة و 13 دقيقة ، على التوالي.
7. قم بتجميد مادة HPLC المجمعة باستخدام النيتروجين السائل ولف أنبوب التجميع المجمد الآن بورق الألمنيوم. ضع أنبوب التجميع المجمد على مجفف التجفيد طوال الليل لإزالة مرحلة HPLC المتنقلة. سيكون المنتج صلبا ورديا لامعا.
8. أعد تكوين المنتج من الخطوة 3.7 ، Tz-PEG_{7-NH 2} ، مع 150 ميكرولتر من DMSO ونقله إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.7 مل.
9. قم بقياس تركيز Tz-PEG_{7-NH 2} باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis الذي يراقب الطول الموجي 525 نانومتر. معامل الانقراض المولي ل Tz-PEG_{7-NH 2} (ε₅₂₅) هو 535 ^{M-1 cm-1}.

< p class = "jove_title" >4. توليف Tz-PEG_7-DOTA

1. قم بإذابة Tz-PEG_{7-NH 2} (4.5 مجم ، 6.9 ميكرومول) في 0.15 مل من DMSO (أو تابع المحلول الذي تم إنشاؤه في الخطوة 3.8).
2. أضف 22 مكافئا موليا من TEA (21 ميكرولتر ، 0.15 ملليمول) إلى المحلول المحتوي على التيترازين من الخطوة 4.1.
3. أضف 10 مجم (14.2 ميكرومول) من p-SCN-Bn-DOTA كمادة صلبة وقم بدوامة المحلول لمدة دقيقتين تقريبا أو حتى تذوب المادة تماما.
4. اترك التفاعل يحتضن لمدة 30 دقيقة في RT مع تحريض خفيف.
5. بعد 30 دقيقة ، قم بتخفيف التفاعل 1: 1 في H₂O وتنقية المنتج باستخدام المرحلة العكسية C₁₈ HPLC لإزالة p-SCN-Bn-DOTA غير المتفاعل. يمكن مراقبة p-SCN-Bn-DOTA بطول موجي يبلغ 254 نانومتر ، بينما يتم مراقبة Tz-PEG_7-DOTA بشكل أفضل بطول موجي يبلغ 525 نانومتر><. ملاحظه: من الواضح أن أوقات الاحتفاظ تعتمد بشكل كبير على معدات HPLC لكل مختبر (المضخات ، والأعمدة ، والأنابيب ، وما إلى ذلك) ، ويجب تشغيل الضوابط المناسبة قبل التنقية. ومع ذلك ، لتقديم مثال ، إذا تم استخدام تدرج 5: 95 MeCN / H₂O (كلاهما مع 0.1٪ TFA) إلى 95: 5 MeCN / H₂O على مدى 30 دقيقة وعمود تحليلي 4.6 × 250 مم C₁₈ ، فإن Tz-PEG_7-DOTA و p-SCN-Bn-DOTA لهما أوقات احتفاظ تبلغ حوالي 15.6 دقيقة و 16.1 دقيقة ، على التوالي.
6. قم بتجميد مادة HPLC المجمعة باستخدام النيتروجين السائل ولف أنبوب التجميع المجمد الآن بورق الألمنيوم. ضع أنبوب التجميع المجمد على مجفف التجفيد طوال الليل لإزالة مرحلة HPLC المتنقلة. سيكون المنتج مسحوقا ورديا لامعا.
7. أعد تكوين المنتج في 0.15 مل من DMSO وقم بقياس التركيز باستخدام مقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية UV-Vis الذي يراقب الطول الموجي 525 نانومتر. معامل الانقراض المولي ل Tz-PEG 7-DOTA (ε₅₂₅) هو 535 ^{M-1 cm-1}.
8. تحليل المركب النهائي عن طريق الرنين المغناطيسي النووي (NMR) وقياس الطيف الكتلي عالي الدقة (HRMS) للتحقق من نجاح التوليف. انظر الجدول 1 للاطلاع على التحولات الكيميائية المحددة تجريبيا والأوزان الجزيئية لجميع المركبات التي تمت مناقشتها في هذا العمل.
9. قم بتخزين محلول Tz-PEG_7-DOTA المنقى في الظلام عند -80 درجة مئوية
   ملاحظه: هذه نقطة توقف مقبولة في الإجراء. سلائف Tz-PEG_7-DOTA المكتملة مستقرة لمدة عام واحد على الأقل في ظل هذه الظروف.

فئة

5. ¹⁷⁷Lu Radiolabeling ل Tz-PEG_7-DOTA

تنبيه: تتضمن هذه الخطوة من البروتوكول التعامل مع النشاط الإشعاعي ومعالجته. قبل تنفيذ هذه الخطوات - أو القيام بأي عمل آخر مع النشاط الإشعاعي - يجب على الباحثين استشارة قسم السلامة الإشعاعية في مؤسستهم المحلية. اتخذ جميع الخطوات الممكنة لتقليل التعرض للإشعاع المؤين.

ملاحظة: عند العمل بكميات صغيرة من المعادن المشعة ، يوصى بأن تكون جميع المخازن المؤقتة خالية من المعادن النزرة لمنع التداخل في ربط موقع التنسيق.

1. في أنبوب طرد مركزي سعة 1.7 مل ، أضف 200 ميكرولتر من 0.25 M من أسيتات الأمونيوم المعدلة مع حصص 1 M HCl إلى درجة الحموضة 5.5.
   ملاحظه: في حالة استخدام أقل من 370 ميجابايت من النشاط لوضع العلامات ، يجب تقليل حجم المخزن المؤقت المستخدم إلى 100 ميكرولتر.
2. أضف الكمية المطلوبة من [¹⁷⁷Lu] LuCl₃ إلى محلول المخزن المؤقت. ستعتمد الكمية المضافة على عدد الأشخاص في التجربة والجرعات المشعة التي يتم إعطاؤها. يوصى بإضافة 1-2 جرعة إضافية من النشاط الإشعاعي كإجراء احترازي للتعويض عن الفقدان المحتمل للنشاط الإشعاعي أثناء خطوات التنقية.
3. أضف Tz-PEG_7-DOTA في DMSO إلى الخليط المشع في الخطوة 5.2. يعتمد مقدار Tz-PEG_7-DOTA على عدد الأشخاص الذين يتم اختبارهم. يمكن العثور على مزيد من التفاصيل حول هذا الموضوع في الخطوة 6.2.2.2.
4. اترك المحلول يحتضن عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
5. تحقق من اكتمال الملصقات الراديوية باستخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الفورية الراديوية (radio-iTLC) مع 50 ملي مولار EDTA ، ودرجة الحموضة 5.5 كمرحلة متنقلة. سيبقى المسمى [¹⁷⁷Lu] Lu-DOTA-PEG_7-Tz عند خط الأساس - R_f = 0 - بينما سيتم تنسيق [¹⁷⁷Lu] Lu³⁺ المجاني بواسطة EDTA وسيسافر مع واجهة المذيب ، R_f = 1.0 (الشكل 1 ب).
6. إذا لم يتم تحقيق الملصقات الكمية ، أضف روابط لتنسيق المعدن المشع الحر. بدلا من ذلك ، قم بتنقية [¹⁷⁷Lu] Lu-DOTA-PEG_7-Tz المسمى باستخدام خرطوشة C₁₈. اتبع تعليمات الشركة المصنعة للاستخدام. يتم إعطاء نموذج الإجراء أدناه.
   1. قم بتجهيز الخرطوشة عن طريق تمرير 5 مل من الإيثانول ببطء عبر الخرطوشة باستخدام حقنة كبيرة. ثم ، مرر 5 مل من الأسيتونيتريل ثم 5 مل من منزوعة الأيونات (DI) H₂O.
   2. ارسم محلول الترابط الإشعاعي من الخطوة 5.3 في حقنة أصغر وحقنها ببطء على خرطوشة C₁₈. بعد ذلك ، اغسل الخرطوشة ب 10 مل من DI H₂O لإزالة أي [¹⁷⁷Lu] LuCl₃ غير مرتبط.
   3. قم بإزالة 500 ميكرولتر من الإيثانول. قم بإزالة أي إيثانول من المنتج النهائي عن طريق تمرير الوعاء بمعدل تدفق منخفض من النيتروجين الجاف أو الأرجون لمدة 10-15 دقيقة. بعد ذلك ، قم بإعادة تعليق الربط الإشعاعي في محلول ملحي بحجم محدد في الخطوة 6.2.2.2.

< p class = "jove_title" >6. دراسات في الجسم الحي

تنبيه: كما في القسم 5 ، تتضمن هذه الخطوة من البروتوكول التعامل مع النشاط الإشعاعي ومعالجته. قبل تنفيذ هذه الخطوات ، يجب على الباحثين استشارة قسم السلامة الإشعاعية في مؤسستهم المحلية. اتخذ جميع الخطوات الممكنة لتقليل التعرض للإشعاع المؤين.

1. تحضير
   1. في إناث الفئران العارية الرياضية ، قم بزرع خلايا سرطان القولون والمستقيم 5 × 10⁶ SW1222 تحت الجلد معلقة في 150 ميكرولتر من خليط 1: 1 من وسائط الخلية والمصفوفة (على سبيل المثال ، Matrigel) والسماح لها بالنمو إلى 100-150 مم³ xenograft (14-18 يوما بعد التلقيح).
   2. فرز لتجربة التوزيع الحيوي
      1. بمجرد أن تصبح الأورام ذات حجم كاف كما هو محدد عن طريق قياس الفرجار ، قم بفرز للتأكد من أن كل مجموعة لها نفس متوسط حجم الورم تقريبا. يمكن تمييز في كل قفص بعلامات على الذيل بحبر لا يمحى (شريط واحد ، شريطان ، إلخ).
   3. فرز لدراسة العلاج الطولي
      1. بمجرد أن تصبح الأورام ذات حجم كاف كما هو محدد من خلال قياس الفرجار ، قم بإرفاق علامات الأذن بكل لضمان التتبع الصحيح طوال التجربة.
         ملاحظه: قد تسقط علامات الأذن الرقمية طوال التجربة. نتيجة لذلك ، يوصى بمرافقة هذه العلامات المادية مع شقوق الأذن بطريقة منهجية (على سبيل المثال ، اليمين ، اليسار ، الثنائي ، اليمين × 2 ، اليسار × 2).
   4. قم بفرز بحيث يكون متوسط حجم الورم في كل مجموعة متساويا تقريبا. يمكن تنفيذ الطريقة التالية لفرز باستخدام برنامج جداول البيانات.
      1. ضع قائمة بأرقام تعريف ونمط شق الأذن وحجم الورم في ثلاثة أعمدة منفصلة.
      2. فرز البيانات من أصغر إلى أكبر حجم للورم.
      3. في العمود الرابع ، قم بتعيين رقم قفص لكل وقم بالتنقل عبر الأقفاص بنمط يشبه الثعبان. على سبيل المثال ، إذا كان هناك 5 أقفاص ، ملء هذا العمود "5 ، 4 ، 3 ، 2 ، 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 ..." حتى يتم تعيين قفص لجميع.
      4. بمجرد تعيين الأقفاص ، قم بفرز البيانات حسب رقم القفص. إذا تم استخدام شقوق الأذن ، فتأكد من أن كل في قفص معين له نمط شق أذن فريد. إذا كانت التكرارات (اثنان أو أكثر من نفس النمط) في قفص معين ، فقم بتبديل فأر واحد بآخر من قفص آخر بالنمط المفقود حتى يحتوي كل قفص على ذات أنماط فريدة من نوعها.
2. التركيبات والحقن
   ملاحظه: يستمر تسلسل الحقن لكل من دراسة التوزيع الحيوي والعلاج على النحو التالي: يتم حقن huA33-TCO أولا ، يليه [¹⁷⁷Lu] Lu-DOTA-PEG_7-Tz بعد فترة زمنية محددة مسبقا.
   1. مترافق مناعي
      1. خفف كمية من محلول huA33-TCO من الخطوة 1.9 إلى تركيز 0.8 مجم / مل في محلول ملحي معقم بنسبة 0.9٪.
      2. ارسم جرعات من 150 ميكرولتر (100 ميكروغرام) من محلول huA33-TCO في محاقن معالجة مسبقا بألبومين مصل بقري 1٪ (BSA) في PBS وقم بتخزين هذه المحاقن على الثلج.
         ملاحظه: يقلل علاج BSA من الارتباط غير المحدد للجسم المضاد بجدران المحقنة.
      3. قم بتسخين تحت مصباح حراري لمدة 3 دقائق لتوسيع وريد الذيل.
      4. حقن محلول huA33-TCO في وريد الذيل للفأر الحامل للطعم الغريب. اسمح ب 24 ساعة (أو فترة زمنية مختلفة محددة مسبقا) حتى يتراكم huA33-TCO في ورم الفأر.
   2. الترابط الإشعاعي
      1. التسمية الراديوية Tz-PEG_7-DOTA كما هو موضح في القسم 5.
      2. اسحب جرعات في 150 ميكرولتر من محلول ملحي معقم بنسبة 0.9٪ يحتوي على 1.1 مكافئ مولار من Tz-PEG_7-DOTA بالنسبة لكمية huA33-TCO المعطاة. على سبيل المثال ، إذا تم حقن 100 ميكروغرام (0.67 نانومول) من huA33-TCO في وتم صنع خليط تفاعل [¹⁷⁷Lu] Lu-DOTA-PEG_7-Tz بنشاط محدد يبلغ 12.4 جيجابايت / ميكرومول ، سحب جرعات تحتوي على 9.14 ميجابايت من النشاط لكل منهما. هذا يتوافق مع 0.74 نانومول من Tz (1.1 معادلة مولارية بالنسبة ل huA33-TCO).
      3. قم بتسخين تحت مصباح حراري لمدة 3 دقائق لتوسيع وريد الذيل.
      4. حقن جرعة الترابط الإشعاعي في وريد الذيل للفأر الحامل للطعم الغريب. يتم تحديد مقدار النشاط المراد حقنه من قبل الباحث. أظهرت البيانات المنشورة آثارا علاجية تعتمد على الجرعة على حجم الورم في نطاق يتراوح بين 7.4 و 55.5 ميجابايت.

النتائج

الشكل 1: (أ) تخطيطي للوسم الإشعاعي ل [¹⁷⁷Lu] Lu-DOTA-PEG 7-TZ ؛ (ب) مخطط كروماتوغرام راديو-iTLC التمثيلي الذي يوضح النقاء الكيميائي الإشعاعي بنسبة >98٪ ل [¹⁷⁷Lu] Lu-DOTA-PEG_7-Tz.

المواد