نموذج استئصال اللفائف الفئراني: دراسة التمثيل الغذائي للصفراوات الناجم عن استئصال اللفائفي في نموذج الفئران

الملخص

المصدر: Zhang, R., et al. فرط تراكم الصفراء الناجم عن استئصال اللفائفي في أمعاء الفأر. J. Vis. Exp. (2017)

يصف هذا الفيديو البروتوكول التفصيلي لاستئصال الأمعاء في نموذج الفئران. توفر هذه التقنية نظرة ثاقبة على سوء امتصاص الصفراء الناجم عن استئصال اللفائفي ، والتراكم المفرط ، والسمية في أمعاء الفأر.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. استئصال اللفائفي ومفاغرة

1. تخدير الفئران بالأيزوفلوران (2-3٪) في غرفة حضانة صغيرة. تحديد التخدير الكافي باستخدام تقنية قرصة إصبع القدم أثناء تناول للإيزوفلوران.
2. قم بإزالة شعر البطن عن طريق وضع منتجات إزالة الشعر وامسح الشعر باستخدام الإسفنج الجراحي مع الحفاظ على التخدير. ضع الفأر على طاولة جراحية للحيوانات الصغيرة يتم التحكم في درجة حرارتها (الشكل 1 أ) للحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية. حافظ على التخدير باستخدام الأيزوفلوران (1 - 2٪) من خلال قناع الوجه. عالج عيون الفأر بمرهم العين.
3. نظف الجلد باستخدام بوفيدون اليود و 70٪ كحول وقم بتغطية المنطقة الجراحية من البطن بشاش جراحي معقم (الشكل 1 ب).
4. قم بعمل شق في البطن باستخدام مشرط جراحي بمجرد بدء التخدير. استخدم قضيبا ذو رأس قطني لحماية الأمعاء واسحب عضلة بطن الفأر باستخدام ضاغطات لفتح تجويف البطن بالكامل وفضحه (الشكل 1 ج).
5. حدد موقع الأعور. بدءا من الأعور ، حرك الدقاق المتصل وجزء من الصائم بعناية خارج تجويف البطن (الشكل 1 د).
   ملاحظه: يمكن التعرف على الأعور بسهولة بسبب حجمه الكبير حتى بعد الصيام.
6. اربط الفرع العلوي من الشريان المساريقي العلوي بخياطة حريرية 7-0 لإغلاق الدم الذي يغذي الجزء اللفائفي المراد استئصاله. يتغير اللون اللفائفي من اللون الوردي إلى الأرجواني الداكن بعد الربط. (الشكل 1E - F).
7. اعتمادا على الغرض من التجربة ، باستخدام المقص ، المكوس وإزالة 50٪ أو 90٪ من الدقاق.
   ملاحظه: بالنسبة للجراحة الصورية، لا تقم بإجراء ربط الشريان المساريقي العلوي ولا تزيل الدقاق.
8. اغسل تجويف كلا الطرفين اللفائفي بنسبة 0.9٪ محلول ملحي.
   ملاحظه: نظرا لأن الدقاق السليم المتبقي لا يزال يتلقى إمدادات دم طبيعية من الشريان المساريقي العلوي ، التخلص من كمية صغيرة من الدم أثناء العملية. يشير هذا أيضا إلى أن تدفق الدم إلى الأطراف اللفائفية أمر طبيعي ويضمن عدم وجود نقص تروية أثناء إجراء مفاغرة (الشكل 1G).
9. حدد موقع المسارينتر على جانب كلا الطرفين اللفائفيين. قم بمحاذاة المساريقات وخياطة الأطراف اللفائفية معا باستخدام 8-0 خياطة (الشكل 1G - H).
10. خياطة الجانب المقابل من الدقاق للحفاظ على اللفائف مفغرة بطريقة طبيعية (الشكل 1I).
11. قم بخياطة الجانبين العلوي والسفلي بين الغرز الأصلية لربط الطرفين اللفائفي معا تماما (الشكل 1J).
12. تأكد من عدم وجود تسرب من موقع مفاغرة بعد الانتهاء من إجراء الخياطة المكونة من ثلاث خطوات (الشكل 1G-I). أعد الأعور والأمعاء الدقيقة إلى تجويف البطن إلى الموقع التشريحي الأصلي. اغسل منطقة الجراحة بمحلول ملحي دافئ بنسبة 0.9٪ باستخدام إبرة حادة. (الشكل 1 ك).
13. أغلق شق طبقة عضلة البطن بخياطة 6-0. قم بمحاذاة شق جلد البطن باستخدام الملقط وخياطة جلد البطن لتسهيل التئام الجروح على النحو الأمثل (الشكل 1L).

2. رعاية ما بعد الجراحة

1. انقل فئران ما بعد الجراحة إلى وحدة العناية المركزة للتعافي. ضعهم في قفص من الورق على وسادة تدفئة يتم التحكم في درجة حرارتها لمواصلة التعافي بعد الجراحة طوال الليل. قم بتزويد الفئران بالطعام الطري بالإضافة إلى الطعام والماء العاديين.
2. تطبيق البوبرينورفين (0.05 - 0.1 ملغ/كغ) مع الحقن تحت الجلد كل 8-12 ساعة لعلاج التسكين.
   ملاحظه: قتل الفئران عن طريق ثاني أكسيد الكربون₂ إذا كانت مريضة بشدة.
3. في نقطة النهاية ، قم بالتضحية بالفئران باستخدام جرعة زائدة من الأيزوفلوران وحصاد العينات حسب الحاجة (القسم 3).

< p class = "jove_title" >3. تقييم فرط تراكم الصفراء الناجم عن استئصال اللفائفي

1. قم بوزن وتشريح الفئران بعد يوم واحد من استئصال 0٪ (وهم) أو 50٪ أو 90٪ من الدقاق.
2. قم بإزالة الجهاز الهضمي ووزنه. احسب نسبة وزن المؤشر الجلايسيمي إلى وزن الجسم لتقييم شدة سوء امتصاص الملح الصفراوي والتراكم الزائد.
3. انقل المسالك الهضمية إلى أنابيب مخروطية سعة 15 مل وقم بتقطيعها إلى شرائح قصيرة باستخدام المقص. بعد القطع ، جهاز الطرد المركزي عند 3,000 × جم لمدة 10 دقائق. انقل المادة الطافية (سائل الجهاز الهضمي الذي يحتوي على أملاح صفراء) إلى أنبوب نظيف.
4. قياس الحجم والوزن الإجمالي لسائل الجهاز الهضمي وحساب وزن السائل إلى نسبة وزن الجهاز الهضمي لإجراء مزيد من التقييم لفرط تراكم الصفراء في الجهاز الهضمي.
5. تحديد الكمية الصفراوية الإجمالية في المادة الطافية عن طريق مقايسة حمض الصفراء.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: الإجراءات الجراحية لاستئصال اللفائفي. (أ) الحفاظ على درجة حرارة الجسم باستخدام طاولة جراحية للحيوانات الصغيرة يتم التحكم في درجة حرارتها. (ب) تغطية منطقة الجراحة بشاش معقم بعد تحضير جلد البطن. (ج) كشف الأمعاء الدقيقة من خلال شق البطن في خط الوسط. (د) الأعور (المميز بالخط الأبيض المتقطع) يتم وضع علامة لتحديد موقع الدقاق. كشف الدقاق (الخط الأصفر المتقطع) وفروع الشريان ال...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات C57BL / 6J مختبر جاكسون مجهر تشريح أوليمبوس ش.ز61 للجراحة تحكم في درجة حرارة شركة Physitemp Instruments، Inc TCAT-2LV للتحكم في درجة حرارة الجسم مبخر مخدر إيزوفلوران فيكيب 911104 للتخدير ملقط التشريح أدوات العلوم الجميلة ، وشركة 11274-20 للجراحة مقص أدوات العلوم الجميلة ، وشركة 14084-08 للجراحة حامل إبرة شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-7882 للجراحة شفرة إبرة السكاكين الصغيرة فيشر ساينتيك 10318-14 للجراحة 6-0 خياطة أحادية الشعيرات إيثيكون 1698 جرام لإغلاق جلد البطن خياطة حريرية 7-0 إيثيكون 766 جرام للربط 8-0 خياطة أحادية الشعيرات إيثيكون 1714 جرام للمفاغرة الإسفنج الجراحي شركة Dynarex 3333 ريال للجراحة أدوات تطبيق صغيرة ذات رؤوس قطنية فيشر ساينتيك 23-400-118 للجراحة إيزوفلوران بيرامال للرعاية الصحية المحدودة 66794-013-25 للتخدير بوبرينورفين هيدروكلوريد ريكيت بينكيزر للمستحضرات الصيدلانية هاتف: 12496-0757-1 للمسكن 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم شركة براون الطبية 0264-7800-10 للغسيل / الحقن بوفيدون اليود الإعدادية الحل شركة Dynarex 1413 لتحضير الجلد مرهم بيطري Puralube دكرا للمنتجات البيطرية هاتف: 17033-211-38 لحماية العين غسول مزيل الشعر شركة Church & Dwight Co.، Inc. لتحضير الجلد وحدة العناية المركزة ثيرموكير FW-1 للتعافي بعد الجراحة مجموعة فحص الحمض الصفراوي الكلي تشخيص Genzyme DZ042A-K01 لفحص حمض الصفراء