مقايسة قياس الجر الخلوي: طريقة لقياس قوة الجر التي تمارسها الخلايا السرطانية على ECM

الملخص

المصدر: Ali ، M. Y. ، et al. عزل خلايا ورم القولون البشري الأولية من الأنسجة الجراحية وزراعتها مباشرة على ركائز مرنة ناعمة لقياس الجر الخلوي. J. Vis. Exp. (2015).

يصف هذا الفيديو مقايسة الفحص المجهري لقوة الجر. يحدد الاختبار الجر الخلوي لخلايا سرطان القولون البشرية على المصفوفة خارج الخلية الموجودة على هيدروجيل مرن ناعم يحتوي على حبات فلورية مدمجة. يتم قياس الإزاحة الناتجة عن الخرز الفلوري باستخدام برنامج مناسب.

البروتوكول

فئة

1. فحص الفحص المجهري لقوة الجر

1. قم بتسخين محلول 0.25٪ تريبسين-EDTA / 10٪ SDS عند 37 درجة مئوية في حمام مائي لمدة 10 دقائق قبل بدء تجارب الجر.
2. قم بإزالة هلام واحد (وظيفية المواد الهلامية PA والزجاج بجزيئات ECM ، فيبرونيكتين بشري بتركيز 50 ميكروغرام / مل) من حاضنة زراعة الخلايا في كل مرة ومكانها على مرحلة المجهر المقلوب الفلوري (تكبير 32X).
3. ابحث عن خلية واحدة في مجال العرض. قم بإزالة غطاء طبق بتري.
4. التقط صورة تباين طور للخلية (على سبيل المثال ، الشكل 1).
5. قم بتبديل وضع التصوير إلى التألق وحدد المرشح المناسب. لا تحرك مرحلة المجهر أو العينة خلال هذا الوقت.
6. التقط صورة لل....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. مزرعة خلايا القولون البشري الأولية الناجحة (السرطانية والطبيعية) على مواد هلامية مختلفة للتصلب وعلى طبق البوليسترين. تظهر صور تباين الطور مورفولوجيا نموذجية ل (أ) الخلايا السرطانية و (ب) الخلايا الطبيعية على ركائز صلابة مختلفة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات برنامج تلفزيوني لونزا 17-516 فهرنهايت التربسين ورثينجتون LS003736 أكريلاميد سيجما ألدريتش أ 4058 N-methylenebisacrylamide (مكرر) سيجما ألدريتش م 1533 فيبرونيكتين بشري BD العلوم البيولوجية 354008 0.1 ميكرومتر حبات فلوروسنت تقنيات الحياة F8801 0.25٪ تريبسين EDTA تقنيات الحياة هاتف: 25200-056 زلات غطاء زجاجي 12 مم 2 كورنينج 2865-12