Method Article

مقايسة قياس الجر الخلوي: طريقة لقياس قوة الجر التي تمارسها الخلايا السرطانية على ECM

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Ali ، M. Y. ، et al. عزل خلايا ورم القولون البشري الأولية من الأنسجة الجراحية وزراعتها مباشرة على ركائز مرنة ناعمة لقياس الجر الخلوي. J. Vis. Exp. (2015).

يصف هذا الفيديو مقايسة الفحص المجهري لقوة الجر. يحدد الاختبار الجر الخلوي لخلايا سرطان القولون البشرية على المصفوفة خارج الخلية الموجودة على هيدروجيل مرن ناعم يحتوي على حبات فلورية مدمجة. يتم قياس الإزاحة الناتجة عن الخرز الفلوري باستخدام برنامج مناسب.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
فئة

1. فحص الفحص المجهري لقوة الجر

  1. قم بتسخين محلول 0.25٪ تريبسين-EDTA / 10٪ SDS عند 37 درجة مئوية في حمام مائي لمدة 10 دقائق قبل بدء تجارب الجر.
  2. قم بإزالة هلام واحد (وظيفية المواد الهلامية PA والزجاج بجزيئات ECM ، فيبرونيكتين بشري بتركيز 50 ميكروغرام / مل) من حاضنة زراعة الخلايا في كل مرة ومكانها على مرحلة المجهر المقلوب الفلوري (تكبير 32X).
  3. ابحث عن خلية واحدة في مجال العرض. قم بإزالة غطاء طبق بتري.
  4. التقط صورة تباين طور للخلية (على سبيل المثال ، الشكل 1).
  5. قم بتبديل وضع التصوير إلى التألق وحدد المرشح المناسب. لا تحرك مرحلة المجهر أو العينة خلال هذا الوقت.
  6. التقط صورة للحبات الفلورية التي تم إزاحتها بواسطة الجر الخلوي (الشكل 2 ج).
  7. أضف 1 مل من محلول التربسين / SDS إلى طبق بتري لفصل الخلية عن الجل. لا تحرك مرحلة المجهر أو العينة خلال هذا الوقت. أيضا ، التقط صورة تحكم للخلية لضمان الإزالة الكاملة من الجل.
  8. التقط صورة مرجعية (قوة فارغة) للحبات بعد إزالة الخلية.
  9. كرر الخطوات 1.2-1.8 لجميع المواد الهلامية الأخرى.
  10. قم بإنشاء مكدس صور باستخدام ImageJ من الصورتين اللتين تم الحصول عليهما في الخطوتين 1.6 و 1.8 لكل حالة. لإنشاء مكدس الصور، استخدم التسلسل التالي للأوامر في ImageJ بعد فتح الصور: Image → Stacks → Images to stacks.
  11. للحصول على حقل الإزاحة والجر ، استخدم مكونات ImageJ الإضافية باتباع الطرق المنشورة. احصل على أكواد ودروس مفصلة لهذه المكونات الإضافية باستخدام الرابط التالي: https://sites.google.com/site/qingzongtseng/imagejplugins.
    1. قم بمحاذاة الصور في المكدس باستخدام المكون الإضافي "مطابقة القوالب". استخدم التسلسل التالي من الأوامر في ImageJ بعد فتح مكدس الصور الذي تم إنشاؤه في الخطوة 1.10: المكونات الإضافية → مطابقة القالب → محاذاة الشرائح في المكدس → موافق. استخدم مكدس الصور الجديد هذا في الخطوات التالية.
    2. احصل على حقل الإزاحة باستخدام المكون الإضافي PIV (قياس سرعة صورة الجسيمات) (الشكل 2 د). استخدم التسلسل التالي من الأوامر بعد فتح مكدس الصور المحفوظ في الخطوة 1.11.1: المكونات الإضافية → PIV → PIV التكراري (أساسي) → موافق → اقبل PIV والإخراج → موافق. احفظ إخراج PIV في نفس الدليل كما هو الحال في مكدس الصور الأصلي. استخدم هذا كمدخل في الخطوة التالية.
    3. أخيرا ، استخدم المكون الإضافي FTTC (قياس الجر الخلوي لتحويل فورييه) للحصول على خريطة الجر (الشكل 2E). استخدم التسلسل التالي من الأوامر: المكونات الإضافية → FTTC → إدراج خصائص المواد ، أي معامل Young ونسبة Poisson لجل PA → OK → حدد ملف إخراج PIV المحفوظ في الخطوة 1.11.2 → OK. حفظ نتائج FTTC في نفس الدليل كما هو الحال في مكدس الصور وإخراج PIV.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1. مزرعة خلايا القولون البشري الأولية الناجحة (السرطانية والطبيعية) على مواد هلامية مختلفة للتصلب وعلى طبق البوليسترين. تظهر صور تباين الطور مورفولوجيا نموذجية ل (أ) الخلايا السرطانية و (ب) الخلايا الطبيعية على ركائز صلابة مختلفة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments برنامج تلفزيوني لونزا 17-516 فهرنهايت التربسين ورثينجتون LS003736 أكريلاميد سيجما ألدريتش أ 4058 N-methylenebisacrylamide (مكرر) سيجما ألدريتش م 1533 فيبرونيكتين بشري BD العلوم البيولوجية 354008 0.1 ميكرومتر حبات فلوروسنت تقنيات الحياة F8801 0.25٪ تريبسين EDTA تقنيات الحياة هاتف: 25200-056 زلات غطاء زجاجي 12 مم 2 كورنينج 2865-12

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Traction CytometryTraction ForceCancer CellsExtracellular MatrixFluorescent BeadsPolyacrylamide HydrogelFluorescence MicroscopyTrypsin EDTAPhase Contrast ImagingDisplacement Analysis

Related Articles