Method Article

فحص الهيكل الخلوي وتنظيم الالتصاق البؤري: طريقة قائمة على التألق المناعي لدراسة التصاق الخلايا وانتشارها على الركائز

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Ali ، M. Y et al. ، عزل خلايا ورم القولون البشري الأولية من الأنسجة الجراحية وزراعتها مباشرة على ركائز مرنة ناعمة لقياس الجر الخلوي. J. Vis. Exp. (2015)

يصف هذا الفيديو تقنية دراسة الهيكل الخلوي والتصاقات البؤرية في خلايا سرطان القولون البشري الأولية لفهم اختلافاتها اعتمادا على صلابة الركيزة. تسمح هذه الثقافة للخلايا السرطانية على ركائز ناعمة وصلبة بإجراء قياسات فيزيائية حيوية مختلفة لتشخيص السرطان.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. فحوصات الفحص المجهري المناعي

  1. خذ الركائز مع الخلايا ليتم تلطيخها مناعة على الغطاء الصفحي وإزالة وسائط الزراعة.
  2. اشطف الركائز باستخدام PBS وقم بإصلاح الخلايا بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد في PBS لمدة 20 دقيقة في RT.
  3. اغسل الركائز باستخدام PBS ثلاث مرات (5 دقائق في كل مرة). وبالتالي ، احتضان الركائز بمحسن إشارة 500 ميكرولتر لمدة 30 دقيقة واشطفها باستخدام PBS.
  4. احتضان الخلايا بالجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد للفينكولين عند تخفيف 1: 250 في PBS لمدة 45 دقيقة في RT. ثم اغسل الركائز باستخدام PBS 3 مرات (5 دقائق في كل مرة).
  5. احتضان العينات بالجسم المضاد الثانوي Alexa Fluor 488 IgG المضاد للفأر عند تخفيف 1: 200....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1. تلطيخ الفلورسنت المناعي ل F-actin و vinculin على ركائز هلامية ناعمة وبوليسترين صلب.لم تكن هناك ألياف أكتين موجودة في الخلية السرطانية الأقل انتشارا (A1) أو الخلية الطبيعية (A2) على المواد الهلامية الناعمة 2 كيلو باسكال. ومع ذلك ، فإن الالتصاقات البؤرية المحتوية على الفينكولين موجودة على المواد الهلامية الناعمة (B1-B2).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الكواشف برنامج تلفزيوني لونزا 17-516 فهرنهايت بارافورمالدهيد علوم المجهر الإلكتروني RT15710 محسن الإشارة تقنيات الحياة رقم I36933 الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد للفينكولين سيجما ألدريتش ف9131 Alexa Fluor 488 الماعز المضاد للفأر IgG تقنيات الحياة أ 11001 TRITC الفالويدين المترافقات سيجما ألدريتش ص 1951 المواد زلات غطاء زجاجي 12 مم 2 كورنينج 2865-12

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cytoskeleton OrganizationFocal AdhesionImmunofluorescence AssayCell AdhesionSubstrate RigidityVinculin StainingActin FilamentsConfocal MicroscopyParaformaldehyde FixationPhalloidin Conjugates

Related Articles