عزل الخلايا الكيراتينية في جلد الإنسان: طريقة لزراعة الخلايا الكيراتينية الأولية من عينات الجلد

الملخص

Johansen، C. et al. توليد واستزراع الخلايا الكيراتينية البشرية الأولية من الجلد البالغ. J. Vis. Exp. (2017)

يصف هذا الفيديو عزل الخلايا الكيراتينية - أبرز خلايا طبقة البشرة في جلد الإنسان ، من خلال استخدام مزيج من طرق الهضم الأنزيمي والتعطيل الميكانيكي. تساعد هذه الطريقة في النمو التفضيلي للخلايا الكيراتينية على أنواع خلايا الجلد الأخرى باستخدام وسط نمو انتقائي.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

< p class = "jove_title" >1. عزل الخلايا الكيراتينية عن جلد الإنسان

1. ابدأ بعمل الحلول التالية: محلول 50 مل من 0.25٪ تريبسين و 0.1٪ جلوكوز في DPBS. امزج وقم بتعقيم المحلول (0.2 ميكرومتر). تحضير 10 مل من محلول RPMI-1640 + 2٪ FBS ، و 50 مل من DPBS والوسط الخالي من مصل الخلايا الكيراتينية (KSFM). أضف مكملات KSFM و 250 ميكرولتر من الجنتاميسين إلى 500 مل من KSFM. قم بتسخين المحاليل مسبقا إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
2. اجمع الجلد من المتطوعين البالغين الأصحاء الذين ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات KSFM ثيرموفيشر العلمي 17005-034 وسط زراعة الخلية مكملات KSFM ثيرموفيشر العلمي 37000-015 مكملات KSFM DPBS ثيرموفيشر العلمي 14190-144 DPBS بدون الكالسيوم و
مغنيسيوم DMSO سيجما ألدريتش د8418 ثنائي ميثيل سلفوكسيد جنتاميسين ثيرموفيشر العلمي 15710-049 مادة مضافة متوسطة لزراعة الخلية مرشح التعقيم سارتوريوس 16534 [م] فلتر حقنة بحجم مسام 0.2
ميكرومتر التربسين سيجما ألدريتش تي 7409 تستخدم لتربسين الخلايا الجلوكوز سيجما ألدريتش جي 7528 - RPMI-1640 ثيرموفيشر العلمي 61870-010 - FBS ثيرموفيشر العلمي 16000044 يستخدم لتعطيل التربسين ملقط - - يمكن أن تكون الملقط من أي شركة
مستعمل مقص - - يمكن أن يكون المقص من أي شركة
مستعمل مشرط سوان مورتون 0501 يمكن أن تكون المشارط من أي شركة
مستعمل 70٪ إيثانول - - - وسادات الشاش نوباميد 875420 يمكن لضمادات الشاش من أي مزود
يمكن استخدامها مسوي القدم Credo Solingen 1510 يمكن لمسوي القدم من أي مزود
يمكن استخدامها أطباق بتري برنامج النقاط التجارية 93100 يمكن لأطباق بتري من أي مزود
يمكن استخدامها فلتر معدني - - معدن بحجم ثقب 1 مم
راووق 75 سم² قوارير استزراع NUNC 156499 - 150 سم² قوارير استزراع TTP 90151 - 0.05٪ محلول Trypsin-EDTA ثيرموفيشر العلمي هاتف: 25300-062 تستخدم لتربسين الخلايا عندما
المرور