تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. التجارب والكواشف والمعدات
- استخدم الفئران المطابقة للعمر والجنس. ابدأ الدراسة في عمر 7-9 أسابيع لأن الجلد في معظم الفئران في حالة تيلوجين (مرحلة الراحة) في هذا العمر تقريبا.
- راقب سلوك أثناء الدراسة وإذا قاتلوا ، وهو ما يحدث غالبا مع الذكور ، فقم بإيوئهم بشكل منفصل. قد تتسبب المعارك في حدوث جروح في الجلد ، مما يعزز تكوين الورم. تفضل إناث الفئران بسبب سلوكها الأقل عدوانية. يتراوح حجم المجموعة التجريبية النموذجي بين 8-20 لكل مجموعة.
ملاحظه: تساعد حسابات الطاقة بناء على التباين البيولوجي الذي شوهد في الدراسات السابقة في اختيار حجم مجموعة كبير بما فيه الكفاية. تشمل السلالات المستخدمة كأمثلة في هذه المقالة Balb / c و C57BL / 6. ومع ذلك ، فقد تم استخدام العديد من سلالات الفئران الأخرى ، مثل SENCAR و FVB ، مع فئران طراز DMBA-TPA و Wistar و Sprague-Dawley. هناك حاجة إلى ترخيص من اللجنة الوطنية أو المحلية للعمل الحيواني قبل بدء الدراسة. بالإضافة إلى اعتبارات الرفاهية العامة ، فإن نقاط النهاية الخاصة بالنموذج هي عادة سرطان الخلايا الحرشفية (SCC) وعدوى الجلد. تعتبر الخدوش في الجلد بسبب الحكة بعد تطبيق المواد الكيميائية المسببة للأورام في الأسيتون نموذجية ، ولكن بخلاف ذلك ، يجب ألا تظهر على أي علامات على عدم الراحة. يساعد الوزن بانتظام (على سبيل المثال ، مرتين في الشهر) في تقييم رفاهية.
- استخدم DMBA و TPA ، وكلاهما مخفف في الأسيتون. تركيز عمل DMBA هو 250 جم / لتر. جرعة واحد هي 50 ميكروغرام من DMBA في 200 ميكرولتر من الأسيتون. تركيز مخزون TPA هو 125 جم / لتر وتركيز المعالجة 25 جم / لتر. جرعة TPA لحيوان واحد هي 5 ميكروغرام في 200 ميكرولتر من الأسيتون.
تحذير: DMBA ضار إذا ابتلع وقد يسبب السرطان. يتبخر الأسيتون بسرعة وقابل للاشتعال. قد يسبب الدوخة وتهيج العينين. استخدم قناع التنفس و / أو اعمل تحت تدفق الفراغ. قم بتغيير القفازات بعد التعامل مع أي من هذه المواد الكيميائية. تمنع الأقفاص ذات التهوية الفردية انتشار المواد الكيميائية أثناء إسكان الفئران. بعد التطبيق، اجمع أطراف الماصة المستخدمة في التعامل مع DMBA وتخلص منها كنفايات خطرة.
ملاحظه: يجب حماية DMBA من الضوء. يتم تخزين TPA المخفف عند -20 درجة مئوية ، ويفضل حمايته من الضوء.
- قم بشراء المعدات التالية: ميزان ، ماكينة حلاقة عادية للفراء ، وماصات ، وأطراف بحجم مناسب ، ومسطرة عادية ، وكاميرا رقمية ، ومفكرة ، وقلم أو كمبيوتر لتسجيل الورم الحليمي ، ونظام تخدير استنشاق أو مقبض فأر بفتحة في الجزء الخلفي ، ونظام تخدير ثاني أكسيد الكربون للتضحية بالفئران.
فئة < ص = "jove_title" >
2. تحريض الورم الحليمي الجلدي والترويج له
- احلق جلد الظهر ووزن. في وقت لاحق ، احلق الجلد عند الحاجة ولكن ليس في وقت التعرض للمواد الكيميائية.
ملاحظه: كن حذرا عند الحلاقة حول الورم الحليمي وتجنب إجراء أي جروح على الجلد. قم بوزن كل كل أسبوعين لملاحظة أي فقدان محتمل للوزن.
- ضع 50 ميكروغرام من DMBA في 200 ميكرولتر من الأسيتون موضعيا على المنطقة المحلوقة باستخدام ماصة بعد 48 ساعة من حلق الفراء. إذا لزم الأمر ، قم بتقييد باستخدام التخدير بالاستنشاق الخفيف أو مقبض الفأر.
- بعد 7 أيام ، أعط جرعة TPA الأولى. ضع 5 ميكروغرام من TPA في 200 ميكرولتر من الأسيتون موضعيا باستخدام ماصة 2x في الأسبوع ، ويفضل أن يكون ذلك يومي الاثنين والخميس أو الثلاثاء والجمعة.
- عد الورم الحليمي وتسجيله وتصويره كل أسبوع. تعتبر الكتلة الملموسة التي يزيد قطرها عن 1 مم ورما حليما إذا بقيت أطول من أسبوع واحد. ضع علامة على كل ورم حليمي على الخريطة وقم بإدراج حجمه كل أسبوع - قم بتخزين الصور الرقمية.
